Исследование крови больного

Исследование желчи, мочи, испражнений

Исследуемый материал

Б. Серологический

РПГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом. ИФМ. Реакция Видаля.

МЕТОДЫМИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРЮШНОТИФОЗНОГО БАКТЕРИОНОСИТЕЛЬСТВА

А. Бактериологический

Исследование желчи, мочи, испражнений – по классической схеме

Б. Серологический

Реакция пассивной Vi-гемагглютинации (РП-Vi-ГА) для выявления Vi-антител, определение O-, Н-, Vi-антител одновременно

В. Аллергический

Кожная проба с Ви-тифином

МЕТОДЫМИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ПИЩЕВЫХ ТОКСИКОИНФЕКЦИЙ, ВЫЗЫВАЕМЫХ САЛЬМОНЕЛЛАМИ И УСЛОВНО-ПАТОГЕННЫМИ БАКТЕРИЯМИ КИШЕЧНОЙ ГРУППЫ

А. Бактериологический

Материал: остатки пищи, рвотные массы, смывы с предметов, промывные воды, испражнения, моча	Кровь
МПА (по методу Шукевича)	Среда магниевая	Среды Плоскирева, Эндо, Левина, МПА	Среда Рапопорт
Микроскопия	МПА	Пестрый ряд
Реакция агглютинации с сальмонеллезными монорецепторными O- и Н-сыворотками или монорецепторными сыворотками для других бактерий	Определение чувствительности к антибиотикам	Проба с О-сальмонеллезным фагом	Фаготипирование (для S. typhimurium)

Б. Иммунологические

Применение реакции иммунофлуоресценции как экспресс-метода для обнаружения сальмонелл.

Реакция агглютинации для выявления антител с парными сыворотками больного по типу реакции Видаля. Для реакции используют диагностикум, живые лабораторные культуры и аутоштаммы.

Применение реакции пассивной гемагглютинации с использованием О-эритроцитарного диагностикума для обнаружения антител и реакции Кумбса для обнаружения неполных антител.

ХАРАКТЕРИСТИКА СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae

Короткие, не образующие спор палочки с закругленными концами, перитрихи или неподвижные, образующие или не образующие капсулу, грамотрицательны, оксидазонегативны (отсутствует цитохромоксидаза), но каталазопозитивны, ферментируют глюкозу (и другие углеводы) с образованием кислоты или кислоты и газа, как правило, не обладают протеолитической активностью, факультативные анаэробы или аэробы, не требовательны к питательным средам, место обитания – кишечный тракт и/или дыхательные пути, фекально-оральный (иногда – воздушно-капельный) путь передачи, восстанавливают нитраты в нитриты, хемоорганотрофы.

ФАГОТИПИРОВАНИЕ БРЮШНОТИФОЗНЫХ БАКТЕРИЙ

Для фаготипирования брюшнотифозных бактерий, содержащих Vi-антиген, выпускается набор типовых брюшнотифозных Vi -фагов в ампулах с указанием рабочих разведений. Vi-I-фаг - универсальный, лизирует все культуры бактерий, содержащие Vi-антиген, Vi-II- фаг - лизирует только те штаммы, на которых он пассировался. Этот фаг подразделен на типы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита. Соответственно типовым фагам существуют фаготипы брюшнотифозных бактерий, которые имеют идентичные обозначения.

В природе циркулирует более сотни фаготипов возбудителя брюшного тифа. На территории нашей страны чаще всего встречаются фаготипы A, F2, EI, С, Е2.

Существуют системы фаготипирования возбудителей паратифа В и паратифа А.

КЛАССИФИКАЦИЯ САЛЬМОНЕЛЛ (Salmonella)

Род Salmonella включает единственный вид S. enterica (ранее - S. choleraesuis) с семью основными подвидами: S. enterica, S. salamae, S. arizonae, S. diarizonae, S. houtenae, S. bongori, S. indica, которые различаются по ряду биохимических признаков (см. табл.).

