Лабораторная работа 1. Обмен липидов




Опыт 1. Переваривание жиров. Влияние желчных кислот на активность панкреатической липазы .

Расщепление жиров в кишечнике на глицерин и высшие жирные кислоты происходит главным образом при участии липазы поджелудочной железы. Триглицериды распадаются на глицерин и жирные кислоты. Жирные кислоты можно обнаружить титрованием щелочью. Желчные кислоты эмульгируют жиры, увеличивая их поверхность соприкосновения с липазой, а также активируют липазу.

В колбочку наливают 20 мл молока и нейтрализуют, приливая 2 капли раствора фенолфталеина и 4 капли 10% раствора гидроксида натрия, а затем – по каплям 0,1 н. раствор гидроксида натрия до слабо-розовой окраски. Из нейтрализованного молока готовят опытные пробы согласно таблице. В качестве источника липазы используют препарат панкреатин. Пробы оставляют при комнатной температуре.

№ пробы V молока, мл m панкреатина, мг V желчи, мл V воды, мл Результаты титрования (в мл) 0,1 н. раствором NaOH через t, мин:
       
      -          
        -        
    -   -        

Через заданные промежутки времени от начала инкубации пробы титруют 0,1 н. раствором NaOH до слабо-розовой окраски, после чего вновь оставляют при комнатной температуре. Количество израсходованной щелочи фиксируют в таблице. Каждый раз оттитровывается то количество жирных кислот, которое освобождается из жира молока при его гидролизе липазой за данный отрезок времени (15 минут).

Напишите уравнение расщепления триглицерида липазой. Изобразите графически динамику расщепления жира липазой для каждой пробы, откладывая на оси абсцисс время в минутах, а на оси ординат - количество 0,1 н. раствора NaOH (в мл), израсходованного на нейтрализацию жирных кислот, образовавшихся за данное время. Выразите активность липазы как концентрацию карбоксильных групп жирных кислот, образовавшихся в 100 мл молока за все время исследования, пользуясь следующей формулой:

,

где С - концентрация СООН-групп, образующихся в 100 мл молока (г/100 мл); 0,1 - нормальность раствора NaOH; V- объем 0,1 н. раствора NaOH, израсходованный на титрование 5 мл молока за все время инкубации (сумма всех титрований), мл; 5 - объем молока в титруемой пробе, мл. На основании хода кривых на графике и полученных данных концентрации карбоксильных групп сделайте вывод о зависимости активности липазы от присутствия желчных кислот.

Опыт 2. Количественное определение общего холестерина в сыворотке крови прямым методом по реакции Златкис – Зака. Метод основан на реакции холестерина с уксусной и серной кислотами в присутствии хлорида железа. Вероятно, происходит дегидратация холестерина и его окисление.

К 0,1 мл сыворотки крови прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа, перемешивают. Готовят контроль: к 0,1 мл дистиллированной воды прибавляют 3 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл рабочего раствора хлорида железа. Оставляют на 15 минут. Колориметрируют против контроля на фотоэлектроколориметре при длине волны 510-560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см. Из стандартного раствора холестерина готовят разведения, как указано в таблице.

№ пробирок Стандартный раствор холестерина, мл Ледяная уксусная кислота, мл Рабочий раствор хлорида железа, мл Содержание холестерина в пробе, мг%
  0,1 3,0 2,0  
  0,2 3,0 2,0  
  0,3 3,0 2,0  
  0,4 3,0 2,0  
  0,5 3,0 2,0  

Через 20 минут пробы фотометрируют против контроля. По результатам строят калибровочный график. По калибровочному графику определяют содержание холестерина в сыворотке крови. Норма содержания холестерина в сыворотке крови – 120-250 мг% (3,12-6,50 ммоль/л).

Контрольные вопросы

1. Клинические симптомы стеатореи, характеризующейся избытком липидов в кале, обусловлены чаще всего 2 причинами: а) недостаточной секрецией желчных кислот; б) отсутствием секрета поджелудочной железы. Почему эти причины приводят к появлению липидов в кале?

2. Объясните, почему у пациентов со сниженной секрецией бикарбонатов поджелудочной железой даже при нормальной секреции липазы и колипазы развивается стеаторея?

3. Почему чаще встречается гиперхолестеролемия, а не гипохолестеролемия?

4. Как изменится синтез холестерина при питании только растительной пищей? Почему?

5. Укажите, в каких органах происходит синтез холестерина «на экспорт».

6. В чем различие функций фосфолипидов и триацилглицеролов?



Поделиться:




Поиск по сайту

©2015-2024 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2017-11-19 Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных


Поиск по сайту: