| Тип | Группа, подгруппа | Возбудитель - продуцент |
| Цитотоксины | Ангиэлонгаторы Энтеротоксины Дермонекротоксины | Corinebacterium diphtheriae, Pseudomonas aeruginosa. Shigella flexneri. Shigella sonnei Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens. Streptococcus pyogenes, Pseudomona aeruginosa, Bordetella pertussis, Bacillus anthracis. |
| Мембранотоксины | Лейкоцидины Гемолизины с фосфатидазной активностью 0-стрептолизин. Пневмолизин А-токсин Тетанолизин | Stahylococcus aureus. Streptococcus pyogenes, Clostridium perfringens. Clostridium botulinum. Pseudomonas aeruginosa. Stahylococcus aureus. Clostridium perfringens. Streptococcus pyogenes. Streptococcus pneumoniae. Clostridium perfringens. Clostridium tetani. |
| Функциональные блокаторы | Термостабильные энтеротоксины Термолабильные энтеротоксины. Холероген Токсиблакаторы «мышиные» токсины Коклюшный стимулирующий фактор Нейротоксины | Klebsiella pneumoniae, Yersinia enterocolitica, Eschericllia coli. Escherichia coli. Salmonella typhimurium. Salmonella enteritidis. Vibrio cholerae. Yersinia pestis, Bacillus anthracis Bordetella pertussis Clostridium tetani. Clostridium botulinum |
| Эксфолиатины, эритрогенины | Эксфолиатины Эритрогенины | Stahylococcus aureus. Streptococcus pyogenes. |
Вторая группа - «мембранотоксины» - повышают проницаемость мембраны эритроцитов (гемолизины) и лейкоцитов (лейкоцидины). вызывая их гибель
Третья группа - «функциональные блокаторы» - включает термолабильные и термостабильные энтеротоксины, активизирующие клеточную аденилатциклазу, приводя к повышению проницаемости стенки тонкой кишки и увеличению выхода жидкости в ее просвет - диарее. Эта группа включает, например, холероген. продуцируемый холерным вибрионом, термолабильные энтеротоксины кишечной палочки и других энтеробактерий.
Токсикоблокаторы, «мышиные» токсины, вырабатываемые сибиреязвенной и чумной палочками, в отличие от энтеротоксинов инактивируют аденилатциклазу, являясь антагонистами данного фермента.
Нейротоксины (тетаноспазмин, ботулинический токсин) блокируют передачу нервных импульсов в клетках спинного и головного мозга.
Четвертая группа - эксфолиатины (продуцируемые золотистым стафилококком) и эритрогенины (образуемые скарлатинозным стрептококком). влияют на процессы межклеточного взаимодействия.
Экзотоксины обладают высокой иммуногенностью, что проявляется в способности вызывать иммунный ответ со стороны макроорганизма, в частности индуцировать синтез специфических антител - антитоксинов, нейтрализующих гомологичный токсин.
Ряд белковых токсинов, например столбнячный, дифтерийный, ботулинистический. гангренозный и др. под действием формалина утрачивают свою ядовитость, сохраняя при этом иммуногенные свойства. Такие токсины получили название - анатоксинов. Они применяются в качестве вакцин для профилактики одноименных заболеваний. Например, вакцина АКДС, содержащая столбнячный и дифтерийный анатоксины.
Многие бактерии (стафилококки, стрептококки и др.) образуют не один, а несколько белковых токсинов, обладающих разным действием.
Токсигенность бактерий изучают в опытах на чувствительных лабораторных животных.
Практическая часть занятия
Цель занятия:
-изучить методы культивирования и выделения чистых культур анаэробных бактерий:
-изучить биохимические свойства бактерий и методами их определения.
Мотивационная характеристика темы:
Изучение биохимических свойств бактерий наряду с определением морфологических, тинкториалъных и культуральных свойств позволяет
идентифицировать микроб и установить его роль в качестве возбудителя
инфекционного заболевания.
Студент должен знать:
-классификацию микроорганизмов по способу дыхания". -методы культивирования анаэробов:
-основные методы выделения чистых культур анаэробов:
-основные тесты, характеризующие биохимические свойства микробов.
