Структурные и функциональные компартменты клетки
АННОТАЦИЯ
Хорошо известно, что ядро в нейронах организовано в виде дискретных отсеков, участвующих в транскрипции и обработке РНК. Основные ядерные отсеки в нейронах включают в себя участки хромосом, ядрышко, ядерные пятна факторов сращивания, тельцаКахала и ядерные гвоздики. Усиление регуляции транскрипции в нейронах при хронических гиперосмолярных состояниях связано с
1) с укрупнениемядра и ядрышка
2) с дисперсией хроматина,
3) с уменьшением размера ядерных пятен,
4) с увеличение числа телец Кахала, участвующих в созревании сплайсинга малых ядерных рибонуклеопротеинов,
5) с пролиферацией фибриллярных центров ядрышка,
Эти изменения возвращаются после прекращение активации путем регидратации животных. В условиях индуцированного нейронального стресса
путем гипертонической инъекции солевого раствора, нейроны демонстрируют реакцию подавления
транскрипции. Это сопровождается конденсацией хроматина, перераспределением факторов сращивания,
уменьшение числа тел Кахала и микросегрегация фибриллярных и гранулированных
компонентов ядрышка и нарушение его фибриллярных центров.
Эти изменения постепенно восстанавливаются и через 24 часа после
индуцирования стресса наблюдается восходящая регуляция транскрипции. Эти данные иллюстрируют
зависимая от транскрипции организация и поведение ядерногокомпартмента в нейроне.
ВВЕДЕНИЕ
Ядро клетки организовано в отдельные отсеки и участвует в многоступенчатом процессе, связанном с
экспрессией гена, который включает транскрипцию, РНК обработку и экспортРНК. Структурная характеристика этих отсеков хорошо известна, поскольку классические ультраструктурные и цитохимические исследования Моннерон и Бернхард (1969). Эти отсеки состоят из сложного молекулярного механизма, который частично идентифицировали в течение последнего десятилетия, используя новые антитела и гибридизационные зонды, направленные на ядерныекомпоненты. В дополнение к хромосомным территориям, ядерные отсеки в ядре межфазных клеток включают ядрышко, отсеки фактора сращивания, тело Кахала и промиелоцитарный лейкоз. Самый известный купе является ядрышком, в основном участвующим в рРНК
биогенеза, хотя недавние экспериментальные данные указывают на его участие в обработке определенных
малых ядерных РНК и мРНК, а также в химической модификации некоторых тРНК. Фактор сплайсинга
отсеки (ядерные пятнышки) являются ядерными доменамиобогащенными как малыми ядерными рибонуклеопротеинами, участвующих в сплайсинге до мРНК, и другие факторы, не связанные с snRNP, для их распределения всайты активной транскрипции. Другим ядерным доменом является Кахал (спиральный), который концентрирует сращивание snRNP испецифический белок под названием p80 coilin. Он разделяетядро, ядерные составляющие фибрилларин, Nopp140, ДНК-топоизомераза I и малая нуклеолаза U3(sno) РНК. CB является зависимым от транскрипции ядерной органеллы, которая участвует в пути биогенеза факторов склеивания snRNP. Другие ядерные структуры с менее ясным функционалом значимость включает ядерные объекты и орган PML, который концентрируют продукт гена промиелоцитарного лейкоза, белка Sp 100 и небольшого модификатора ubiquitin I. Органы ПМЛ встречаются во многих типах клеток и характерно нарушаются при острой промиелоцитарной лейкемии. Супраоптическое ядро состоит из магноцеллюлярных
нейросекреторных нейронов гипоталамо-нейрогипофизальнойсистемы. Они включают два основных иммуноцитохимическихфенотипа, окситоцин и вазопрессин, экспрессирующие нейроны, которые демонстрируют аналогичную морфологию, но различные модели экспрессии генови реагировать на различные физиологические стимулы. Сывороточные нейроны играют фундаментальную роль в регуляции гомеостаза тела путем управления секрециейОТ и ВП от нейрогипофизавреакции на вариации осмолярности плазмы, родов,
илактации. Нейроны СОН обеспечивают особые структурные и функциональные преимущества для изучения организации и пластичности ядерных отсеков в обоих физиологических условиях и в ответ на экспериментальные условия повышения активности или подавление глобальной транскрипции активность, вызванная гиперосмолярностью и гипоосмолярностью. Во-первых, нейроны SON представляют собой крупные нейроны, которые имеют высокую транскрипцию, причем OT и VP мРНК являются особенно изобилие их соответствующих нейронных фенотипов. Во-вторых, ультраструктура ячейки ядра показывает очень четко определенные ядерные отсеки.
