Существуют различные критерии оценки безопасности и качества пищевой продукции из генетически модифицированных источников, но основным среди них является принцип композиционной эквивалентности [21—23, 32, 34, 42, 46]. Суть этого принципа заключается в сравнении ГМИ пищи с исходным традиционным аналогом. Сравнение проводится по содержанию основных пищевых веществ (белков, жиров, углеводов), микронутриентов, минорных непищевых биологически активных компонентов, антиалиментарных и токсичных веществ, аллергенов, характерных для данного вида продовольствия или определяемых свойствами переносимых генов.
Учитывая, что основное действие ДНК может быть опосредовано экспрессируемыми белками, которые потенциально могут оказать влияние на качество и безопасность пищевых продуктов, особое внимание при оценке композиционной эквивалентности ГМ-продукта традиционному аналогу уделяется именно белковому компоненту. Этот белок сравнивается по аминокислотному составу
с известными белковыми токсинами и аллергенами и на основании проведенного анализа делается вывод о степени их сходства. Дальнейшая оценка белка включает определение острой токсичности на лабораторных животных, скорости его разрушения в желудочном и кишечном соке на различных моделях, в том числе в организме животных, распаде при приготовлении пищи и др.
Например, при оценке потенциальной аллергенности новых экспрессированных белков учитываются: размер белка (известные аллергены обычно имеют длину не менее 10—40 кД); устойчивость белка к перевариванию и технологической обработке (большинство известных аллергенов медленно перевариваются в желудочно-кишеч-ном тракте и устойчивы при технологической обработке); схожесть структуры белка с таковой у известных аллергенов. Если ген переносится из организма донора, который является аллергеном, необходимо доказать, что получаемый продукт не содержит аллергенов. Так, при создании ГМ-сои (фирма «Пионер») в ее геном с целью увеличения содержания серосодержащих аминокислот был встроен ген, кодирующий белок американского ореха. Но впоследствии обнаружилось, что продукты переработки этих соевых бобов, употребляемые в пищу, вызывают аллергию у определенной группы людей. Дальнейшие исследования показали, что положительная аллергическая реакция возникает у людей, которые имеют аллергию на американский орех, поэтому продукт посчитали неприемлемым для выпуска на продовольственный рынок, и проект был закрыт.
Для ряда сельскохозяйственных культур, например сои, большое значение имеет анализ состава углеводов, в частности содержание таких олигосахаров, как раффиноза и стахиоза, содержание которых регламентируется в продуктах диетического и детского питания. Нормирование содержания этих Сахаров связано с тем, что у человека отсутствуют ферменты, способные гидролизовать га-лактозидные связи, в связи с чем продукты расщепления раффинозы и стахиозы, образующиеся в кишечнике под воздействием микрофлоры, вызывают метеоризм.
При оценке композиционной эквивалентности масличных культур, к которым, в частности, относятся соя, кукуруза и рапс, наиболее активно используемых в качестве объектов для получения ГМИ, значительное внимание уделяется липидному компоненту. Например, кроме определения общего содержания липидов определяется жирнокислотный состав липидной фракции, состав фос-фолипидов и стеринов.
Значительный интерес представляет изучение содержания токсичных веществ, регламентируемых в данном продукте, и антинутриентов, характерных для данной культуры, так как генетическая модификация может служить причиной повышения их уровня. Для сои это ингибитор трипсина, лектины, фитиновая кислота и уреаза, для картофеля — сапонины, для рапса — гликозинолаты и эруковая кислота, для томатов — томатины.
С целью изучения влияния генетической модификации на пищевую ценность продукта необходимо анализировать не только содержание белков, жиров и углеводов, но и состав витаминов, макро- и микроэлементов.
Кроме того, учитывается, в каком виде данный продукт традиционно употребляется в пищу и как реагирует на технологическую обработку, при этом анализируется химический состав конечной продукции, ее пищевая и энергетическая ценность. Программа исследований определяется для каждого конкретного продукта индивидуально.
