Методические рекомендации к практическому занятию №13
По теме: «Семейство кишечных бактерий (шигеллы, холерные вибрионы)».
План занятия
1.Закрепить знания по изучению морфологии, биологии и резистентности шигелл, холерных вибрионов, методов лабораторной диагностики и профилактики заболеваний, вызываемых ими.
2. Изучить правила взятия, направления, регистрации и доставки материала в бактериологическую лабораторию при кишечных инфекциях.
3. Овладеть методикой и техникой проведения первого этапа микробиологического исследования испражнений с целью выделения холерных вибрионов.
4. Изучить средства специфической профилактики и терапии заболеваний, вызванных шигеллами, холерными вибрионами.
Самостоятельная работа
Задание 1
Изучите морфологические и тинкториальные свойства шигелл, холерных вибрионов путем микроскопии готовых препаратов и по таблице, зарисуйте, подпишите.
 |  |
1. 2.
1.
2.
Задание 2
Изучите правила забора испражнений (кала) и направления его на бактериологическое исследование (работают в перчатках).
Показания:
o острые кишечные инфекции (или подозрение);
o у детей до 2-х лет при поступлении в стационар;
o у контактных с больными кишечными инфекциями;
o бактерионосительство.
Методика:
· стеклографом на пробирке поставить номер, соответствующий номеру в направлении;
· извлекают из пробирки стерильный тампон, смачивают тампон (30% глицерина + 70% ИХН) избыток его отмачивают о стенку пробирку.
· вращательными движениями вводят в прямую кишку тампон обследуемому, который лежит на левом боку с приведенными к животу ногами на кушетке;
· извлекают тампон, помещают в сухую стерильную пробирку, не касаясь ее краев;
· до отправления ее в лабораторию пробирки помещают на два часа в холодильник.
Кроме того испражнения собирают сразу после дефекации из судна, горшка, специального лотка или с помощью стеклянной палочки, проволочной петли, деревянного шпателя. При наличии в испражнениях патологических примесей (слизь, кровь, гной) их следует включить в отбираемую пробу. Испражнения, не помещенные в консервант, суспензируют в стерильном ИХН в соотношении 1:5 или 1:10 и засевают не позднее 2-х часов после взятия. Материал помещают в консервант сохраняют до начала исследования при температуре 4-60С в холодильнике.
Задание 3
Проведите первый этап бактериологического исследования нативного материала (испражнений) с целью выделения шигелл.
Методика:
· каплю посевного материала с помощью бактериологической петли (стеклянной палочки, трубочки, пипетки) наносят на поверхность одной из пластинчатых сред в чашке Петри, отступая 1,5- 2 см от края чашки;
· Посев производят шпателем, втирая материал по всей поверхности питательной среды по общепринятой методике;
· Внимание! При исследовании испражнений материал от одного обследуемого засевают на чашки Петри со следующими средами.
С целью выделения эшерихий (370С, 18-20 часов).
- Эндо;
- Левина.
С целью выделения шигелл (370С, 18-20 часов).
- Плоскирева с антибиотиками;
- Плоскирева без антибиотиков.
С целью выделения сальмонелл (370С, 18-20 часов).
- ВСА.
С целью выделения иерсиний (370С, 18-20 часов).
- СПА.
· Одну петлю исследуемого материала засевают в пробирку с селенитовым бульоном (среда накопления для шигелл и сальмонелл 370С, не более 18часов.
Задание 4
1. Изучите правила взятия и доставки материала при кишечных инфекциях (см. Приложение №1).
2. Изучите правила направления, приема и регистрации материала, поступающего для исследования в бак. лабораторию (см. Приложение №2).
Задание 5
1. Изучите инструкцию правила забора материала для лабораторного исследования от больного (трупа) при подозрении на заболевание холерой (см. Приложение №1)к инструкции3.4.11-17-13-2003
2. Изучите инструкцию укладки для забора нативного материала от больного с подозрением на холеру (для больничных учреждений не инфекционного профиля, станций скорой и неотложной медицинской помощи, амбулаторно-поликлинических учреждений) (см. Приложение 2)к инструкции3.4.11-17-13-2003
Задание 6
Проведите 1 этап бактериологического исследования нативного материала (испражнение) с целью выделения холерных вибрионов.
Методика:
1 этап.
Испражнения в объеме 0,5-1,0 мл засевают пипеткой в 50-100 мл накопительной среды (1% ПВ), петлей – на щелочной агар (ЩА) и одну из элективных сред – элективно-дифференциальная сухая (СЭДХ) или сухую среду для диагностики холеры (TCBS).
В случае поступления материала от больных с подозрением больных на холеру, применяют ускоренные методы исследования: иммунолюминесцентный, иммунобилизацию и полимеразную цепную реакцию (ПЦР) со специфическими праймерами.
Материал от вибрионосителей засевают в 50 мл объединяя в один флакон по 0,5 мл пробы не более чем от 5 человек (при массовых обследованиях вибрионосительствах).
Материал доставленной в 5 мл в 1% ПВ (не позже 2 часов от момента забора) помешают в термостат на 6 часов для накопления возбудителя. При доставке материала в более поздние сроки 5 мл его засевают в 50 мл ПВ. У лиц принимавших антибиотики материал засевают в 200-300 мл 1% ПВ и на 2 чашки ЩА, так чтобы получить рост в виде изолированных колоний. Посевы инкубируют при 370С 24 часа, производя последовательные высевы через 8-10 часов инкубация с поверхностного слоя среды на пластинчатый ЩА.
Задание 7
Изучите и запишите средства специфической профилактики и терапии дизентерии, холеры.
Заполните таблицу, указав средства специфической профилактики и терапии шигеллезов, холеры.
| Заболевания | Средства специфической профилактики | Средства специфической терапии |
| Шигеллезы | ||
| Холера |
Приложение 1
Приложение 8 к Инструкции 3.4.11-17-13-2003