В-третьих, нейроны SON могут быть легко активированы или инактивированы invivo изменениями осмолярности плазмы, которые изменяют уровень выражения для конкретных ячеек и ведения домашнего хозяйства генов и специфического гормонального биосинтеза к этим нейронам. Наконец, эти нейросекреторные клетки, как и все нейроны млекопитающих, являются межфазными, которые не влияют на клеточный цикл об организации ядерных отделений.
АНАЛИЗ СВЕТОВОЙ МИКРОСКОПИИ КЛЕТОЧНОГО ЯДРА
Фрагменты нервной тканиранее зафиксированные в параформальдегиде, обеспечивают превосходное
сохранение нейрональнойперикарьи. Они позволяют рассмотрение пространственной организации ядерных отделенийво всем нейронном ядре прямымобследованием образцов или использованим конфокальной микроскопии. Таким образом,использование окрашивания пропидием иодидом для нуклеиновых кислотна препаратах сквоша, нуклеоплазма нейронов SON выглядит слабо помеченным из-за преобладающегодиспергированной конфигурации хроматина, тогда как интенсивно окрашенное ядрышко показывает сетчатую конфигурациюс зонами повышенной концентрации рРНК. Аналогично, вещество Ниссля, которое представляет собойцитоплазматические домены, обогащенные свободными полирибосомамии грубый эндоплазматический ретикулум,помечены в маргинальной цитоплазме. Окрашивание пропидиемйодид можно комбинировать с иммунофлюоресценцией,как показано на рис. 1А, где показана схема ядерной оболочки, окрашенной антителомантиламин B, молекулярный компонент ядерной плотной пластинки. Подготовка сквошаочень полезны для изучения ядерной ицитоплазматическое распределение полиаденилированныхмРНК вSON нейроны с использованием флуоресценции insitu гибридизациис поли (d) Т-зондом для обнаружения поли (А) РНКхвост ядерной и цитоплазматической мРНК.Внутри ядра поли (А) РНК концентрируется вядерные пятнышки, как сообщалось ранее в ненейрональных, в дополнение к слабому диффузномунуклеоплазматическомураспределению, в то время как ядрышко не имеет гибридизации
сигнала (рис.1В). Как и ожидалось, цитоплазма поли (А) РНК обогащается веществом Nissl, что предполагает
что полиаденилированныемРНК предпочтительносвязанные с полирибосомами (рис.1В).Организация и динамика ядрышка иЦБ в нейронах СОН могут быть исследованы на препаратах сквошаиммуноокрашеннымантифибриллариновым антителом,янтарный маркер плотного фибриллярного компонента(рис.1С) или с антикоилиновым антителом, которое в частности, обозначает CB (рис.1G, H). Как показано врисунке 1D, F, CB также концентрируют ДНК-топоизомеразуI и белка нейронов выживаемости (SMN), которыйучаствует в транскрипции рибосомных генов и в биогенезе сплайсингаsnRNPs, соответственно. Более того,препараты для сквоша допускают точный количественный анализот количества ядрышек и СВ в целомнейрональное ядро. Наконец, этопроцедура обеспечивает отличный подход к исследованиюорганизация и поведение ядерных пятенв ответ на изменения метаболической активности СОНнейронов с использованием иммунофлюоресценции с антителамикоторые признают факторы сращивания snRNP, которые являются
обогащенный как ядерными пятнами, так и СВ.