Очевидно, система оценки качества и безопасности ГМИ, в основе которой лежит принцип композиционной эквивалентности, может быть рекомендована для продукции, полученной из ГМИ, но не содержащей ДНК и белка. Такие продукты получаются в результате глубокой технологической переработки сырья. К ним относятся пищевые и ароматические добавки, рафинированные масла, модифицированные крахмалы, мальтодекстрин, сиропы глюкозы, декстрозы и др. Полная композиционная эквивалентность возможна только в случае отсутствия в продуктах носителей генетической модификации — экспрес-сированного белка, придающего новое свойство продукту, и трансгенной ДНК. К таким продуктам относятся
сахар, высокоочищенное масло, пищевые добавки и т.п. Однако российские ученые считают, что сложно или даже невозможно выявить незаданное действие рекомбинант-ных генов или кодируемых ими белков лишь аналитическими методами, и для оценки безопасности любого ГМИ необходим полный комплекс исследований.
Если в результате исследований не обнаруживаются отличия от традиционного аналога по композиции за исключением присутствия генетически измененного белка, а также токсичность и аллергенность этого белка, то ГМИ пищи причисляют к первому классу безопасности, признают эквивалентным традиционному аналогу и считают полностью безвредным для здоровья.
При обнаружении отличий от традиционного аналога (второй класс безопасности) или полного несоответствия с традиционным аналогом (третий класс безопасности) оценку безопасности ГМИ необходимо продолжать.
Оценка пищевых свойств включает изучение пищевой ценности нового продукта, его квоты в рационе человека, способов использования в питании, биодоступнос-ти, оценку поступления отдельных нутриентов (если ожидаемое поступление нутриента превышает 15% от его суточной потребности), влияния на микрофлору кишечника (если ГМИ содержит живые микроорганизмы).
Поскольку продукты, полученные из новых нетрадиционных источников, могут содержать неизвестные компоненты, необходимо проведение токсикологических исследований на животных с включением в их рацион нового продукта в максимально возможном количестве. Токсикологическая характеристика продукта включает следующие его показатели:
♦ токсикокинетика,
♦ генотоксичность,
♦ потенциальная аллергенность,
♦ потенциальная колонизация в желудочно-кишеч-ном тракте (в случае содержания в ГМИ живых микроорганизмов),
♦ результаты субхронического (90 дней) токсикологического эксперимента на лабораторных животных и исследований на добровольцах.
Анализ токсикокинетики проводится в отношении тех химических веществ, которые присутствуют только в тестируемом ГМИ и не обнаруживаются в традиционном продукте. Изучается генотоксичность ГМИ или его отдельных компонентов, отличающих его от традиционного продукта. При выявлении у исследуемого продукта геноток-сичности проводятся его длительные исследования на кан-церогенность. По мнению российских ученых, для оценки безопасности любого нового ГМИ необходимо проведение полного комплекса исследований, значение которых подтверждено теоретически и экспериментально.
Большинство созданных в настоящее время трансгенных растений отличаются от родительского сорта наличием белка, определяющего новый признак, и гена, который кодирует синтез этого белка (рекомбинантная ДНК). Поэтому оценка безопасности продукта сконцентрирована на исследовании этих носителей генетической модификации. Присутствие в пищевых продуктах рекомби-нантной ДНК само по себе не представляет опасности для здоровья человека и животных по сравнению с традиционными продуктами, так как любая ДНК состоит из нук-леотидных оснований, а генетическая модификация оставляет неизменной их химическую структуру и не увеличивает общего содержания генетического материала. Человек ежедневно потребляет с пищей ДНК и РНК в количестве от 0,1 до 1,0 г в зависимости от вида потребляемых продуктов и степени их технологической обработки. Кроме того, показано, что количество рекомбинан-тной ДНК в геноме генетически модифицированных сельскохозяйственных культур весьма незначительно. Так, в ГМ-линиях кукурузы, устойчивых к насекомым-вредителям, содержание рекомбинантной ДНК составляет 0,00022%, в ГМ-линиях сои, устойчивых к пестицидам — 0,00018%, ГМ-сортах картофеля, устойчивых к колорадскому жуку — 0,00075%.
