Опыт 6. Определение содержания амино-амиачного азота.




Принцип метода: метод основан на титровании щелочью свободных карбоксильных групп в мясном фильтрате в присутствии формалина. Свободные аминогруппы блокируются формалином, а свободные карбоксильные группы оттитровываются щелочью.

Характерными продуктами гниения мяса, как отмечалось раньше, являются свободные аминокислоты и аммиак, количество которых зависит от глубины гнилостною распада. Следовательно, изменяется суммарное количество аминного и аммиачного азота, которое нарастает при порче мяса. Суммарное количество аминного и аммиачного азота.

Таблица10.

Свежее Сомнительной свежести Несвежее
На 100 г мяса
До 80 мг 80- 130 мг Более 130 мг

Реактивы и оборудование: 25 г измельченного мяса, дистиллированная вода, колба на 100мл, 10% раствор алюминиевых квасцов и насыщенный раствор едкого бария, 1% раствор фенолфталеина, бумажный фильтр, марля.

первый смешанный индикатор, состоящий из смеси равных количеств 0,1 % - ных растворов нейтрального красного и метиленовой синьки, 0,1 н раствор гидроксида натрия, нейтральный формалин (нейтрализованный по первому смешанному индикатору), второй смешанный индикатор, состоящий из одной части 0,1%-ного раствора тимол - синего и трех частей 1%-ного раствора фенолфталеина в 50%-ном спирте.

Ход работы:

1. 25г измельченного мяса растирают в ступке с водой, переносят в колбу, доведя объем содержимого до 100 мл.

2. Колбу закрывают крышкой, встряхивают в течение 5 минут, затем.фильтруют через три слоя марли.

3. Для осаждения белков берут 40мл мясной вытяжки, добавляют 10% раствор алюминиевых квасцов и насыщенный раствор едкого бария.

4. После осаждения белков определяют количество добавляемых осадителей: вначале устанавливают количество едкого бария, необходимое для нейтрализации определенного количества квасцов, в колбу берут 10мл последнего раствора, добавляют 5 капель 1%-ного раствора фенолфталеина и титруют насыщенным раствором едкого бария, после чего рассчитывают количество реактивов, необходимое для осаждения белков.

Например: для нейтрализации 10мл 10% раствора квасцов израсходовано 8мл насыщенного раствора гидроксида бария, т.е. это соотношение равно 10:8=2,5. Отсюда для осаждения белков в 40мл фильтрата следует взять 10 мл х 2,5 = 25мл, квасцов и 8 х 2,5 =20 мл едкого бария.

5. Установленное количество осадителей приливают в колбу с фильтратом, доводят ее содержимое до 100мл

6. Вытяжку фильтруют через бумажный фильтр, в полученном фильтрате определяют амино-аммиачный азот.

7. К 20мл полученного фильтрата, добавляют 0,3 мл первого смешанного индикатора и титруют 0,1 н. раствором гидроксида натрия до перехода окраски фильтрата из фиолетовой в зеленую.

8. В колбу с исследуемым содержимым приливаем 10мл нейтрального формалина и 03мл второго индикатора, в результате чего появляется сине­ - фиолетовое окрашивание.

9. Содержимое титруем 0,1 н. раствором гидроксида натрия. Переход цвета из ярко - зеленого в фиолетовый, считают концом титрования.

10. Параллельно ставят контроль. В качестве контрольного раствора берут такое же количество растворов алюминиевых квасцов и едкого бария, что и для осаждения белков, доводят до 100мл дистиллированной водой и дают отстояться 10 минут. Для опыта берут 20мл этого раствора.

Содержание амино-аммиачного азота рассчитывают по формуле:

Х= 1, 4 х 100 х 100 (У - У 1) х100: 25 х 40 х 20, где

X - количество амино - аммиачного азота в мг на 100 г мяса в опытной пробе; У- количество 0,1 н.раствора щелочи, пошедшее на титрование в мл; У1 - количество 0,1 н. раствора щелочи, пошедшее на титрование в контроле в мл;

1,4 - количество азота в мг, эквивалентное количеству едкого натра в 1 мл 0.1н.раствора;

100-количество дистиллированной воды, взятое для приготовления;

100-разведение фильтрата после осаждения белков;

100- пересчет на 100г мяса;

25- навеска мяса;

40- количество фильтрата, взятое для осаждения белков;

20- количество фильтрата, взятое для титрования, после осаждения белков.

Упражнения:

1. Написать уравнение реакции восстановительного дезаминирования лейцина.

2. Написать уравнение гидролитического дезаминирования аланина.

3. Написать уравнение реакции внутримолекулярного дезаминирования для аминокислоты валина.

4. Написать уравнение реакции окислительного дезаминирования для аминокислоты аланина.

5. Из аминокислот триптофана и тирозина в результате дезаминирования и декарбоксилирования образуются крезол, индол, скатол, фенол, аммиак и углекислый газ. Написать уравнения этих реакций.

6. В процессе гниения из аминокислот цистина, цистеина и метионина выделяются сероводород, аммиак и образуются меркаптаны. Написать уравнения этих реакций для цистеина.

7. Написать реакции декарбоксилирования лизина, гистидина и глицина, в результате которых, образуются ядовитые вещества.



Поделиться:




Поиск по сайту

©2015-2024 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2017-04-04 Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных


Поиск по сайту: