БЕЛОРУССКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ
БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
Кафедра биохимии
▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬
БИОХИМИЯ
ЛИПИДОВ
Практикум для студентов биологического факультета
Специальности 1-31 01 01 «Биология»,
Специализации 1-31 01 01 – 05 «Биохимия»
▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬▬
МИНСК
УДК 577: 612.
ББК в.р.
Б 63
Составитель
Н. М. Орел
Рекомендовано
Ученым советом
биологического факультета
6 октября 2006 г., протокол № 2
Рецензенты:
кандидат биологических наук, доцент Р. А. Желдакова;
кандидат биологических наук, доцент Е. А. Храмцова
Биохимия липидов: практикум для студентов биол. фак. спец. 1-31 01 01 «Биология», специализации 1-31 01 01 – 05 «Биохимия» / сост. Н. М. Орел. – Минск: БГУ, 2007. 35 с.
В практикуме приводятся методы количественного определения разных классов липидов в тканях, способы их разделения методами хроматографии, колориметрические методы исследования липидов.
Для студентов биологического факультета БГУ специальности 1-31 01 01 «Биология», специализирующихся на кафедре биохимии.
УДК 577: 612
ББК в.р.
© БГУ, 2007
ПРЕДИСЛОВИЕ
В экспериментальной биохимии находят применение огромное число методов их модификаций. Само собой разумеется, что с разработкой новых многие ранее используемые методы теряют свое значение в силу недостаточной специфичности или чувствительности, недоступности некоторых реактивов или излишней сложности. Разобраться в нагромождении методических рекомендаций без серьезной практической подготовки достаточно трудно. Настоящий практикум позволяет освоить соответствующие требованиям современной науки методические приемы выделения, разделения и количественного определения основных классов липидов и их отдельных представителей.
Главное место в пособии отведено описанию наиболее широко используемых приемов анализа общей фракции липидов, фосфолипидов, гликолипидов, жирных кислот, холестерина в органах и тканях животного организма. Предполагается, что студентом будут выполнены 3–4 работы. Они подбираются так, что дают возможность на практике для исследования липидов применить хроматографические, фотоэлектроколориметрические, спектрофотометрические методы.
При выполнении каждой работы студент должен самостоятельно сделать расчеты, приготовить все необходимые растворы, провести эксперимент, оформить результаты в виде отчета, проиллюстрировать полученные данные таблицами и графиками, оценить достоинства и недостатки метода и результаты собственной работы.
ОСНОВНЫЕ ПРИЕМЫРАБОТЫ
С ЛИПИДАМИ
Липиды – вещества, имеющие различное химическое строение, но обладающие общим свойством: высокой растворимостью в неполярных растворителях. Они играют важную роль в процессах жизнедеятельности: образуют энергетический резерв, создают защитные термоизоляционные и водоотталкивающие покровы у животных и растений, защищают органы и ткани от химических воздействий. Являясь одним из основных компонентов биологических мембран, липиды влияют на их проницаемость, участвуют в передаче нервного импульса, создают межклеточные контакты, выполняют функцию вторичных мессенджеров в передаче сигналов в клетку. К липидам относятся многочисленные вещества гормональной природы (стероиды), а также холестерин, желчные кислоты и другие соединения. Различают нейтральные липиды (свободные жирные кислоты и их эфиры, моно-, ди- и триацилглицерины, стероиды, воски, терпены) и полярные липиды (глицерофосфолипиды, сфинго- и гликолипиды, цереброзиды).
При экстракции липидов принимают во внимание то, что они способны не только к гидрофобным взаимодействиям, но и к образованию водородных, электростатических и ковалентных связей (сложно-эфирных, амидных, гликозидных). Относительнонеполярные растворители (хлороформ, бензол, диэтиловый эфир) разрушают комплексы, образованные гидрофобными взаимодействиями в жировой ткани, хиломикроны, комплексы альбумина с жирными кислотами. Полярные растворители (этанол, метанол) разрушают водородные и электростатические связи. Их применяют в смеси со слабополярными растворителями при экстракции липидов из плазматических мембран, митохондрий, эндоплазматического ретикулума и других органоидов. Липиды, находящиеся в комплексах, образованных ковалентными связями, растворителями не экстрагируются. Их можно выделить только после гидролиза комплекса слабыми растворами кислот или щелочей в органическом растворителе.
Наиболее распространенным методом экстракции липидов является метод, предложенный Дж. Фолчем с соавторами (1951, 1958).
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