Технологическая обработка пищи значительно снижает содержание ДНК в продуктах. В высокорафинированных продуктах, таких как сахар-песок, произведенный из сахарной свеклы, или масло из бобов сои, ДНК содержится в следовых количествах или отсутствует.
Опасения у специалистов вызывает возможный перенос генов устойчивости к антибиотикам, которые используются при создании трансгенных растений, в геном бактерий желудочно-кишечного тракта. Однако основной объем поступающей с пищей ДНК подвергается разрушению в пищеварительном тракте, и, следовательно, маловероятно сохранение целого гена с соответствующей регу-ляторной последовательностью. Кроме того, перенос ре-комбинантной ДНК в геном бактерий практически невозможен из-за необходимости последовательного прохождения определенных этапов: проникновение ДНК сквозь клеточную стенку и мембрану микроорганизма и возможность выживания при работе механизма уничтожения чужеродной ДНК у бактерий; встраивание в ДНК микроорганизма и стабильное интегрирование на определенном участке, экспрессия гена в микроорганизме. Несмотря на крайне низкую вероятность внедрения маркерных генов в геном микроорганизмов в настоящее время, как указывалось выше, интенсивно разрабатываются методы удаления этих генов из генома растений. В частности, соя линии 40-3-2, устойчивая к глифосату, и большинство других созданных в последнее время трансгенных растений не содержат генов устойчивости к антибиотикам. Обсуждение и анализ проблемы безопасности ДНК в пищевых продуктах позволил мировому научному сообществу сделать вывод, что ДНК из генетически модифицированных организмов так же безопасна в пищевом продукте, как и любая другая ДНК.
В Российской Федерации разработаны и введены в действие нормативно-правовые документы, определяющие порядок экспертизы продуктов из ГМИ:
а) порядок гигиенической экспертизы и регистрации пищевой продукции, полученной из ГМИ, на основании
постановления № 7 от 06.04.99 г. Главного государственного санитарного врача Российской Федерации;
б) порядок проведения санитарно-эпидемиологической экспертизы пищевых продуктов, полученных из ГМИ, на основании постановления № 14 Главного государственного санитарного врача РФ от 8.11.2000 г..
Этими постановлениями предусматриваются три направления санитарно-гигиенической экспертизы впервые поступающей на рынок России продукции из ГМИ — ме-дико-биологическая, медико-генетическая и технологическая и распределяются обязанности по отдельным направлениям экспертизы между ведущими научными учреждениями страны.
Комплексная оценка пищевой продукции, полученной из ГМИ
Головным научно-исследовательским институтом определен Институт питания РАМН (Москва). Гигиеническую экспертизу пищевой продукции осуществляют Научно-исследовательский институт питания РАМН, а также учреждения-соисполнители: Институт вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, Московский научно-исследовательский институт гигиены им. Ф.Ф. Эрис-мана Минздравсоцразвития России.
Медико-генетическую оценку пищевой продукции, полученной из ГМИ, проводят головной Центр «Биоинженерия» РАН и учреждение-соисполнитель Медико-гене-тический научный центр РАМН.
Технологической оценкой пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников, занимается Московский государственный университет прикладной биотехнологии Министерства общего и профессионального образования Российской Федерации.
Центр санитарно-эпидемиологического нормирования, гигиенической сертификации и экспертизы Минздрава России осуществляет общие организационно-технические мероприятия, выдает регистрационные удостоверения, а также ведет Федеральный реестр пищевой продукции из ГМИ, прошедшей санитарно-эпидемиологическую экспертизу.
Порядок проведения гигиенической экспертизы ГМИ пищи заключается в следующем. Организация, предприятие или фирма представляет в Центр санитарно-эпидемиологического нормирования, гигиенической сертификации и экспертизы Минздрава России комплект документации на продукцию из ГМИ (впервые поступающую на рынок), включающий:
♦ материалы, отражающие медико-генетическую оценку пищевой продукции, полученной из ГМИ, включая вносимую последовательность генов, маркерные гены антибиотиков, стабильность ГМИ-организмов на протяжении нескольких поколений с учетом стабильности и уровня выражения генов и др.;
♦ материалы по медико-биологической оценке пищевой продукции, полученной из ГМИ, включая са-
нитарно-химические показатели качества и безопасности, результаты токсикологических исследований на лабораторных животных, оценку аллергенных свойств продуктов, возможных мутагенных и канцерогенных эффектов продукта, его влияния на функ цию воспроизводства, результаты наблюдений на добровольцах и эпидемиологических исследований; ♦ материалы, характеризующие технологические свойства пищевой продукции, полученной из ГМИ: ор-ганолептические, физико-химические свойства, сохранность и влияние генетической модификации на технологические параметры продукции.
Этот комплект документов и образцы продукции передаются на экспертизу в НИИ гигиены питания РАМН и в учреждения-соисполнители, указанные выше.
Результаты экспертизы основных видов продовольственного сырья, полученного из ГМИ, обсуждаются Рабочей группой по правовым вопросам получения и использования пищи из трансгенных источников при Межведомственной комиссии по генно-инженерной деятельности. По результатам экспертизы представленной документации и образцов пищевой продукции Центр санитарно-эпи-демиологического нормирования, гигиенической сертификации и экспертизы Минздравсоцразвития России оформляет бланк регистрационного удостоверения (или мотивированный отказ), которое подписывает Главный государственный санитарный врач РФ. Срок действия регистрационного удостоверения — до трех лет.
В 2000 г. Минздравом РФ утверждена методическая база по оценке качества и безопасности для здоровья человека продовольственного сырья и пищевых продуктов из ГМИ (МУК 2.3.2.970-00).
Медико-биологические исследования пищевой продукции, полученной из ГМИ, проводят в соответствии с Методическими указаниями МУК 2.3.2.970-00 «Медико-биологическая оценка пищевой продукции, полученной из генетически модифицированных источников» (утв. Главным государственным санитарным врачом 24 апреля 2000 г.).
Методические указания разработаны с целью обеспечения единого научно обоснованного подхода к оценке качества и безопасности пищевой продукции, полученной из ГМИ, на этапах разработки, экспертизы и государственной регистрации этой продукции, требований к проведению медико-биологических исследований и предназначены для учреждений санитарно-эпидемиологической службы РФ, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор.
Эти требования применяются на этапах постановки на производство, гигиенической экспертизы, государственной регистрации, закупки, ввоза в страну и реализации продукции из ГМИ.
Медико-генетическая оценка пищевой продукции, полученной из ГМИ, проводится в соответствии с МУК 2.3.2.970-00. Необходимость проведения тех или иных исследований по данному разделу и для каждого конкретного вида пищевой продукции по этому пункту определяет эксперт Центра «Биоинженерия» РАН. Обязательными при этом являются методы:
♦ Rapd-анализ генотипов, определение наличия трансгенной ДНК, полимеразная цепная реакция. В качестве дополнительных применяют определение общих свойств генетической вставки и оценку функциональной вставки;
♦ количественное содержание ГМИ растительного происхождения в пищевой продукции определяют в соответствии с методическими указаниями МУК 4.2.1913-04 «Методы количественного определения генетически модифицированных источников (ГМИ) растительного происхождения в продуктах питания», которые предназначены для применения в лабораториях учреждений Госсанэпиднадзора, осуществляющих контроль за качеством продовольственного сырья и пищевых продуктов, в том числе и из ГМИ.
Методические указания содержат описание методов определения количественного содержания ГМИ растительного происхождения в пищевых продуктах, основанных
на идентификации рекомбинантной ДНК с использованием метода полимеразной цепной реакции (ПЦР).
Оценка пищевой продукции, полученной из ГМИ, по функционально-технологическим свойствам. Необходимость проведения тех или иных исследований по этому разделу определяется экспертом Московского государственного университета прикладной биотехнологии.
В жизнедеятельности человеческого организма главенствующую роль играет белок. Поэтому очень важно проследить, не претерпевает ли он каких-либо изменений в процессе генетической модификации.
