Объектами являлись дети в возрасте до года, поступившие на лечение в ГКБ №4 г. Ижевска. Чтобы выявить причину заболеваний верхних дыхательных путей, исследовали носоглотку на наличие микрофлоры, исследования проводили в соответствии с Приказом Министерства Здравоохранения СССР № 535 от 22.04.85г.[2]
Были исследованы стафилококковые и стрептококковые инфекции. Материалом для изучения этиологии заболеваний дыхательных путей служили отделяемое зева и носа. При взятии материала для исследования учитывались следующие моменты:
- Взятие материала натощак или не ранее чем через 2-3 часа после приема пищи.[7,9]
- Отбор материала из зева и носа проводили разными стерильными тампонами, вмонтированными в пробирки, с соблюдением правила асептики.[2,7]
- Мазок из зева отбирали стерильным тампоном с использованием стерильного шпателя для фиксирования языка. Тампоном проводили по небным миндалинам, небным дужкам и задней стенке глотки, избегая касаний языка и слизистой ротовой полости.[2,7]
- Забор материала со слизистых передних отделов полости носа осуществляли одним стерильным ватным тампоном из обеих половин носа. Извлекали тампон из пробирки, вводили в правую ноздрю и вращательными движениями собирали материал с крыльев носа и верхнего угла носового отверстия. Повторяли манипуляцию для левой ноздри. Помещали тампон в пробирку.[2,7]
2.2. Используемые питательные среды и их приготовление для выявления бактерий рода Staphylococcus и Streptococcus
Для работы использовали 5% кровяной агар, желточно-солевой агар, агар с гретой кровью, энтерококкагар.
При приготовлении кровяного агара в качестве основы использовали сухой питательный агар. По прописи, указанной на этикетке, готовили 2% агар, pH 7,4-7,6. К расплавленному и охлажденному до 45ºС агару, соблюдая правила асептики, добавляли 5 мл дефибрилированной крови человека без антибактериальных препаратов (на 100 мл питательной среды 5мл крови). Смесь тщательно перемешивали, чтобы не образовалось пены, и разливали в стерильные чашки Петри, предварительно подогретые в термостате, слоем 3-4 мм. Слой агара должен быть равномерно окрашен в красный цвет. Хранили не более двух недель в целлофановых мешках при температуре 4-6ºС.[23]
Агар с гретой кровью (шоколадный агар) готовили следующим образом. К 100 мл расплавленного и охлажденного до 80ºС питательного агара (pH 7,4), добавляли 10мл дефибрилированной крови человека без антибактериальных препаратов, тщательно перемешивали, после чего помещали в водяную баню и постоянно встряхивая, держали при температуре 70-80ºС до тех пор, пока цвет не становился шоколадным (25-30мин). Как только агар охлаждался до 45ºС, его разливали в стерильные чашки Петри.[23]
Для приготовления желточно-солевого агара в качестве основы использовали элективный солевой агар для стафилококков. По прописи, указанной на этикетке, готовили 1,8-2% агар, pH 7,2-7,4. К 200мл расплавленного и охлажденного до 45-50ºС агара, соблюдая правила асептики, добавляли 20 мл желточной взвеси (асептически извлеченный из яйца желток взбалтывали со 100 мл изотонического раствора хлорида натрия). Смешивали тщательно агар с желточной взвесью, разливали по 20 мл в стерильные чашки Петри. Хранили в холодильнике в течение двух недель при температуре 4-6ºС. [2]
Для приготовления энтерококкагара навеску среды указанную на этикетке, размешивали в 1 л дистиллированной воды. Доводили до кипения и кипятили 1 минуту до полного растворения агара. Охлаждали до температуры 45-50ºС и разливали в стерильные чашки Петри. Хранили в течение двух недель в целлофановых пакетах при температуре 4-6ºС.[23]
2.3.Микробиологические методы идентификации рода Staphylococcus
2.3.1. Установление принадлежности культуры к роду Staphylococcus
Первичный посев проводили на чашках Петри с 5% кровяным, желточно-солевым и шоколадным агарами. Чашки с посевами инкубировали в термостате при температуре (37± 1)ºС в течение 24 часов. На следующий день доставали чашки из термостата и проводили анализ выросших колоний.
Ход исследования
Колонии стафилококков идентифицировали от других колоний по следующим признакам. Для стафилококков характерны белые, желтые, золотистые колонии. У микрококков колонии окрашены, как правило, в желтый или розовый цвета. Дополнительным тестом служил характер роста на 5% кровяном агаре. При выявлении стафилококков учитывали, что подавляющее большинство штаммов S. aureus и некоторые штаммы S.epidermidis глагол забыли! эритроциты, образуя прозрачную зону гемолиза вокруг колоний. Микрококки гемолитическими свойствами не обладают.[2]