ЯДЕРНЫЙ ОБЪЕМ, НАДЕЖНЫЙ ДАТЧИКМЕТАБОЛИЧЕСКОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ СОН НЕЙРОНОВ
Хорошо известно, что содержание ДНК иглобальная транскрипционная активность являются основными детерминантамиядерного размера. В случае нейронов млекопитающих,несколько проточных цитометрических исследований показывают, что всеисследованные центральные и периферические нейронные типы
диплоидное количество ДНК. Следовательно, изменения размеров ядер, по-видимому,быть положительно связаны со скоростью транскрипции.Вслучай нейронных клеток SON, отмеченные увеличения как в клетке, так и вразмеры ядер связаны со стимулами, такими какхронической гиперосмолярности или лактации
которые приводят к усилению генов VP и OTи гиперсекреция их закодированных гормональных пептидов. В дополнение к генам OT и VP другие множественныеклеточные и домашние геныво время гиперосмолярности, что указываетчто ядерный размер тесно связан с общей транскрипционной активностью в нейронах СОН. Соответственно,размер ядер в нейронах SON уменьшается в условияхподавления транскрипции, таких как
хроническойгипоосмолярности, и на начальном этапе острый осмотический стресс. При хронической гиперосмолярности ядерный объем поднимается до максимального уровня в течение первых 24 часовобезвоживания, но устойчивое расширение ядерноготребуется для поддержания высокой скорости транскрипции надхронический период обезвоживания.Ядерные механизмы, связанные с расширением ядерногов основном связаны как с развёртыванием хроматинаи увеличением концентрации ядерных белков
и рибонуклеопротеиновые комплексы, участвующие в транскрипции, Обработка РНК и транспорт. Интересно, что ядро клетки нейронных клеток SONмогут вносить изменения в ядерный объем беззначительных изменений в количестве ядерной мембраны.Таким образом, при сравнительном анализе инвагинациифактор ядерной оболочки управления иактивированных нейронов SON, мы показали значительноеснижение ядерных инвагинаций после гиперосмолярныхактиваций, а периметр ядерного профиляочерченная ядерной оболочкой, остается постоянной. Это говорит о том, что, по крайней мере, вСонные нейроны, количество ядерной мембраны взрелые нейроны постоянны, а ядерные инвагинацииможет служить резервуаром ядерной мембраны дляприспосабливать быстрые изменения размеров ядер в зависимости отна транскрипционную активность.
ХРОМАТИНСКАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И REMODELING IN SON NEURONS
С помощью электронной микроскопии ядро клетки нейронов СОНпоказывает четко определенные ядерные отсеки, которыевключают хроматиновые домены, ядрышко и ядерныеорганеллы, расположенные в межхроматиновых областях (рис.2). Последние включают две структуры, содержащие RNP,кластеры зерен межхроматина и CBs (рис.2C, D),которые обогащены факторами склеивания snRNP. Более того,некоторые ядра нейронов СОН содержат ядерныйроллет, состоящий из пучка канальцев, около 8-10 нмв диаметре, что часто сопровождалось слегка волнистым(рис. 2Е).Организация хроматина в нейронных клетках SON
хорошо известный с классической электронной микроскопииисследования магноцеллюлярных нейросекреторных нейронов. Он характеризуется преимущественнодисперсной конфигурации с небольшими агрегатамиконденсированного хроматина, рассеянного по всемунуклеоплазма, вдоль ядерной оболочки, и на(рис.2А). Изменения в хроматинефигурация, связанная с вариациями транскрипциисообщили об электронном микроскопиикак ультратонких участков, так и замерзанияреплики клеточного ядра. Таким образом, устойчивое усилениетранскрипции при хронических гиперосмолярных состоянияхиндуцирует уменьшение количества конденсированного хроматинаагрегатов и общей релаксации хроматина,что приводит к усиленному состоянию эухроматина. Этиизменения в конфигурации хроматина являются обратимыми,так как появляются многочисленные агрегаты конденсированного хроматинаво всем ядре, когда активация