Поскольку в процессе генетической модификации генома организма накапливаются компоненты, обеспечивающие его устойчивость к внешним неблагоприятным факторам — заболеваниям, насекомым-вредителям, гербицидам и т.д., то не исключено, что в определенных концентрациях эти компоненты могут быть опасными для здоровья человека. Поэтому в процессе промышленной переработки такого сырья могут потребоваться изменения в существующих технологиях, обеспечивающие минимальное остаточное содержание опасных для здоровья компонентов. Такие изменения в технологии могут сказаться на качественных показателях (функционально-технологических свойствах) белковых препаратов, вырабатываемых из ГМ-сырья. Кроме этого, предполагается целенаправленное изменение аминокислотного состава белков, выделяемых из генетически модифицированной пищевой продукции, для повышения их пищевой ценности. Это неизбежно повлечет изменение функционально-технологических свойств коммерческих белковых препаратов и отразится на качестве пищевых продуктов, в которых они используются, что, в свою очередь, может привести к необходимости внесения изменений в технологические процессы, использующие эти препараты. Следовательно, необходим мониторинг наиболее важных функциональных свойств белков, таких как растворимость, способность стабилизировать эмульсии и пены, образовывать гели, удерживать жир и влагу и напрямую связанных с характеристиками готовых пищевых продуктов.
Санитарно-химические показатели. Санитарно-химические исследования для каждого вида продукции, полученной из ГМИ, проводятся в соответствии с «Гигиеническими требованиями безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов» СанПин 2.3.2.1078-01. Их необходимость определяется экспертом с учетом химического состава исходной аналогичной продукции, полученной традиционным способом без использования генной инженерии.
При санитарно-химическом исследовании определяются:
♦ показатели безопасности: цинк, медь, свинец, мышьяк и другие металлы; пестициды; углеводороды, патулин и т.п.;
♦ показатели качества: общий белок, липиды, углеводы, витамины, нуклеиновые кислоты и т.п.;
♦ радиологические показатели безопасности — цезий-137 и стронций-90.
Оценка безопасности пищевой продукции, полученной из ГМИ, проводится на лабораторных животных по определенным схемам. Во время проведения эксперимента у животных изучают следующие показатели:
♦ интегральные — общее состояние животных, которое оценивают ежедневно (контроль массы тела, на забое определяют абсолютную и относительную массу тела);
♦ биохимические — определяются при забое животных (общий белок, глюкоза, мочевина, холестерин, минеральный состав и др.);
♦ гематологические — гемоглобин, общее количество лейкоцитов, эритроцитов и др.;
♦ морфологические (все животные, погибшие в ходе эксперимента, вскрываются, и составляется протокол вскрытия). Исследуют все внутренние органы макроскопически; печень, почки, селезенку, сердце, желудок и другие органы изучают дополнительно обзорными гистологическими методами; проводят дополнительные морфологические исследования (изучение жировых включений в клетке, выявление жирных кислот, холестерина, РНК и др.).
В некоторых случаях проводят специальные исследования, необходимость которых определяется экспертом Института питания РАМН. К специальным исследованиям относятся изучение возможного мутагенного действия продуктов, полученных из ГМИ, их аллергенности, влияния на функцию воспроизводства.
Действие на функцию воспроизводства определяют по:
♦ эмбриотоксическому влиянию (действие на эмбрион);
♦ гонадотоксическому влиянию (действие на половые органы);
тератогенному действию (способность вызывать уродства у плода).
Например, изучение эмбриотоксического действия проводят на белых линейных крысах. Животных разбивают на 3 группы; 1-я контрольная группа крыс получает на протяжении всего эксперимента общевиварный рацион; 2-я контрольная группа получает общевиварный рацион с включением исследуемого продукта, полученного традиционным способом в максимально возможном количестве. Опытная группа крыс получает общевиварный рацион с включением аналогичного продукта, полученного из ГМИ в том же количестве, что и крысы 2-й контрольной группы. Животные находятся на этих рационах 30 дней до спаривания, во время спаривания, беременности, лактации. Полученное потомство находится на этих рационах до момента половой зрелости. Исследуются 5 поколений крыс. Подсчитывают количество живых и погибших эмбрионов и вычисляют общую эмбриональную смертность.
