| Характеристика | Варианты |
| Размер | Точечные (до 1 мм) мелкие (1-2 мм)средние (2-4мм) крупные(4-6мм) |
| Форма | Круглые, розеткообразные, листовидные |
| Поверхность | Гладкая,морщинистая, исчерченная, плоская,выпуклая, вдавленная |
| Цвет | Бесцветные, белые,желтые и др. |
| Прозрачность | Прозрачные или опалесцирующие |
| Рельеф | Гладкий, шероховатый |
| Консистенция | Сухие, влажные, сочные(слизистые) |
| Контур края | Ровный, волнистый, бахромчатый |
| Внутренняя структура | Аморфная, зернистая, волокнистая |
Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида или разновидности, выращенной на питательной среде
Бактериологический метод диагностики инфекционных заболеваний основан на выделении чистой культуры бактерий из исследуемого материала и последующей идентификации выделенных микроорганизмов по тинкториальным, морфологическим, культуральным, биохимическим и антигенным свойствам а также по результатам фаготипирования и бактериоцинотипирования.
Выделение чистой культуры микроорганизмов является обязательным и ключевым, принципиально важным моментом бактериологического исследования
Достоинства и недостатки бактериологического метода исследования
| Достоинства | Недостатки |
| А) высокая степень достоверности полученных результатов Б)возможность получения дополнительных ценных сведений об антибиотикорезистетности выделенной культуры бактерий В)возможность проведения эпидемиологического исследования | А) длительность Б)высокая трудоемкость В)ограниченные возможности культивирования |
Этапы выделения чистой культуры бактерий, их идентификации
1 этап – взятие исследуемого материала, микроскопирование, посев на обогатительные и дифференциально-диагностические среды
2 этап – изучение культуральных свойств, ориентировочная микроскопия. Пересев подозрительных колоний на скошенный агар для изоляции чистой культуры
3 этап – определение чистоты выделенной культуры, изучение ее биохимических и антигенных свойств, фаготипирование, бактериоцинотипирование
4 этап – учет полученных результатов, окончательная идентификация, определение чувствительности культуры к антибиотикам
Основные этапы бактериологического исследования при анаэробной инфекции. Методы создания анаэробиоза
Отличие питательных сред, применяемых при выращивании анаэробных бактерий состоит в присутствии повышенного количества углеводов
Особенности бактериологического исследования при анаэробной инфекции
1. Посев на обогатительные среды (тиогликолевая, Китта-Тароцци)
2. Пересев на плотные среды (сахарный, кровяной агар) для получения изолированных колоний.
3. Пересев бактерий из изолированных колоний на среду Китта-Тароции после предварительной ориентировочной микроскопии.
4. Изучение биохимических и антигенных свойств для идентификации анаэробов
5. Учет полученных результатов
Методы создания анаэробиоза
А.Физико-механическая изоляция от кислорода
а ) использование анаэростата
б) посев уколом в высокий столбик сахарного агара
в ) метод Вельон-Вельяла - из пробирок с серийными разведениями "почвенной болтушки" (взвесь почвы) вносят в расплавленный сахарный агар, содержимое набирают в пастеровскую пипетку и запаивают, для получения роста инкубируют в термостате при 37оС в течение 2-3 дней.
Б.Применение химических поглотителей кислорода
а) метод Аристовского -использование химических поглотителей кислорода, таких как натрия гидрокарбонат или гидросульфат
б) добавление к обычным питательным средам редуцирующих и адсорбирующих кислород веществ - кусочков печени, селезенки, мышечной ткани, комочков ваты, сульфата натрия, сульфата железа и др. Примеры - среда Китта-Тароцци, Вильсон-Блера (МПА+глюкоза+Na2O2+FeCl3)
В.Биологический метод Фортнера - одновременное выращивание на чашках Петри, герметично закрытых культур аэробных и анаэробных бактерий.
Оформление протокола
Подпись преподавателя
ЗАНЯТИЕ № 7
“Действие физических и химических факторов на микроорганизмы. Стерилизация и дезинфекция. Химиотерапевтические препараты. Антибиотики”.
