Цель: Изучение нормальной микрофлоры различных экотопов организма человека.
Знать: Нормальную микрофлору организма человека и ее роль в жизнедеятельности человека.
Уметь: Провести микробиологическое исследование микрофлоры различных экотопов организма человека, оценить полученные результаты.
Контрольные вопросы:
1. Нормальная микрофлора организма человека: понятие, характеристика (облигатная и факультативная, пристеночная и полостная, условно-патогенная микрофлора).
2. Возрастные особенности формирования нормальной микрофлоры у новорожденных и детей раннего возраста (на примере микробиоценоза кишечника и вагины).
3. Влияние метода родоразрешения, условий пребывания в роддоме, характера вскармливания ребенка на формирование нормальной микрофлоры ребенка.
4. Микрофлора различных экотопов: кожи, верхних дыхательных путей, пищеварительной и урогенитальной систем.
5. Функции нормальной микрофлоры человека, влияющие на состояние здоровья.
6. Роль нормальной микрофлоры человека в развитии эндогенных инфекций.
7. Дисбактериоз у детей: причины возникновения в разные периоды развития, меры профилактики.
8. Микробиологическая диагностика дисбактериоза.
9. Препараты для коррекции нормальной микрофлоры человека (пробиотики).
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):
1. Изучить количественный и качественный состав микрофлоры кожи рук.
2. Изучить микрофлору вагины.
3. Изучить микрофлору кишечника детей, находящихся на грудном и смешанном вскармливании.
4. Учесть и оценить результаты бактериологического исследования на дисбактериоз кишечника.
5. Ознакомиться с био.препаратами: колибактерин, лактобактерин, бифидумбактерин, бификол. Указать, что они содержат, для чего и как применяются.
Методические указания к выполнению исследовательского задания:
I. Изучение количественного и качественного состава микрофлоры кожи рук.
Для определения количества микроорганизмов на единицу площади кожи (см2) в своих посевах, сделанных на предыдущем занятии, подсчитайте количество колоний микроорганизмов на один см2 и охарактеризуйте колонии каждого типа с учетом их культуральных и морфо-тинкториальных свойств (см. протокол занятия «Бактериологический метод исследования. II этап.). Полученные результаты занесите в протокол и сделайте вывод.
Микроорганизмы, в норме колонизирующие кожные покровы, представлены различными видами коагулазоотрицательных и реже коагулазоположительных стафиллококов (Staphylococcus spp.), сарцинами (Sarcina spp.), коринебактериями (Corynebacterium spp.), пропионобактериями (Propionibacterium spp.) и др. На коже здоровых людей обычно отсутствуют энтеробактерии (E. coli, Proteus spp., Klebsiella spp., Acinetobacter spp. и др.), дрожжеподобные грибы рода Candida, бактероиды (Bacteroides spp.). Количество аэробных микроорганизмов на коже здорового человека в среднем составляет 102-106 КОЕ/см2, а анаэробных – 104-106 КОЕ/см2. Концентрация микроорганизмов на коже более высокая в местах с повышенной влажностью. При этом анаэробные бактерии локализуются, в основном, на участках богатых сальными железами.
Имеется три группы методов сбора материала для исследования микрофлоры кожи. Это методы отпечатков (один из его вариантов Вы использовали в своей работе), смывов и биопсий. Более эффективными являются методы смывов и биопсий. Методами отпечатков выделяют меньшее количество микроорганизмов. Для получения полной картины о структуре микробной популяции кожи рекомендуется использовать все три группы методов.
II. Изучение микрофлоры вагины.
Промикроскопируйте демонстрационный препарат, окрашенный по Граму. Полученный результат внесите в протокол и сделайте вывод.
Нормальная микрофлора половых путей способствует сохранению здоровья женщины. Ведущее место в вагинальном микробиоценозе занимают лактобациллы (80-90 %), количество которых может достигать 109 КОЕ/мл. Выделяют более 6 видов лактобацилл: Lactobacillus acidophilus, L. plantarum, L. casei и др., объединенных общим названием – палочки Додерлейна (Doderlein). Кроме лактобацилл в состав влагалищного биотопа входят более 40 видов других видов бактерий, но их удельный вес не превышает 5%, а количество, в основном, составляет 103-104 КОЕ/мл. Это Bifidobacterium spp., Peptostreptococcus spp. (относятся к микрофлоре Додерлейна), Bacteroides spp., Staphylococcus spp., Corynebacterium spp. и др. Реже в составе нормальной микрофлоры обнаруживаются Mobiluncus spp., Mycoplasma spp., Gardnerella vaginalis. Поэтому при микроскопии мазка из влагалища, окрашенного по Граму, обнаружение единичных эпителиальных клеток соответственно фазе менструального цикла, единичных лейкоцитов или их отсутствие, доминирование лактобацилл (другие морфотипы либо отсутствуют, либо их количество исчисляется единичными микробными клетками в редких полях зрения) свидетельствует о нормофлоре. Морфологически лактобациллы представляют собой прямые или слегка изогнутые грамположительные не образующие спор палочки размером 1,0-10,0 х 0,5-1,2 мкм.
С дисбактериозом влагалища связано развитие бактериального вагиноза (БВ). БВ – это инфекционный невоспалительный синдром, характеризующийся чрезмерной концентрацией облигатно- и факультативно-анаэробных условно-патогенных микроорганизмов и резким снижением или отсутствием лактобацилл.
БВ – распространенная патология влагалища женщин детородного возраста. По данным различных исследований его обнаруживают у 21-33 % женщин. Наибольшую опасность БВ представляет для беременных женщин, т. к. может быть причиной многих осложнений в течении беременности, родов, послеродового периода у матери и патологией плода и новорожденного. Поэтому важной является профилактика БВ, своевременная диагностика и лечение, в т.ч. с использованием пробиотиков.