Студент должен уметь:
-выделять чистую культуру бактерий:
-должен уметь идентифицировать выделенную культуру по морфологическим, тинкториальным, культурным и биохимическим свойствам.
Студент должен иметь навыки:
-соблюдения правил противоэпидемического режима и техники безопасности в бактериологических лабораториях:
-обеззараживания инфицированного материала, антисептической обработки рук, контаминированных исследуемым материалом:
-стерилизации бактериальных петель прокаливанием:
-посева и пересева исследуемого материала на питательные среды:
-идентификации изучаемой культуры по биохимическим тестам.
Оснащение занятия:
На группу:
1. Таблицы: «Выделение чистой культуры анаэробов», «Методы культивирования анаэробов».
2. Таблицы: «Биохимические свойства бактерий», «Ферментативная активность бактерий кишечно-тифозной группы», «Токсины бактерий».
3. Анаэростат, эксикатор.
4. Демонстрация роста анаэробов на среде Китта-Тароцци
5. Демонстрация сахаролитических и протеолитических свойств кишечной палочки на средах Гисса.
На рабочее место:
1. Микроскоп.
2. Посевы исследуемого материала (прошлого практического занятия) на чашках Петри с МПА.
3. Пробирка со скошенным агаром.
4. Чистая культура грамотрицательной палочки на скошенном агаре.
5. Пробирки со средами Гисса: глюкозой, лактозой, сахарозой.
6. Пробирка с МПБ.
7. Индикаторные бумажки на индол и сероводород.
8. Пинцет, бактериологическая петля.
9. Спички, карандаш по стеклу.
10. Спиртовка.
11. Набор для окраски по методу Грама.
12. Пробирка с физраствором.
13. Предметные стекла.
14. Пробирка с исследуемым материалом на обнаружение анаэробов.
15. Пробирка со средой Китта-Тароцци.
16. Банка с дезраствором.
Учебная карта занятия:
1. Продолжить протокол №1 по выделению чистой культуры аэробных бактерий:
а) изучить посевы на чашке с МПА;
б) отобрать подозрительную колонию и описать ее;
в) приготовить из колонии мазок, окрасить по Граму и промикроскопировать;
г) отсеять подозрительную колонию на скошенный агар.
д) результаты внести в протокол.
2. Изучить биохимические свойствами микроорганизмов по таблицам и демонстрационным материалам.
3. С целью идентификации чистой культуры грамотрицательной палочки определить:
а) сахаролитические свойства, сделав посев на среды Гисса (с глюкозой, лактозой, сахарозой):
б) протеолитичсские свойства, сделать посев на МПБ и внести в пробирку индикаторные бумажки на сероводород и индол;
в) ход исследования оформить в виде протокола №2.
4 Ознакомиться с методами культивирования анаэробных бактерий по таблицам и демонстрационным материалам.
5. Провести посев исследуемого материала на среду Китта-Тароцци для выделения анаэробных бактерий. Ход исследования оформить в виде протокола №3.