К физическим факторам, оказывающим влияние на развитие бактерий относят
1.Температуру 2.Реакцию среды (рН) 3.Влажность 4.Ионизирующую радиацию
5.Ультразвук 6.Давление (атмосферное и осмотическое)
Действие химических факторов
Классы химических веществ, оказывающие противомикробное действие:
-галогены (йод, хлорамин) - окислители (перекись водорода) - щелочи (аммиак)- спирты (этанол, пропанол и др.) - альдегиды (формальдегид, уротропин)
- соли тяжелых металлов - производные оксихинолина - производные 4-хинола - нитрофураны- триклозан - фитонциды - красители -антибиотики
Понятие контаминация - загрязнение; деконтаминация - устранение загрязнения
Понятие об асептике и антисептике
Асептика - система мероприятий, предупреждающих попадание микроорганизмов из окружающей среды в ткани или полости человеческого организма при лечении или профилактике с целью создания безмикробной зоны или таковой с резко сниженным микробным обсеменением
Антисептика- система лечебно-профилактических мероприятий, направленная на уничтожение микроорганизмов, способных вызвать инфекционный процесс в организме и поврежденных тканях
Микробная деконтаминация - полное или частичное удаление микроорганизмов с объектов внешней среды и биотопов человека с помощью факторов прямого повреждающего действия
Стерилизация - полное уничтожение вегетативных форм микробов и их спор
Режим стерилизации- это совокупность условий (время, температура, давление и др.), обеспечивающих уничтожение микроорганизмов
Способы стерилизации
| Методы | Применяемые аппараты | Режим | Надежность | Объекты стерилизации |
| Прокаливание в огне | Спиртовая или газовая горелка | До красного накаливания | полная | Бактериальные петли и иглы, мелкий инструментарий |
| Кипячение | стерилизатор | 100оС 45 минут | Неполная (остаются споры) | Шприцы, стекла, др.предметы |
| Сухой жар | Сухожаровой шкаф | 170-220оС 45- 60 минут | полная | Стеклянная Посуда |
| Пар под давлением | автоклав | 112оС 0,5 атм 30 минут 121оС 1 атм 15 минут 134оС 2 атм 15 минут | полная | Питательные среды, посуда, инструментарий, инфекционный материал |
| Текучий пар -однократно -дробно | Аппарат Коха Автоклав (открытый) | 100оС 30-40 мин 100оС по 20-30 минут в течение 3-х дней | Неполная Полная | Питательные среды с углеводами, витаминами |
| Тиндализация | Водяная баня | 56оС в течение 6 дней, в первый день - 2 часа, в остальные - по 1 часу | полная | Витамины, сыворотка крови |
| Пастеризация | Водяная баня | 70-80оС | неполная | Молоко, вино, соки, пиво |
| Фильтрация | Мембранные фильтры | Под давлением или вакуумом | неполная | Сыворотка крови, антибиотики |
| Облучение | БУФ-15, -30 | Несколько часов | неполная | Воздух помещений |
| Химические вещества | меркаптоэтанол, цианиды, арсениты | неполная | Растворы, не подлежащие температурным воздействиям |
К дробным методам стерилизации относят - стерилизацию текучим паром, тиндализацию
Методы контроля эффективности стерилизации
Физический- использование максимальных термометров и манометров
Химический - применение химических веществ с определенной точкой плавления (сера, бензойная кислота, точка плавления 110-120оС)
Биологический- использование спор микроорганизмов
Дезинфекция - направленное уничтожение патогенных микроорганизмов с помощью химических веществ и физических методов
Наиболее распространенные дезинфицирующие вещества - хлорная известь, хлорами, фенол, лизол, перекись водорода
Химиотерапевтические препараты - химические вещества природного происхождения или синтетические, оказывающие избирательное воздействие на возбудителей инфекционных заболеваний.
Химиотерапевтический индекс - отношение максимально переносимой дозы к дозе, оказывающей противомикробное действие, должен составлять не менее 3.
Основные группы химотерапевтических препаратов
- Фторхинолы
- Сульфаниламиды
- Производные нитрофурана
- Алкалоиды
- Производные оксихинолины
- Соли тяжелых металлов
Требования, предъявляемые к химиопрепаратам.
Основные
- антимикробное действие на возбудителя
- специфичность антимикробного действия
- безвредность для макроорганизма
- сохранение активности в организме
Дополнительные
- хорошая растворимость и выводимость
- сохранение противомикробной активности в выделениях макрорганизма
- выведение из организма определенным путем
Антибиотики
Открытие антибиотиков базируется на изучении микробного антагонизма.
Антибиотики - биологически активные вещества, выделяемые микоорганизмами, растениями, тканями живого организма а также их производные и полученные синтетически аналоги, избирательно подавляющие рост микроорганизмов и безвредные для человека.
Антибиотики классифицируются
- по происхождению
природные, синтетические, полусинтетические
- химическому составу
1) беталактамиды (пенициллины, цефалоспорины),
2) тетрациклин и его производные
3) аминогликозиды (стрептомицин, неомицин, мономицин, канамицин и др.)
