1.Перед постановкой теста необходимо убедиться, что выделенная культура микобактерий туберкулёза не имеет посторонней микрофлоры.
2. Из культуры микобактерий в 0,9% растворе натрия хлорида готовят гомогенную взвесь, содержащую 500 млн микробных тел в 1 мл (оптический стандарт мутности 5 единиц).
3. Полученную взвесь разводят 0,9% раствором натрия хлорида (1:10) и вносят по 0,2 мл взвеси в каждую пробирку набора питательных сред.
4. Засеянные пробирки помещают в термостат при 37 °C и выдерживают в горизонтальном положении в течение 2–3 сут, чтобы скошенная поверхность питательной среды была равномерно инокулирована взвесью микобактерий туберкулёза. Затем пробирки переводят в вертикальное положение и инкубируют в течение 3–4 нед. Учёт результатов проводят через 3–4 нед.
На плотных средах культура считается чувствительной к той концентрации препарата, которая содержится в среде, если число колоний микобактерий, выросших на данной пробирке с препаратом, не превышает 20 при обильном росте на контрольной пробирке без препаратов.
Поскольку сроки выделения возбудителя из клинического материала на питательных средах составляют не менее 1–1,5 мес, результаты определения лекарственной чувствительности указанным методом можно получить не ранее чем через 2–2,5 мес после посева материала. В этом заключается один из основных недостатков метода.
Приложение 6
Культуральная диагностика туберкулеза с помощью автоматизированной системы
ВАСТЕС MGIT 960.
Основным недостатком классического метода выделения микобактерий на плотных средах является его продолжительность. Сокращение сроков культивирования микобактерий с сохранением или увеличением чувствительности и специфичности метода является основным направлением развития культуральной диагностики туберкулеза. Значительным шагом в развитии ускоренных методов культурального выявления микобактерий стала инновационная система BACTEC MGIT 960 (BD). Она представляет собой полностью автоматизированный комплекс для одновременной инкубации и мониторинга 960 пробирок (рис. 1). Культивирование микобактерий осуществляется в индикаторной пробирке MGIT, (MycobacteriaGrowthIndicatorTube) содержащей 7 мл модифицированной среды Middlebrook 7H9 содержащей флуоресцентный индикатор, свечение которого погашено кислородом. Размножающаяся микробная популяция активно поглощает кислород, высвобождая флуоресцентный компонент, который начинает светиться в луче ультрафиолетового света.
Данная система позволяет выявлять в клинических образцах большинство штаммов МБТ в течение 10-20 дней и определять лекарственную чувствительность культуры возбудителя в период, не превышающий двух недель.
Рис. 1. Автоматизированнасистема BACTEC MGIT 960.
Следует подчеркнуть, что BACTEC MGIT 960 является единственной полностью автоматизированной системой для определения лекарственной чувствительности микобактерий, которая обеспечивает ускоренное тестирование культуры ко всем препаратам первого ряда, в том числе и к пиразинамиду (рис. 2).
Как показали многочисленные испытания, внедрение диагностической цепочки, включающей, помимо традиционных плотных сред, систему ВАСТЕС MGIT 960, вдвое сокращает время получения культуры и определения лекарственной чувствительности микобактерий, увеличивает частоту обнаружения возбудителя в олигобактериальном материале от больных туберкулезом, а также повышает точность и воспроизводимость результатов микробиологического исследования.
Рис. 2. Определение ЛЧ МБТ с помощью системы ВАСТЕС MGIT 960.
Приложение 7
Комплексная принципиальная схема лабораторной диагностики проказы
Материал: соскоб со слизистой оболочки носа, пунктат или гистологический срез лепроматозных язв, отделяемое язв и др.
| Бактериоскопический метод | Аллергологический метод | Биологический метод |
| 1.Окраска по Граму (Гр + палочки) 2.Окраска по Циль-Нильсену (кислотоустойчивость). | Кожная проба с аллергеном M.leprae – лепромином. - всегда отрицательна при лепроматозной форме. | Заражение морских свинок - резистентны к M.leprae, - овокультура при заражении в желточный мешок, - культура человеческих фибробластов. |