Протокол.№1
микробиологическою исследования по выделению чистой культуры аэробных бактерий (продолжение)
| День наблюдения | Материал | Ход исследования | Результат исследования |
| 2 день | Изолированные колонии на чашках с МПА | 1. Изучение посевов. | 1. На 1 и 2 секторахчашки Петри с МПА сплошной рост. На 3 секторе изолированные колонии. 2. Колонии двух видов: а) колонии S-типа. пигментированные (белые или желтые), б) колонии S-типа. бесцветные. 3. При микроскопии мазка, приготовленного из пигментированных S-типа колоний, обнаружены грамположительныс кокки При микроскопии мазка, приготовленного из бесцветных S-типа колоний, обнаружены грамотрицательные палочки |
| 2. Отбор подозрительных колоний. | |||
| 3. Микроскопическое изучение колоний | |||
| 4. Отсев колонии на скошенный МПА. | |||
| 5. Пробирку подписать и поставить в термостат | |||
| 3 день | Рост бактерий на скошенном агаре | Визуальное изучение характера роста Проверка чистоты культуры | 1. Визуально чистая культура характеризуется однородным ростом. 2. При микроскопическом исследовании мазка. приготовленного из чистой культуры, в нем обнаруживаются морфологически и тинкториально однородные клетки |
Протокол №2
по изучению биохимических свойств грамотрицательной палочки
| День исследования | Материал | Ход исследования | Результат исследования |
| 1 день | Чистая культура грамотрицательной палочки | 1. Определение сахаролитических свойств, путем посева на среды Гисса с глюкозой, лактозой, сахарозой. | |
| 2. Определение протеолитических свойств, путем посева на МПБ с индикаторными бумажками на индол и сероводород. | |||
| 3.Термостатирование при температуре 37 градС 18-24 часа | |||
| 2 день | Посевы на средах Гисса | 1 Учет сахаролитических и протеолитических свойств культуры | Чистая культура грамотрицательной палочки ферментирует глюкозу и лактозу до кислоты и газа, не ферментирует сахарозу. Разлагает белки с образованием индола. Сероводород не образует |
Протокол №3 по выделению чистой культуры анаэробных бактерий
| День иссле дования | Материал | Ход исследования | Результат исследования |
| 1 день | Исследуемый материал (смесь бактерий, стафилококки и скостри-дии) | 1. Микроскопическое исследование препарата, по Граму. | В препарате обнаружены грамположительные палочки и кокки |
| 2. Посев смеси бактерий на среду Китта-Тароцци. | |||
| 3. Термостатирова-ние при температуре 37 градС 18-24 часа | |||
| 2 день | Посев на среде Китта-Тароцци | 1. Изучение посевов. 2. Микроскопическое исследова-ние препарата, окрашенного по Граму | 1. На среде визуально обнаруживается диффузное помутнение. 2 В препарате обнаружены грамположительные палочки |
Ситуационные задачи
Задача I
У больного пневмонией в мокроте обнаружены грамположительные кокки, располагающиеся скоплениями в виде «гроздьев винограда».
1. Какой микроорганизм имеет такие морфологические и тинкториальные свойства?
2. Какие питательные среды необходимо использовать для выделения чистой культуры этого возбудителя?
3. В какую группу по типу дыхания относится данный микроорганизм?
4. Как провести выделение чистой культуры?
Задача 2
В мазках испражнений, окрашенных по Граму. обнаружены грамотрицательные палочки.
1. Каковы морфологические и тинкториальные свойства микроба?
2. Можно ли на основании этих свойств определить вид микроба?
3. Какие исследования необходимо провести для идентификации выделенного микроба?
Задача 3
При посеве исследуемого материала через сутки культивирования на среде МПА обнаружены колонии S-типа.
1. Перечислите признаки, характерные для колоний S-типа.
2. Какие бактерии могут образовывать данный тип колоний?
3. К какому типу сред относится среда МПА?
Задача 4
В мазке из зева больного ангиной обнаружены грамположительные кокки, располагающиеся цепочкой.
1. На каких питательных средах можно выращивать данный возбудитель и почему?
2. Опишите характер роста возбудителя на жидких и твердых питательных средах.
3. Через какое время обнаруживается видимый рост этого возбудителя на питательных средах?
Задача 5
Мокроту больного посеяли на среду7 Левенштейна-Иенсена. Через 2 месяца культивирования на поверхности среды обнаружены морщинистые колонии светло-кремового цвета (колонии в виде «тутовой ягоды»).
1. Для какого возбудителя характерен описанный выше вид колоний?
2. К какому типу относятся описанные выше колонии?
3. Через какое время появляется видимый рост у большинства бактерий и почему?
Задача б
При посеве патологического материала на среду МПА через 24 часа культивирования на ней обнаружены матовые, плоские с локонообразной периферией колонии (колонии в виде «львиной гривы»).
1. Какой возбудитель образует на среде МПА такие колонии?
2. К какому типу относятся описанные выше колонии?
3. Опишите рост данного возбудителя на среде МПБ.
Задача 7
У больного гнойным уретритом при микроскопии отделяемого уретры обнаружены грамотрицательные диплококки (в виде кофейных зерен) в большом количестве.