4) макролиды (эритромицин, олеандомицин)
5) левомицетин
6) рифампицины
7) полиеновые - нистатин, леворин, амфотерицин В
- механизму действия
1) Ингибирование синтеза клеточной стенки - пенициллины, цефалоспорины
2) Нарушение функций ЦПМ - полиеновые, полимиксины
3) Ингибирование синтеза белков на рибосомах - аминогликозиды, тетрациклины, левомицетин, макролиды
4) Ингибирование ДНК-зависимой РНК-полимеразы
- по спектру действия
1.Узкого спектра - действуют на грамположительную флору, гноеродные кокки, спирохеты - пенициллин, полиеновые антибиотики
2.Широкого спектра - обладающие активностью в отношении многих как грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов - цефалоспорины 3-го поколения, тетрациклины, макролиды, аминогликозиды, рифампицин
- по конечному результату
1.Бактерицидного действия - гибель бактерий (пенициллины, цефалоспорины, аминогликозиды, рифампицин)
2.Бактериостатического действия - прекращение роста и размножения микроорганизмов -(левомицетин, тетрациклины, макролиды)
- по группам чувствительности
1. Антибактериальные
2. Противогрибковые (нистатин, леворин)
3. Противопаразитарные
4. Противоопухолевые - (рубомицин, брунеомицин)
- по способу получения
1) природные 2) синтетические 3) полусинтетические
- по очередности назначения
1)антибиотики выбора - назначаемые в первую очередь при данном виде инфекционной патологии
2)антибиотики резерва - применяемые во вторую очередь в случае неэффективности антибиотиков выбора. Характеризуются тем, что приобретенная устойчивость микроорганизмов к антибиотикам резерва развивается сравнительно быстро.
Причины неудач и ошибок и неэффективности антибиотикотерапии
1) Назначение антибиотиков без достаточных на то показаний
2) Неправильный выбор антибиотиков и/или их комбинации
3) Назначение антибиотиков без определения чувствительно к нему микрофлоры
4) Применение антибиотиков в недостаточных дозах
Активность антибиотиков выражается в ЕД (единицах действия)
1 ЕД - минимальное количество антибиотика, подавляющее рост эталонного штамма микроорганизмов в определенном объеме питательной среды.Если антибиотик получен в химически чистом виде, его активность выражается весовых единицах.
Возможные осложнения и побочное действие антибиотиков
1)Аллергические реакции - пенициллины и др.
2)Токсическое действие- ототоксическое действие аминогликозидов с развитием неврита слухового нерва вплоть по полной потери слуха, токсическое действие на печень, почки
3) Иммунодепрессивное действие - угнетение кроветворения и созревания иммунокомпетентных и фагоцитирующих клеток с развитием лейкопении, агранулоцитоза - противоопухолевые антибиотики.
4) Дисбактериоз- развитие качественное и количественное нарушение соотношения нормальной микрофлоры различных биотопов за счет подавления нормальной микрофлоры - кандидозы
5) Феномен обострения - патологическое состояние, обусловленное выделением большого количества эндотоксинов за счет массовой гибели микроорганизмов при применении ударных доз антибиотиков
6)Формирование приобретенной антибиотикорезистентности
7)Появление антибиотикозависимых штаммов микроорганизмов
Механизмы развития приобретенной устойчивойсти к антибиотикам
| Генетические | Биохимические |
| Мутации генов в нуклеоиде | Инактивация антибиотиков ферментами |
| Передача R-плазмид | Изменение проницаемости ЦПМ для антибиотика |
| Изменения в строении объекта-"мишени" для антибиотика, развитие обходных путей метаболизма |
Пути преодоления антибиотикорезистентности
А) Соблюдение дозировок и интервалов введения
Б) Одновременное назначение антибиотиков, различающихся между собой по механизму своего антимикробного действия
В) Периодическая замена широко применяемых антибиотиков другими
Г) Использование препаратов, избирательно блокирующих репликацию R-фактора
Д) Инактивция ферментов, обусловливающих антибиотикоустойчивость
Е) Создание новых антибиотиков
Ж) Запрет на использование антибиотиков в качестве консервантов
З) Выявление носительства антибиотикоустойчивях микроорганизмов у людей и животных
Методы определения чувствительности к антибиотикам
а) метод дисков - определение диаметра зон задержки роста вокруг диска, содержащего соответствующее стандартное количество антибиотика 10мм и менее - микрофлора нечувствительна, 15-20 мм - малочувствительна 20 и более мм - чувствительна.Результаты могут оказаться недостоверными с антибиотиками, плохо диффундирующими в агар
б) метод серийных разведений - испытание культуры с различными концентрациями антибиотика, которые приготовлены методом серийных разведений
Методы определения концентраций антибиотиков в биологических жидкостях основаны на способности выявления различий зон подавления тестовых чувствительных микроорганизмов в изучаемом материале и в стандарте антибиотика (в отношении концентрации)