Сывороточные нейроны подавляются путем регидратации животных.Хроматиновые модификации четко отражают разворачиваемость /цикл складывания хроматинового волокна, приблизительно30 нмиз пакованных нуклеосом. Волокна хроматина неактивны в транскрипциии они должны быть развернуты в полинуклеосомальной области около 10 нмцепи для поддержки транскрипции активныхгены. Ремоделирование хроматинав нейронах СОН могут быть изучены путем замораживания-перелома
количественный анализ размера и распределенияядерные частицы, образующиеся при переломе ячейки
ядро. Перекрестное замораживание-разрушение волокон хроматина даеткрупные частицы диаметром ~ 20 нм, тогда какзамораживание-разрушение полинуклеосомных цепей приводит кменьшие частицы с 7-13 нм (рис.2В). Таким образом, вхронически стимулированные животные разворачивают хроматинволокна, содержащие активированные гены, включают значительныйзамена ядерных частиц большого диаметраменьшими. Послеподавление активации нейронов путем регидратации,распределение больших и малых ядерных частиц возвращаетсяк контрольным значениям. Кроме того, количественныеанализ ядер с замораживанием трещин показал, чторемоделирование хроматина является наиболее заметным в ядернойпериферии, чем в области ядра в условияхустойчивой регуляции транскрипции. Этот вывод усиливает понятиеупорядоченной компартментализации клеточного ядраи предполагает, что ядерная периферия может представлять собойотделение, обогащенное активной транскрипцией генов.
СОТОВАЯ СВЯЗЬ
СТРЕСС В СОН НЕЙРОНАХ
ОСУЩЕСТВЛЯЕТ ДРАМАТИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ХРОМАТИНСКАЯ КОНФИГУРАЦИЯ И ЭКСПРЕССИЯ C-FOS
Сонные нейроны также обеспечивают мощную модель длярасследовать изменения в ядерной организации в ответк нейронному стрессу. Один из гиперосмолярных наиболее распространенными стимулами являются внутрибрюшинная инъекциягипертонических (1,5 М) растворов NaCl. Этот стимул,что вызывает как осмотическое, так и стрессовое действие, вызывает временное снижение транскрипцииактивности в сочетании срезкие изменения в конфигурации хроматина ивыражение непосредственных ранних генов fos и jun
семейств.Влияние осмотического стресса на глобальную транскрипциюактивность нейронов СОН в разные моменты времениреакции стресса можно оценить путем измерениявключение 3H-уридинво вновь синтезированномРНК. Наши собственные результаты 3Обнаружение H-уридина указывает нарезкое раннее падение транскрипции, около 40% контролязначения, через 0,5 и 2 часа после внутрибрюшинногоинъекции гипертонического солевого раствора.За этим последовала поздняя фаза восстановления расширенного
транскрипция, до 137% контрольных значений, через 24 часаиндукции напряжений. На уровне электронной микроскопии,ранняя реакция стресса при подавлении транскрипциисопровождается конденсацией хроматина,что приводит к образованию крупных хроматиновых глыбвыровнены вдоль ядерной оболочки и вокругядролус. Пространственное распределениеэтих хроматиновых глыб указывает на то, что хроматин
конденсация представляет собой общий отклик клеткиядро, которое включает в себя все межфазные хромосомные территории.На самом деле аналогичная картина конденсации хроматинаиндуцируется тепловым ударным напряжением в культуре HEp-2клеток, предполагая, что этоизменение конфигурации хроматина является основным и общимкомпонент клеточного стрессового ответа. Хроматинможет быть подтверждена конденсация в нейронах SONиммунофлюоресценцией с использованием антинацетилированного