Исследование возможного мутагенного действия испытуемых продуктов на соматические и половые клетки проводится на лабораторных животных, а изучение генных мутаций — на микроорганизмах или дрозофиле. Продукт скармливается лабораторным животным в различных количествах в качестве составной части диеты в разные сроки в зависимости от характера опыта.
На подопытных и контрольных животных проводятся цитогенетические исследования в соматических клетках (костный мозг, лимфоциты крови животных); изучение генетических изменений в половых клетках; изучение генных мутаций (по выбору на микроорганизмах или дрозофиле); микробиологические методы используются для первичной оценки на мутагенность.
Оценка потенциальной аллергенности пищевых продуктов, получаемых из ГМИ, проводится на разработанной в Институте питания РАМН экспериментальной модели аллергической реакции.
Метод исследования заключается в количественной оценке изменений тяжести протекания аллергической реакции у крыс, получающих в составе рациона тестируемый ГМ-продукт, в сравнении с животными, употребляющими аналогичный продукт, изготовленный из традиционных источников.
После математической обработки результатов исследования составляют заключение о потенциальной аллергенности исследуемого продукта.
Иммунологические исследования также проводят в экспериментах на животных (на крысах и мышах).
Исследования проводятся по схеме хронического эксперимента при тех же условиях кормления и содержания. Через 1 и 6 мес. от начала эксперимента определяют показатели гуморального, клеточного звена иммунитета, неспецифические факторы иммунитета.
Изучение влияния продукта на естественную резистентность мышей к сальмонеллам мышиного тифа проводят на модели внутрибрюшинного заражения мышей S. typhimurium. Испытываемый продукт скармливают мышам в течение 21 дня. После курса скармливания мышей заражают микробной культурой. Наблюдение за животными производят в течение 14 дней, затем подсчитывают процент гибели животных и проводят сравнительный анализ результатов.
Определение биологической ценности и усвояемости. Биологическую ценность белков определяют химическими и биологическими методами, а усвояемость — только биологическим.
В соответствии с рекомендациями ФАО/ВОЗ для определения биологической ценности белков химическим
методом используют метод расчета аминокислотного скора (АС) с коррекцией на усвояемость, основанный на анализе и сопоставлении содержания незаменимых аминокислот в исследуемых белках относительно их уровня в справочной аминокислотной шкале с последующей коррекцией полученных величин на коэффициент усвояемости.
Для изучения аминокислотного состава белков проводят их гидролиз с последующим определением содержания аминокислот на автоматических анализаторах. Для большей точности определения рекомендовано использовать пять типов гидролиза каждого белка, в том числе три кислотных гидролиза для определения серосодержащих аминокислот в виде цистеиновой кислоты и метио-нинсульфона и щелочной гидролиз для определения триптофана. При этом для всех незаменимых аминокислот, исключая серосодержащие и триптофан, строится кривая их содержания в зависимости от вышеуказанной продолжительности кислотного гидролиза, и по максимальному значению на ней оценивают уровень аминокислоты.
Аминокислотный скор белков рассчитывают общепринятым методом для каждой незаменимой аминокислоты путем соотношения ее содержания в 100 г исследуемого белка к ее же содержанию в справочной аминокислотной шкале, предложенной экспертами ФАО/ВОЗ. Биологическую ценность белка определяют путем коррекции установленной величины АС на коэффициент усвояемости (У) данного белка. Значения У в виде величин истинной усвояемости для различных белков, полученных в исследованиях с участием человека, приведены в методических указаниях.
Для определения биологической ценности и усвояемости белков на экспериментальных животных (белые крысы) возможно использование двух подходов: одноуровневые по содержанию белка в корме животных эксперименты с целью сравнительного изучения биологической ценности и усвояемости одновременно нескольких образцов белков и многоуровневые исследования для получения более объективной информации о качестве белков. Во всех случаях используют полусинтетические диеты.