Основные биохимические признаки	Подвиды
S. enterica	S. salamae	S. arisonae	S. diarisonae	S. houtenae	S. bonhori	S. indica
Лактоза	-	-	+	+	-	-	-
Салицин	-	-	-	-	+	?	?
Дульцит	+	+	-	-	-	+	×
Желатин	-	+	+	+	+	?	?
d-тартрат	+	- или×	- или×	- или×	- или×	- или×	+
Малонат	-	+	+	+	-	-
KCN	-	-	-	-	+	+	-
Тест на β-галактозидазу	-	- или×	+	+	-	+	×

Примечание: × - ферментация поздно.

КЛАССИФИКАЦИЯ ПИЩЕВЫХ ОТРАВЛЕНИЙ

ЗАНЯТИЕ № 7

Дата________________

Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЭШЕРИХИОЗОВ

План занятия

1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств диареегенных кишечных палочек.

2. Исследование испражнений больного эшерихиозом ребёнка - посев на дифференциально-диагностические среды. Пересев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда". Агглютинация культуры поливалентными и монорецепторными видовыми, типовыми и групповыми сыворотками (разбор схемы).

3. Бактериологическая диагностика кишечной инфекции (продолжение). Регистрация результатов посева, сделанного на прошлом занятии. Посев на «пестрый ряд», МПА, среду Пешкова.

Методические указания

1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств диареегенных кишечных палочек

Приготовить препараты-мазки из культуры кишечной палочки, окрасить по Граму и промикроскопировать. Препарат зарисовать. Изучить биохимические свойства кишечной палочки по демонстрационному набору сред "пестрого ряда". Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной классификации E.coli.


Рис.3. Escherichia coli	Рис.4. Микроскопия подозрительной колонии
Окраска по Граму

Производят посев испражнений ребенка, больного эшерихиозом, на чашки с дифференциально-диагностическими средами Эндо и Левина. Диареегенная кишечная палочка ни по культуральным, ни по биохимическим свойствам не отличается от непатогенной, отличается наличием определенных факторов патогенности и принадлежностью к вполне определенным серогруппам и сероварам. Поэтому отбор подозрительных колоний со сред Эндо или Левина проводят по результатам реакции агглютинации на стекле с поливалентной ОКА-сывороткой (проверяют не менее 10 одинаковых колоний); колонию, давшую четкую агглютинацию, отсевают для накопления чистой культуры. Далее проверяют развернутые биохимические свойства и определяют принадлежность к серогруппе реакцией агглютинации на стекле живой (за счет К-антигена) и гретой (за счет О-антигена) культуры с поливалентными (ОКВ, ОКС, ОКD, ОКЕ) сыворотками. Принадлежность к серовару (серотипу) определяют в живой культуре с помощью Н-сывороток.

Найти на чашке с дифференциально-диагностической средой подозрительные лактозонегативные колонии, из части колонии приготовить препарат-мазок, окрасить по Граму и промикроскопировать. Оставшуюся часть колонии пересеять на скошенный МПА, среды «пестрого ряда» и среду Пешкова. Посевы поместить в термостат.

Контрольные вопросы

1. Какие микроорганизмы являются основными представителями нормальной кишечной микрофлоры?

2. Какое значение имеет кишечная микрофлора для организма человека?

3. В каких случаях возникает дисбактериоз?

4. Какие препараты применяют для восстановления состава нормальной микрофлоры кишечника?

5. Почему кишечную палочку считают санитарно-показательным микроорганизмом при загрязнении внешней среды?

6. Что такое коли-титр и коли-индекс?

7. Каково антигенное строение кишечной палочки?

8. Как выделяют чистую культуру диареегенной кишечной палочки?

9. Какой антиген (O или К) определяют в реакции агглютинации с живой культурой?

10. Как обнаруживают специфический O-антиген у кишечной палочки?

11. По какому антигену окончательно судят о принадлежности бактерий к патогенному серовару?

12. Что собой представляют колицины и какое значение имеет определение их типа?

13. На какие категории и по каким признакам подразделяют диареегенные кишечные палочки?

14. Какими факторами патогенности обладают энтеротоксигенные кишечные палочки? Каков генетический контроль их синтеза?

15. Чем обусловлена патогенность энтеропатогенных кишечных палочек?

16. Чем обусловлена патогенность энтероинвазивных кишечных палочек?

17. Чем объясняется некоторое антигенное и патогенное сходство энтероинвазивных кишечных палочек и шигелл?

18. С чем связана патогенность знтерогеморрагических кишечных палочек?

19. Каков генетический контроль биосинтеза шигаподобных экзотоксинов у энтерогеморрагических вариантов кишечной палочки?

20. Каков механизм действия термостабильных и термолабильных энтеротокоинов?

21. Какова молекулярная структура энтеротоксинов?

22. Каковы основные способы заражения диареегенными кишечными палочками?

23. Какие категории диареегенных кишечных палочек чаше всего вызывают внутрибольничные вспышки?

24. Можно ли отличить колонии диареегенных кишечных палочек от колоний непатогенных кишечных палочек на дифференциально-диагностических средах? Если можно, то в каких случаях?

ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 7

ФАКТОРЫПАТОГЕННОСТИ ДИАРЕЕГЕННЫХ E. coli

Факторы	Международное название
Полное	Символы
Термостабильный энтеротоксин	Heat-stable enterotoxin	ST
Термолабильный энтеротоксин	Heat-labile enterotoxin	LT
Цитотоксины:	Cytotoxin Shiga-Like toxin	CT SLT
Шигаподобный токсин
Vero - токсин	Verotoxin	VT
Инвазивность٭	Invasiveness	-
Факторы колонизации٭	Colonization factor	CF
Фактор адгезии энтеропатогенных E. coli к клеткам Hep-2	Enteropathogenic E. coli adherence factor to Hep-2 cells	EAF
Адгезия к клеткам Henle-407	Adhesion to Henle-407 cells	Adhesion Henle-407

٭ - имеются в виду CFA/I, CFA/II, CFA/III, CFA/IV.

Известны и другие факторы адгезии и колонизации.

Г. Классификация диареегенных Escherichia coli

Категория Серогруппы Серовары

ETEC – энтеротоксигенные E. coli 06, 08, 015, 020, 025, 027, 063, 078, 080, 085, 0115, 0128ас, 0139, 0148, 0153, 0159, 0167. 06:Н16, 08:Н9, 011:Н27, 015:Н11, 020:Н-, 025:Н-, 027:Н7, 063, 078:Н11, 0128:Н7, 0148:Н28, 0149:Н10, 0159:Н20, 0167.

EIEC – энтероинвазивные E. coli 028ас, 029, 0124, 0136, 0143, 0144, 0152, 0164, 0167. 028ас:Н-, 0112ас:Н-, 0124:Н, 0124:Н32, 0136:Н-, 0143:Н-, 0144:Н-, 0152:Н-, 0159:Н-, 0164, 0167:Н4, 0167:Н5, 0124:Н30.

EPEC – энтеропатогенные E. coli Класс 1. 055, 086, 0111, 0119, 0125, 0126, 0127, 0128ав, 0142. Класс 2. 018, 044, 0112, 0114. 018ас:Н7, 020ав:Н26, 026:Н-, 026:НII, 028ас:Н-, 044:Н34, 055:Н-, 055:Н6, 055:Н7, 086а:Н-, 086а:Н34, 0111ав:Н12, 0114:Н10, 0114:Н32, 0119:Н-, 0119:Н6, 0125ас:Н21, 0126:Н-. 0126:Н7, 0127:Н-, 0127:Н9, 0127:Н21, 0128ав:Н2, 0128ас:Н12, 0142:Н6, 0158:Н23, 0159.

EHEC – энтерогеморрагические E. coli 0157, 026, 0111, 0145, О104. 0157:Н7

EAEC – энтероагрегативные E. coli Не выяснены

DAEC – диффузноагрегативные E. coli Не выяснены

ЗАНЯТИЕ № 8

Дата________________

Тема: МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ДИЗЕНТЕРИИ

План занятия

1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств дизентерийных бактерий.

2. Исследование испражнений больного дизентерией - посев на среду Плоскирева. Пересев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда". Агглютинация культуры поливалентными и монорецепторными видовыми, типовыми и групповыми сывортками (разбор схемы).

Методические указания

1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств

дизентерийных бактерий.