пан-гистонового антитела, которое обнаруживает яркие ядерные очагиобогащенных неацетилированными гистонами (рис.3А, В).уплотнение хроматина на ранней стадииосмотический стресс четко отражает инактивацию хроматинадомены, о чем свидетельствует отсутствие ацетилированныхH4 в конденсированных хроматиновых глыбах (рис.3C, D). Действительно, хорошо известно соотношение транскрипционных
активный хроматин с доменами гистонаацетилирование и важность ацетилирования гистоновдля ослабления гистонов-ДНК-взаимодействий. Этаможет представлять собой первый шаг к транскрипционнойкомпетентное состояние хроматина. Хроматиновая конденсация возвращаетсяЧерез 24 часа после инъекции гипертонического солевого раствора, когдавключение 3H-уридин был выше, чем при нестимулированномSON нейроны.Индукция реакции стресса в нейронах SONпутем гипертонической инъекции солевого раствора подтверждаетсяпереходная экспрессия мРНК c-fos и белка c-Fos. Интересно, что выражение cFosпики белка в 2 часа (рис.4А), когда ядраиз нейронов СОН содержат видные скопления конденсированныххроматина и имеют сниженную скорость 3Н-уридинрегистрации и больше не обнаруживается при24 часа, когда транскрипция регулируется. Выражениеc-Fos также ассоциируется в меньших масштабах,с выражением c-Jun (рис.4B). Это хорошо известночто белки Fos образуют гетеродимеры с белкамисемейств генов jun и CREB / ATF, которыеизбирательно связываются с консенсус-последовательностями ДНК, такие каккак сайты AP-1 и CRE в промоторной областицелевых генов. В результате белковые комплексы, содержащиеFos регулируют гены транскрипции, имеющие функциональныеAP-1 и CRE. В этом контексте электронная микроскопия иммуноцитохимиив нейронных клетках SON выявляет картинуc-Fos иммунореактивность по всей нуклеоплазмечто исключает ядрышко, конденсированный хроматинскопления, кластеры гранулы межхроматина и СВ (рис.5A). Этот шаблон окрашивания согласуется с представлениемчто экспрессия Fos широко распространена в эухроматине(диспергированных хроматинов) иактивные гены-мишени, содержащие последовательности AP-1 и / или CREлокализованы в этих хроматиновых доменах. В то время как
специфические гены нейронных клеток SON, такие как ген VP,могут быть активированы c-Fos в ответ на осмотический стресс,подавление глобальной транскрипции и хроматинаконденсация указывает на то, что многочисленные гены выраженыв нестимулированных нейронах преходящерепрессированных на ранней стадии стресс-реакции.Экспрессия белков Fos использовалась какметаболическое картирование в нейронах СОН во время беременности,родов, лактации и хронического обезвоживания. Напротив, конкретное выражениеc-Fos во время реакции раннего осмотического стрессамогут быть вовлечены в индукцию защитногореакция стресса, опосредованная активацией клеточногострессовых генов, а не в общей активации нейронов.На самом деле, ранняя индукция мРНК c-fosбыли продемонстрированы в нескольких типах клеток,
клеточные стрессоры, такие как тепловой удар и арсенит натрия. Это также сопровождаетсярезкое сокращение транскрипции,РНК-полимераза II и разрушение ядерной РНК.В заключение мы считаем, что гипертонический солевой растворлечение чрезмерно стимулирует нейронные клетки до степеничто он может привести к повреждению клеток и вызвать нисходящий потокядерный ответ защиты генома, в результатев обширной конденсации хроматина, подавлениетранскрипции и индукции связанных с стрессомгены, включая c-fos. Синтез связанных с стрессомбелки, которые служат в качестве молекулярных шаперонов, могут участвовать в прогрессивномвосстановление транскрипции и другие ядерные функцииво время поздней фазы ответа нейронов на гиперосмолярныестресс.
ИЗМЕНЕНИЯ В РАЗМЕРЕ И СТРУКТУРНОМКОНФИГУРАЦИЯ НУКЛЕОЛИ
В СВЯЗИ С МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТЬЮСОН НЕЙРОН
Важная цитологическая особенность магноцеллюлярногонейросекреторный нейрон - наличие крупных видныхнуклеолы, которые явно связаны свысокие требования биогенеза рибосомы к поддержкебиосинтез гормональных пептидов. Количественныйисследования препаратов для сквоша, окрашенных серебромпроцедура демонстрации ядрышек и CBsпродемонстрировали, что у контрольных крыс большинство нейронов СОНмононуклеолируют (72%), процентное содержаниебинуклеолированные клетки составляют 22%, и около 6% клеток имеюттри или четыре ядра. Среднее количество нуклеоловвклетка равна 1,35. В последнее времяпродемонстрировали в сенсорных нейронах ганглия, что среднее число ядрышек на нейрон уменьшается как
функция размера ячейки, приводящая к увеличению долимононуклеолированные клетки в больших размерах нейронов сбольшая транскрипционная активность.Вв этом контексте большая доля мононуклеолита
Сывороточные нейроны могут быть связаны с высокой скоростью метаболизмаэтой нейронной популяции. По ультраструктурному анализу,ядрышко проявляет сетчатую конфигурацию вкоторые появляются гранулированные и фибриллярные компонентысмешаны в нерегулярных цепях, которые включают несколько
фибриллярные центры, круглые плоские фибриллярные области, окруженныеоболочкой плотной фибриллярной составляющей(рис.5В). Ядро является сайтом транскрипциирДНК, обработки транскриптовpre-rRNA и созреванияпрерибосомы. В этой связи следует отметить, что вфизиологические условия ядрышечного размера отражает транскрипциюскорость ядрышка, что приводит к переменнойЯдерное накопление перерабатывающей пре-рРНК-белкакомплексов. В соглашениис этой точки зрения, существует обширная литература, демонстрирующаячто гиперосмолярная активация нейронов СОНприводит к значительному увеличению размера ядрышка,который возвращается для контроля значений после прекращения
осмотическая стимуляция путем регидратации животных.В дополнение к вариациям размеров ядрышка, измененияорганизация фибриллярных и гранулированных компонентовядрышка может быть вызвано вариациямиклеточная активность, связанная с гиперосмолярными состояниямиили даже циркадный ритм. Драматичныйизменения в ядрышковой морфологии СОНнейроны наблюдаются на ранней стадии
осмотического стресса, одновременно с глобальным понижением давлениятранскрипции. Такие изменения включаютчастичная сегрегация зернистых и фибриллярных компонентов,разрушение фибриллярных центров, которые содержатячеистая транскрипционная техникаи образование плотных фибриллярных микрошариковвнутри нуклеолярных промежутков и на ядрышке(рис.5C). Обе ячеистая сегрегация и нарушениефибриллярных центров являются морфологическими признакамихарактерно связанный с подавлением
янтарная транскрипция в других типах клетоки вернуться на этапе восстановленияреакции осмотического стресса. Молекулярная природаи функциональное значение ядрышковых микрошариковостаются неизвестными.
ОРГАНИЗАЦИЯ И ДИНАМИКАМАШИНОСТРОИТЕЛЬНАЯ МАШИНА PRE-MRNA
В СОН НЕЙРОНАХ
В созревании участвуют два ядерных органелла,ядерный оборот и цикл рециклингапремРНК
факторы сращивания, гранулы межхроматинакластеры (ультраструктурный аналог ядерногопятна) иЦБ. Ядерные пятна обогащеныв факторах сращивания и поли (А) РНК (рис.1В, I-K), но не включают тритированныйуридин и отсутствиеобнаруживая ДНК, указывая, что они не являютсятранскрипция. Вдополнение к роли ядерных спеклов, снабжающих премРНКфакторы сращивания к активным сайтам транскрипции,наличие поли (А) РНК повышает вероятностьих участие в некоторых стадиях созревания мРНКиэкспорт.В случае нейронов SON мы ранеесообщили о наличии нескольких гранул из интерхроматина