Опытный (опытные) или контрольный (казеин) белки являются единственным источником азота в корме животных. В случае исследования белка, содержащегося в многокомпонентных пищевых продуктах, при составлении корма учитывается содержание в этих продуктах других пищевых веществ. Критерии оценки: масса тела ежедневно и поедаемость корма ежедневно, экскреция азота с фекалиями (за обменный период). Рассчитывают для каждого уровня белка в корме кажущиеся или истинные значения биологической ценности (коэффициент эффективности белка — КЭБ) и усвояемости (У) по определенным формулам.
Исследование возможной канцерогенности белка и его влияния на продолжительность жизни проводится в соответствии с действующими нормативными документами и в установленном порядке.
Клинические испытания новых видов пищевой продукции, полученной из ГМИ. В клинических исследованиях на добровольцах используют три уровня дозировок:
♦ нормальный диетический уровень — количество пищевого продукта, которое типично потребляется человеком;
♦ максимальный диетический уровень — максимальное количество пищевого продукта, которое может быть использовано для ежедневного потребления в течение длительного срока совместно с другой пищей;
♦ максимально выполнимое введение — максимальное количество пищевого продукта, которое можно употребить в течение короткого срока (обычно ограничивается физиологической вместимостью же-лудочно-кишечного тракта).
Условия проведения клинических испытаний: испытания проводятся на двух группах здоровых добровольцев по 10-20 человек в каждой группе в условиях стационара. Испытуемая группа потребляет продукт, полученный из ГМИ, контрольная группа — аналогичный продукт из традиционного источника. Сначала постепенно доводят количество потребляемого продукта питания до максимально возможного объема введения. Если не наблюдается проявлений непереносимости или других проявлений, то потребление на этом уровне сохраняют в течение 48 ч, контролируя общее состояние добровольцев, физиологические параметры, биохимические показатели крови и т.д. Инструментальные и лабораторные методы исследования используются по усмотрению врача. В случае обнаружения серьезных отрицательных проявлений испытание заканчивается до выяснения причин.
Если не наблюдались отрицательные проявления, то дозировка понижается до максимального диетического уровня, и испытание продолжается 90 дней с проведением следующих видов исследований:
♦ оценка органолептических свойств продуктов;
♦ оценка переносимости продуктов.
Изучение органолептических свойств продуктов осуществляется анкетно-опросным методом, оцениваются их вкус, запах, консистенция.
Переносимость продуктов оценивается путем клинического наблюдения по субъективным и объективным признакам.
Исследуется состояние кожных покровов, системы пищеварения, сердечно-сосудистой системы и других органов и систем организма. Определяются:
♦ биохимические показатели в сыворотке крови (общий белок, белковые фракции, креатинин, азот мочевины и мочевая кислота и др.);
♦ гематологические показатели периферической крови (гемоглобин, количество эритроцитов, лейкоцитов и др.);
♦ иммунологические показатели (клеточного, гуморального иммунитета и др.).
В качестве дополнительных исследований рекомендуется:
1. Проведение исследований на протяжении 6 месяцев. Наблюдаются от 100 до 500 добровольцев, потребляющих новый продукт на максимальном диетическом уровне. Контролируется общее состояние добровольцев, физиологические параметры, биохимические показатели крови и т.д.
2. Проведение длительных популяционных исследований, которые позволят оценить долговременные последствия влияния потребления новых продуктов питания на большое количество людей и идентифицировать маленькие субпопуляции (менее чем 0,1% населения), которые могут иметь особые проблемы с новыми продуктами питания. В зависимости от природы (характера) продукта питания испытания проводят на 1000-3000 добровольцах, получающих новые продукты питания на нормальных диетических уровнях в течение 1,5—2 лет. В дополнение к контролю жизненно важных признаков, физиологических параметров, биохимических показателей крови и т.д. также необходимо обеспечить сбор информации относительно влияния этой продукции на деторождение и количество онкологических заболеваний.
На основании постановления Главного санитарного врача РФ № 80 от 30 11.2007 г. утверждены МУ 2.3.2.2306-07 «Медико-биологическая оценка безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения».
