Диагностические сыворотки

Иммунные диагностические сыворотки получают из крови животных (в основном кроликов), иммунизированных соот­ветствующими бактериями или антигенами.

Ι. Агглютинирующие сыворотки

Агглютинирующую сыворотку получают гипериммунизацией кроликов взвесью бактерий. В сыворотке определяют титр антител. Титром агглютини­рующей сыворотки называется то макси­мальное разведение ее, при котором происходит агглютинация с соответствую­щим микроорганизмом. Агглютинирующие неадсорбированные сыворотки применяются при идентифи­кации бактерий сначала в ориентировочной реакции агглютинации на стекле, далее в развернутой реакции агглютинации. Если изучаемый микроорганизм агглютинируется сывороткой до титра или до половины значения титра, его можно считать принадлежащим к тому виду, название которого указано на этикетке ампулы.

1. Агглютинирующая неадсорбированная брюшнотифозная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью S.enterica var. typhi. Применяется для серологической идентификации возбудителя брюшного тифа в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики брюшного тифа и паратифов.

2. Агглютинирующая неадсорбированная паратифозная В (паратифозная А) сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью S. enterica var.paratyphi B (var.paratyphi A). Применяется для серологической идентификации возбудителя паратифа В (паратифа А) в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики брюшного тифа и паратифов.

3. Агглютинирующая неадсорбированная сальмонелезная сыворотка Бреслау получаетсяпутем гипериммунизации животных взвесью S. typhimurium Breslau. Применяется для серологической идентификации сальмонелл Бреслау в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики сальмонеллезов.

4. Агглютинирующая неадсорбированная дизентерийная сыворотка Флекснера (Зонне) получается путем гипериммунизации животных взвесью шигелл Флекснера (Зонне). Применяется для серологической идентификации шигелл Флекснера (Зонне) в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики бактериальной дизентерии.

5. Агглютинирующая неадсорбированная поливалентная эшнрихиозная ОКВ сыворотка представляет собой смесь типовых эшерихиозных ОК сывороток О111:К58, О55:К59, О26:К60, О20:К84. Применяется в бактериологическом методе диагностики колиэнтерита в ориентировочной реакции агглютинации на стекле при отборе окрашенных колоний, выросших на средах Эндо или Левина, подозрительных на энтеропатогенные серовары.

6. Агглютинирующие неадсорбированные типовые эшерихиозные ОК сыворотки (О111, О55 и др.) получают путем гипериммунизации животных взвесью энтеропатогенных эшерихий соответствующего серовара. Применяются для серологической идентификации энтеропатогенных эшерихий в ориентировочной реакции агглютинации на стекле, далее в развернутой реакции агглютинации с живой культурой для определения термолабильного К- антигена и с кипяченой культурой для определения термостабильного О-антигена. Используются в бактериологическом методе диагностики колиэнтеритов.

7. Агглютинирующая неадсорбированная холерная О1 сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых возбудителей холеры. Применяется для серологической идентификации холерных вибрионов в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики холеры.

8. Агглютинирующая неадсорбированная бруцеллезная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью бруцелл. Применяется для серологической идентификации бруцелл в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики бруцеллеза.

9. Агглютинирующая неадсорбированная туляремийная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью туляремийных бактерий. Применяется для серологической идентификации возбудителя туляремии в реакции агглютинации. Используется в биобактериологическом методе диагностики туляремии.

10. Агглютинирующая неадсорбированная противодифтерийная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью возбудителей дифтерии. Применяется для серологической идентификации коринебактерий дифтерии в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики дифтерии.

11. Агглютинирующая неадсорбированная коклюшная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью возбудителей коклюша. Применяется для серологической идентификации возбудителей коклюша в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики коклюша.

12. Агглютинирующая неадсорбированная паракоклюшная сыворотка паракоклюша. Применяется для серологической идентификации возбудителей паракоклюша в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики паракоклюша.

13. Агглютинирующая неадсорбированная лептоспирозная сыворотка получается путем гипериммунизации животных взвесью лептоспир. Применяется для серологической идентификации лептоспир в реакции агглютинации. Используется в бактериологическом методе диагностики лептоспироза.

В настоящее время многие агглютинирую­щие сыворотки выпускаются адсорбированными монорецепторными, содер­жащими только специфические антитела-рецепторы, которые соответст­вуют определенному виду микроорганизма. Эти сыворотки используются только в реакции агглютинации на стекле и не требуют последующего разведения, т.е постановки развернутой реакции агглютинации.

Для получения таких сывороток применяют метод Кастелляни – метод адсорбции, который состоит в том, что при насыщении агглютинирующей сыворотки родственны­ми гетерогенными бактериями происходит адсорбция только группо­вых антител, а специфические антитела остаются в сыворот­ке. В зависимости от полноты истощения групповых агглютининов можно получить монорецепторные сыворотки – сыво­ротки, имеющие антитела только к одному рецептору-антигену.

1. Адсорбированная сальмонеллезная О сыворотка рецептор 9 получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых нагреванием сальмонелл группы D (например, S. enterica var. typhi). Полученная сыворотка содержит рецепторы 1, 9, 12. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 12 по методу Кастелляни. Применяется для определения групповой принадлежности сальмонелл к группе D в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифо-паратифозных заболеваний и сальмонеллезной инфекции.

2. Адсорбированная сальмонеллезная О сыворотка рецептор 4 получается путем гипериммунизации животных взвесью убитых нагреванием сальмонелл группы В (например S. enterica var.paratyphi B). Полученная сыворотка содержит рецепторы 1, 4, 5, 12. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 5, 12 по методу Кастелляни. Применяется для определения групповой принадлежности сальмонелл к группе В в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифопаратифозных заболеваний и сальмонеллезной инфекции.

3. Адсорбированная сальмонеллезная Н сыворотка рецептор d получается путем гипериммунизации животных взвесью живой культуры S. enterica var. typhi. Полученная сыворотка содержит О рецепторы 1, 9, 12, Vi и H рецептор d. Далее проводят адсорбцию групповых рецепторов 1, 9, 12, Vi по методу Кастелляни. Применяется для определения видовой принадлежности сальмонелл к виду S. enterica var. typhi в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики тифопаратифозных заболеваний.

4. Адсорбированная сальмонеллезная Н сыворотка рецептор i получается путем гипериммунизации животных взвесью живой культуры S.typhimurium Breslau. Полученная сыворотка содержит рецепторы О 1, 4, 5, 12 и H рецепторы i, 1, 2. Далее проводят адсорбцию групповых О рецепторов 1, 4, 5, 12 и Н рецепторов 1, 2 по методу Кастелляни. Применяется для определения видовой принадлежности сальмонелл к виду S. typhimurium Breslau в реакции агглютинации на стекле. Используется в бактериологическом методе диагностики сальмонеллезной инфекции.

ΙΙ. Преципитирующие сыворотки

Преципитирующие сыворотки получают гипериммунизацией животных преципитиногенами (белками, антигенами бактерий, экстрактами микробов). Титром преципитирующей сыворотки на­зывается то максимальное разведение ан­тигена, которое преципитируется цельной сывороткой

Преципитирующие сыворотки применяются при диагностике некоторых инфекционных заболеваний (менингит, сибир­ская язва, чума, туляремия, полиомиелит и др.); в судебно-медицинской практике для определения видовой принадлеж­ности белка, в санитарной практике для обнаружения соответствующих белковых веществ в продуктах при подо­зрении на фальсификацию.

1. Сыворотка преципитирующая белок человека получается путем гипериммунизации животных белком человека. Применяют для определения видовой принадлеж­ности белка в судебно-медицинской практике в реакции преципитации.

2. Сыворотка преципитирующая белок крупного рогатого скота получается путем гипериммунизации животных белком крупного рогатого скота. Применяют в судебно-медицинской практике для определения видовой принадлеж­ности белка; в санитарной практике для обнаружения соответствующих белковых веществ в продуктах при подо­зрении на фальсификацию в реакции преципитации.

3. Преципитирующая менингококковая сыворотка получается путем гипериммунизации животных менингококковым антигеном. Применяют для обнаружения менингококкового антигена в ликворе больного в реакции преципитации.

4. Преципитирующая сибиреязвенная сыворотка получается путем гипериммунизации животных сибиреязвенным антигеном. Применяют для обнаружения сибиреязвенного антигена в исследуемом материале в реакции термопреципитации по Асколи.

ΙΙΙ. Гемолитическая сыворотка

Гемолитическую сыворотку получают путем гипериммунизации животных взвесью эритроцитов барана. Титром гемолитической сыворотки называется то ее мак­симальное разведение, которое в объеме 0,5 мл в присутствии комплемента в рабочей дозе вызывает гемолиз 0,5 мл 3%-ной взвеси эритро­цитов барана в течение часа при температуре 37°С. Гемолитическая сыворотка применяется в реакции связы­вания комплемента (РСК.) в индикаторной системе (гемоли­тическая сыворотка+эритроциты барана). Используют в серологичской диагностике сифилиса, гонореи, микоплазменных, хламидийных инфекций, вирусных заболеваний и др.

ΙV. Комплемент

Комплемент представляет собой свежую или консервированную сыворотку морской свин­ки. Комплемент применяется в реакции связывания комплемента (РСК) и в реакции бактериолиза.

Перед постановкой каждого опыта проводят титрование комплемента и определяют его рабочую дозу.

Титром компле­мента является то его наименьшее количество, которое вызы­вает гемолиз 3%-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии гемолитической сыворотки (в тройном титре) в течение 30 ми­нут при 37°С В реакции связывания комплемента применяют рабочую дозу комплемента, увеличенную в сравнении с титром на 20-25%. Практически в качестве рабочей дозы бе­рется то количество комплемента, которое находится во второй пробирке, в которой произошел гемолиз.