кластеров с помощью обычной электронной микроскопии иЭДТА-цитохимия для преимущественного окрашивания RNP. Эти кластеры состоят изплотно упакованные гранулы интерхроматина, 20-25 нм в(рис.2C), и часто появляются в прямой непрерывностис CB. Эти близкие пространственные отношения могутмолекулярный перенос между этими двумя ядерными. Динамическая организациякластеров гранулы межхроматина в SONнейроны могут быть продемонстрированы в условиях гиперосмолярногостресс. Таким образом, на ранней стадии нейрональнойстресс, когда драматическое подавление транскрипции, ромежуточные гранулы агрегированыв нескольких крупных кластерах. Однако этикластеры перераспределяются во множестве меньших агрегатовгранул интерхроматина во время позднего выздоровленияфазы реакции нейронального стресса при транскрипции. Для дальнейшегоадресуйте зависимое от транскрипции поведениекластеров гранулы межхроматина, мы выполнилииммунофлюоресценции с использованием направленного антителапротив U2B, сплайсирующегобелкаsnRNPкоторый, как известно, обогащен ядерными пятнами и
CBs. В контрольных нейронах СОН,U2B появляется в некоторых ядерныхспеклов и СВ, в дополнение к диффузной нуклеоплазматическойокрашивание (рис.1I). В условиях хроническогогиперосмолярного
активация SON нейронов, эти пятнышкиимеют тенденцию к увеличению числа и уменьшению размера, тогда какшироко известна локализация этого фактора сращиванияво всей нуклеоплазме (рис.1J). Напротив,когда сплайсинг до мРНК изменяется путем обработкис циклогексимидом, ингибитором синтеза белкакоторый истощает короткие коэффициенты сращивания белка в течение полураспада,окрашивание сращивания snRNPs перераспределяется в оченьнесколько крупных ядерных пятен, тогда как диффузный нуклооплазматический
окрашивание уменьшается (рис.1K). Динамическийповедение ядерных спеклов в нейронных клетках SON согласуетсяс недавними экспериментальными данными в ненейрональнойклеткечто факторы сращивания преимущественнодиспергированных в нуклеоплазме активнотранскрибирования клеток, тогда как эти факторы накапливаются вбольшие пятна в клетках с низкой скоростью транскрипции. Более того,
недавние исследования в живых клетках по динамикесплайс-фактор ASF, подключенный к GFP, продемонстрировалчто этот фактор сращивания переходит от ядерных пятен кактивные локусы генов, где связывающие факторы, взаимодействующие с.Что касается организации CB в нейронных клетках SON,они были первоначально описаны в этой группе нейроновHervasetal. С помощью электронной микроскопии,они появляются как ядерные включения, состоящие из агрегатовплотных спиральных нитей фибриллярной природыв матрице с более низкой плотностью. Иммуноглондный электронисследования микроскопии с антикоилиновым антителомпоказало, что coilin, маркер CB, специально расположен на плотном(рис.1D). По ультраструктурнымсеребра, мы показали, что это свернутое телоультраструктурный эквивалент круглого аргирофильного«Вспомогательное тело», обнаруженное Кахалом вядро нейронов. Более того,зависящее от транскрипции поведение CBs былопервоначально продемонстрирована в нейронах СОН, а затем
подтверждено в других популяциях клеток. Таким образом,количественный анализ среднего числа CBнаСНУ нейрон контроля, обезвоженный и регидратированныйживотные показали, что число CBувеличивается при активации нейронов и имеет тенденцию возвращатьсядля контроля значений после прекращения стимуляции нейроновпутем регидратации. Эти результатыбыли расширены до экспериментальной модели осмотического
стресс с использованием иммунофлуоресценцииантиколиномантитела. Колининиммуноокрашивание выявляетCBs в нейронах SON, которые появляются внуклеоплазмы или связанной с ядрышком (рис.1F).
Количество CB на нейрон резко уменьшаетсяв течение первых 2 часов после введения гиперосмолярного солевого раствораи затем увеличивается до достижения значенияв три раза больше контрольных нейронов в течение 24 часов.Временной ход этих изменений в числеCB коррелирует с циклом down / upregulation транскрипциинейронов СОН в ответ на осмотическийстресс. Кроме того, в условияхпонижающей регуляции транскрипциипоявляется преимущественно в несколькихперинуклеолярные колпачки, которые исчезают, когда нейрональныетранскрипция возобновляется. Эти перинуклеолярные капсулыпо-видимому, являются начальными этапами сборки СВ, и мы предлагаемчто новые ЦБ растут на поверхности ядрав условиях продолжающейся транскрипции.