Медико-биологическая оценка пищевой продукции, полученной с использованием генетически модифицированных микроорганизмов (ГММ). В 2003 г. в России вышло Постановление Главного государственного санитарного врача РФ № 149 «О проведении микробиологической и молекулярно-генетической экспертизы генетически модифицированных микроорганизмов, используемых в производстве пищевых продуктов».
В постановлении говорится о необходимости ввести в гигиеническую характеристику продукции, подлежащей санитарно-эпидемиологической экспертизе в ГУ НИИ питания РАМН, микробиологическую и молекулярно-ге-нетическую экспертизу ГММ.
Обязанности по проведению микробиологической и молекулярно-генетической экспертизы пищевой продукции, полученной с использованием ГММ, в том числе пробиоти-ков, возложены на ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН.
Утвержден примерный перечень продукции, полученной с использованием ГММ, которая подлежит санитарно-эпидемиологической экспертизе в ГУ НИИ питания РАМН и ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, в который вошли:
1. Сыры, полученные с использованием дрожжевых затравок, экспрессирующих рекомбинантный химозин.
2. Пиво, полученное с использованием генетически модифицированных дрожжей.
3. Молочная продукция, полученная с использованием стартовых культур.
4. Копченые колбасы, полученные с использованием стартовых культур.
5. Пищевые продукты, технология приготовления которых предусматривает использование кисломолочных бактерий — продуцентов ферментов.
6. Пробиотики, содержащие генетически модифицированные штаммы.
Утвержден примерный перечень документов и образцов продукции, необходимых для проведения микробиологической и молекулярно-генетической экспертизы ГММ, используемых в производстве пищевых продуктов, который включает:
1. Заявку на проведение экспертизы от заявителя.
2. Материалы, отражающие молекулярно-генетическую и микробиологическую оценку ГММ:
— стабильность генома сконструированного ГММ;
— сравнительный анализ фенотипических свойств ГММ и микроорганизма-реципиента;
— возможные взаимодействия ГММ с иммунной системой человека и с его микрофлорой;
— биологическая стабильность сконструированного ГММ;
— патогенность ГММ (способность вызывать заболевания и т.п.).
3. Культуру штамма ГММ, предназначенного для производства пищевой продукции.
Через год были утверждены методические указания по порядку и организации контроля за пищевой продукцией, полученной из/или с использованием ГММ и микроорганизмов, имеющих генетически модифицированные аналоги (МГМА). В МУ отмечено, что Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека в соответствии с законодательством РФ проводит санитарно-эпидемиологическую экспертизу пищевых продуктов, полученных из/или с использованием ГММ и МГМА, и обследование организаций на стадиях:
♦ ввоза продуктов из-за рубежа (пункты пропуска грузов на государственной границе Российской Федерации, пункты таможенного оформления грузов);
♦ постановки на производство;
♦ изготовления;
♦ расфасовки, упаковки и маркировки;
♦ хранения и перевозки;
♦ реализации.
Причем санитарно-эпидемиологической экспертизе на стадии оборота подлежит только продукция, прошедшая санитарно-эпидемиологическую экспертизу и государственную регистрацию в РФ в установленном порядке и внесенная в Реестр санитарно-эпидемиологических заключений на продукцию, прошедшую санитарно-эпидемиологическую экспертизу, и в Государственный реестр.
Если пищевая продукция, полученная из/или с использованием ГММ и МГМА, новая или впервые ввозимая на территорию Российской Федерации и не имеет свидетельства о государственной регистрации, она не подлежит санитарно-эпидемиологической экспертизе.
Пищевая продукция по состоянию в ней технологической микрофлоры или микроорганизмов-продуцентов может относиться:
♦ к группе I, к которой относятся продовольственное сырье, пищевые продукты и пищевые компоненты, состоящие из/или содержащие жизнеспособную технологическую микрофлору;
♦ к группе II — продукты, содержащие нежизнеспособные микроорганизмы технологической микрофлоры;
♦ к группе III — пищевые компоненты и вещества, пищевые добавки и микронутриенты, произведенные с участием штаммов-продуцентов, но освобожденные от них в технологическом процессе.
Для каждой из трех групп продукции сотрудники лабораторий проводят экспертизу документации и соответствую