1. Какой микроб имеет такие морфологические и тинкториальные свойства?
2. Какие питательные среды необходимо использовать для выделения чистой культуры этого возбудителя?
3. В какую группу по типу дыхания относится данный микроорганизм?
4. Какие исследования необходимо провести для идентификации выделенного микроба и постановки диагноза?
Задача 8
В бактериологическую лабораторию направлены для исследования испражнения больного с диагнозом - «острая кишечная инфекция».
1. На какие питательные среды необходимо посеять материал для выделения возбудителя и уточнения диагноза?
2. Какие свойства микроорганизма необходимо изучить?
Задача 9
В лабораторию доставлена мокрота от больного для подтверждения диагноза - «туберкулез». При микроскопии мазков, окрашенных методом Циля-Нильсона, обнаружены красные тонкие палочки.
1. Какой метод выделения чистой культуры необходимо использовать в данном случае?
2. Каковы этапы выделения чистой культуры9
3. Как проверить чистоту выделенной культуры?
Задача К)
В бактериологической лаборатории произведен посев исследуемого материала в конденсационную жидкость скошенного МПА. Через сутки культивирования на питательной среде обнаружен «ползучий рост» микроорганизмов.
1. С какими свойствами бактерий связан их «ползучий рост»?
2. Для какой цели может быть использовано изучение этой особенности роста бактерий на питательных средах?
3. Как называется данный метод культивирования бактерий?
Задача 11
При изучении посева испражнений больного острым кишечным заболеванием на среде Эндо обнаружены S-типа колонии, имеющие различные размеры и окраску. Одни колонии были крупные, красного цвета: другие -мелкие, бесцветные.
1. Одного ли вида микробы находились в исследуемом материале?
2. К какой группе сред относится среда Эндо?
3. Назовите еще ряд питательных сред, применяемых для этих целей?
Задача 12
В бактериологическую лабораторию из хирургического стационара для проверки на стерильность направлен шовный материал (кетгут). После проведенных исследований установлено, что он загрязнен клостридиями.
1. Как была проведена проверка кетгута на стерильность?
2. Какие патогенные клостридии Вы знаете и какие заболевания они могут вызывать?
Задача 13
В бактериологическую лабораторию доставлена отечная жидкость из раны больного с подозрением на «газовую гангрену».
1. Укажите в какую группу по типу дыхания относятся возбудители газовой гангрены?
2. Какие методы культивирования применяются для выращивания данных микробов?
Задача 14
Для идентификации аэробной культуры грамотрицательной палочки Вам необходимо изучить ее биохимические свойства.
1. Что входит в понятие биохимические свойства?
2. Какие питательные среды могут быть использованы для изучения биохимических свойств?
Задача 15 Из испражнений выделена чистая аэробная культура грамотрицательной
палочки, вызвавшая следующие изменения на средах Гисса: ферментация
глюкозы и лактозу до кислоты и газа: отсутствие ферментации сахарозы:
разложение белков с образованием индола.
1 Какие ферментативные свойства изучены на средах Гисса?
2 Какой грамотрицательный микроб обладает указанными
биохимическими свойствами?
Литература
1. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология/ Под. ред Л.Б.Борисова, А.М.Смирновой. - М.: Медицина, 1994.-528 с.
2. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология/ А.И.Коротяев, С. А. Бабичев. - Санкт-Петербург: Специальная литература. 1998.-561 с.
3. Медицинская микробиология / В.Н.Покровский, О.К.Поздеев.- М.:
ГЭОТАР Медицина, 1998.- 1184 с.
4. Руководство к лабораторным занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии/ Л.Б.Борисов, Б.Н.Козьмин-Соколов,- М.:
Медицина, 1993.- 167с.
5. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям/Ф. К. Черкес.-М.: Медицина, 1980.-288с.
6. Руководство по классификации микробов/Д.Берджи. - Балтимор, 1994." 495 с.
7. Шлегель Г. Общая микробиология (перев. с нем.)// М.: Мир, 1987.- 563 с.