III. Изучение микрофлоры кишечника детей, находящихся на грудном и смешанном вскармливании.
Приготовьте фиксированные препараты из фекалий, окрасьте по Граму и промикроскопируйте. Полученные результаты внесите в протокол и сделайте выводы.
ЖКТ, особенно толстая кишка, является наиболее заселенным экотопом организма человека. Качественный и количественный состав микрофлоры меняется в течение жизни и зависит от возраста, характера питания и др. У детей, находящихся на грудном вскармливании, доминирует бифидофлора. Это крупные грамположительные прямые или разветвленные палочки. При искусственном вскармливании и при переходе на смешанное питание отмечается увеличение разнообразия грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов.
Микрофлора толстой кишки взрослого человека включает около 500 видов микроорганизмов и составляет до 30% сухой массы фекалий. Поэтому при микроскопическом исследовании выявляют разнообразные грамположительные и грамотрицательные палочки, кокки, извитые формы. Количество морфоваров микроорганизмов у взрослого человека может достигать 40, а в среднем составляет около 15.
В качестве самостоятельного микроскопический метод оценки состояния микрофлоры различных экотопов практически не используется, т.к. определение количества микроорганизмов в биоматериале, соотношения различных морфовариантов требует много времени. Кроме того, отсутствуют четкие критерии учета и оценки при проведении данного исследования. Предложенный голландскими исследователями компьютерный вариант микроскопического анализа фекалий, при котором анализируется не менее 100 полей зрения, а полученные результаты обрабатываются с помощью специальной программы, показал воспроизводимость результатов и рекомендован для практического использования.
IV. Бактериологическое исследование дисбктериоза кишечника.
Учтите результаты посева испражнений обследуемых на комплекс питательных сред с целью диагностики дисбактериоза, полученные данные внесите в бланк и сделайте вывод (см. приложение 1).
Дисбактериоз кишечника является актуальной проблемой в педиатрии. Он служит предвестником отклонений в физиологическом статусе ребенка. При дисбактериозе кишечника происходит угнетение иммунобиологических факторов организма и повышается восприимчивость к инфекционным заболеваниям, их затяжному, хроническому течению и развитию осложнений.
При дисбактериозе кишечника нарушаются процессы пищеварения и всасывания всех пищевых ингредиентов (белков, жиров, углеводов и др.), что приводит к гипотрофии, анемии, гиповитаминозам, ферментопатии. Снижение активности лизоцима способствует повышению уровня гистамина в органах и тканях и развитию различных аллергических реакций (пищевая аллергия, экссудативный диатез и т.д.). У 93-98 % детей с различными формами пищевой аллергии регистрируется дисбактериоз кишечника. Снижение колонизационной резистентности при дисбактериозе кишечника может привести к развитию эндогенной инфекции.
Причины развития дисбактериоза у детей:
- в период новорожденности: осложненное течение беременности и родов; бактериальный вагиноз у матери; позднее прикладывание к груди;
- у детей раннего возраста: неблагоприятный преморбидный фон; раннее искусственное вскармливание; частые ОРВИ на первом году жизни; инфекционная и (или) соматическая патология;
- у детей дошкольного и школьного возраста: нерациональное питание; наличие хронических заболеваний; гормональная перестройка организма;
- вне зависимости от возраста: длительная антибактериальная терапия; длительная терапия гормонами, нестероидными противовоспалительными препаратами; кишечные инфекции; оперативные вмешательства; первичные и вторичные иммунодефициты; проведение химио- и (или) лучевой терапии онкологических больных.
В этой связи актуальным является своевременное выявление дисбактериоза. Основным методом диагностики дисбактериоза является бактериологический метод.
V. Изучение био.препаратов.
Ознакомьтесь с препаратами пробиотиков (колибактерин, лактобактерин, бифидумбактерин, бификол и др.) и занесите результаты в таблицу.
| № пп | Название пробиотика | Что содержит | Для чего применяется | Как применяется |
| 1. | ||||
| 2. | ||||
| …. |
Вопросы для самоконтроля:
1. Назовите физиологические функции нормальной микрофлоры, определяющие ее положительную роль в организме человека.
2. Колонизационная резистентность и свойства микроорганизмов нормальной микрофлоры ее обеспечивающие.
3. Назовите основные факторы, приводящие к развитию дисбактериоза у детей разного возраста.
4. Охарактеризуйте основные клинико-микробиологические признаки компенсированного и декомпенсированного дисбактериоза.
5. Классификация препаратов, используемых для коррекции нормальной микрофлоры.
6. Обоснуйте применение гнотобиологической технологии в клинике при выхаживании недоношенных детей с врожденным иммунодефецитным состоянием.
7. Обоснуйте роль грудного вскармливания и сроков прикладывания к груди в формировании нормальной микрофлоры ребенка.
8. Назовите особенности состава микрофлоры влагалища в норме и при бактериальном вагинозе (БВ). Причины развития БВ у женщин.
9. Роль БВ в патологии плода и ребенка.
10. Методы микробиологической диагностики БВ.
Литература:
Учебники:
1. Борисов Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. – М.: ООО «МИА», 2002. – С. 121-125, 136-150.
2. Поздеев О. К. Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В. И. Покровского. - М.: ГЭОТАР Медицина, 2001. – С. 112-115, 121-126.
Дополнительная литература:
Информационно-методическое письмо ЦГСЭН г. Красноярска «Бактериологическая диагностика дисбактериоза». – Красноярск, 1989. – 8 с.
Лекции по микробиологии.
Тесты.