Приготовить препараты-мазки из культур разных видов шигелл, окрасить по Граму и промикроскопировать. Сравнить морфологию бактерий во всех препаратах и отметить морфологическое сходство их друг с другом. Препараты зарисовать. Изучить биохимические свойства дизентерийных бактерий по демонстрационным наборам сред "пестрого ряда". Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной классификации шигелл.

Производят посев испражнений больного дизентерией на чашки с дифференциально-диагностической средой Плоскирева. Бактериальной петлей каплю испражнений нанести на пластинку бактоагара Плоскирева и тщательно рассевают штриховым способом. На следующий день находят колонии, подозрительные на дизентерийные (бесцветные, прозрачные). Часть колонии микроскопируют с окраской по Граму, а оставшуюся часть засевают на скошенный МПА, среду Ресселя, среду Пешкова для определения подвижности и среды "пестрого ряда". Затем идентифицируют по антигенным свойствам реакцией агглютинации на стекле, используя видовые, типовые и групповые поливалентные и монорецепторные сыворотки. Для эпидемиологических целей у шигеллы Зонне проводят фаготипирование, хемотипирование или колициногено-/колицинотипирование.


Рис. 1. Shigella sonnei	Рис.2. Shigella flexneri

Контрольные вопросы

1. Какие микроорганизмы являются возбудителями дизентерии?

2. Какие принципы используют для классификации возбудителей дизентерии?

3. Как отличаются различные виды дизентерийных бактерий по биохимическим свойствам?

4. Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Зонне?

5. Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Флекснера?

6. По каким признакам бактерии вида Флекснера подразделяются на серовары и подсеровары?

7. Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Бойда?

8. Каковы особенности патогенеза дизентерии?

9. Какие микробиологические методы используются для диагностики дизентерии?

10. Какой материал исследуется для выделения возбудителей дизентерии и на какие питательные среды его засевают?

11. Где в организме больного локализуется возбудитель дизентерии?

12. Как следует брать материал от больного дизентерией?

13. По каким признакам идентифицируют возбудителей дизентерии?

14. Каково различие между типовыми и групповыми диагностическими агглютинирующими дизентерийными сыворотками?

15. Для чего необходимо серологическое типирование возбудителей?

16. Какова методика кератоконьюктивальной пробы и каково ее значение?

17. Каковы методика и цель определения чувствительности дизентерийных бактерий к антибиотикам?

18. В каких случаях и как применяют дизентерийный бактериофаг?

19. В чем заключается сущность методов определения чувствительности бактерий Зонне к колицинам и типов колицинов, продуцируемых шигеллами?

20. Как ставится аллергическая проба Цуверкалова?

21. Чем обусловлена вирулентность дизентерийных бактерий?

ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 8

МЕТОДЫМИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ

ДИЗЕНТЕРИИ

А. Бактериологический

Испражнения

Б. Аллергический

Внутрикожная проба с дизентерином (проба Цуверкалова).

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ИСПРАЖНЕНИЙ ПРИ ЭШЕРИХИОЗАХ

Испражнения

КЛАССИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ РОДА Shigella

Подгруппа и ее характеристика	Вид и серовары	Подсеровары	Антигенная формула
Типовой антиген	Групповые антигены
Подгруппа А. Не ферментирует маннита. Серологически каждый серовар отличается от других.	S. dysenterica











Подгруппа В. Обычно ферментируют манит. Серологически серовары родственны друг другу.	S. flexneri	1а		2,4
1в	1:S	6:2,4
	2а 2в		3,4
	7,8
	3а 3в 3с		6:7,8
	6:3,4

	4а 4в		В:3,4
	В:6:3,4
			7,8
	(3,4)
	Некоторые штаммы ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа		2,4
Вариант X		-	7,8
Вариант Y		-	3,4
Подгруппа С. Обычно ферментируют манит. Серологически серовары отличаются друг от друга.	S. boydii Серовары 1-18 (16-18 – провизорные штаммы, не патогенны)
Подгруппа D. Обычно ферментируют манит, поздно лактозу и сахарозу.	S. sonnei Обычно вырастают колонии двух фаз – мелкие (имеют плазмиду), крупные, плоские (не имеют плазмиды)

Исследование крови больного

Поиск по сайту