Методы гельминтолярвоскопии
Ларвоскопия (от лат. larva - личинка, греч. skopeo - смотрю) -совокупность приемов обработки и исследования проб материала с целью выявления личинок гельминтов и установления по ним возбудителя.
Гельминтоларвоскопию применяют для диагностики диктиокаулеза и протостронгилидозов жвачных, стронгилятозов. и стронгилоидоза у сельскохозяйственных животных.
Гельминтоларвоскопия при диктиокаулезе
В теплое время года быстро развиваются личинки стронгилят пищеварительного тракта, что затрудняет исследование материала. Поэтому пробы фекалий после взятия сразу следует направлять в лабораторию, чтобы исследовать до выхода из них личинок стронгилят.
Для дифференциации диктиокаулюсов предложена методика окраски. К осадку п пробирке или иа стекло добавляют 1-2 калли 0,1% водного раствора метиленового синего. Осадок встряхивают и через 20-30 с. микроскопируют. Личинки диктиокаулюсов овец окрашиваются в ярко-сиреневый, а личинки диктиокаулюсов телят в светло-сиреневый цвет. Личинки других нематод остаются неокрашенными, частицы корма окрашиваются в зеленый цвет, а жидкость - в голубой.
Личинки диктиокаулюсов овец располагаются в самых поверхностных слоях фекальных шариков. Поэтому разрушать их структуру при закладке проб не следует. Личинки протостронгилюсов, мюллерий, напротив, в шариках фекалий овец распределяются равномерно, на поверхности их находится незначительная часть. Поэтому при исследовании на указанные гельминтозы предварительно шарики фекалий следует разрушать. При этом эффективность исследований увеличивается в 10 раз.
Метод Вайда
Эта методика очень проста и применяется для диагностики диктиокаулезов жвачных, протостронгилеза, мюллериоза и цистокаулеза овец и коз.
На предметное или часовое стекло кладут несколько шариков свежевыделенных фекалий овец и коз и добавляют небольшое количество воды (температура около 40°С). Если шарики помещают на предметное стекло, то достаточно несколько капель воды. Через 40 мин. шарики удаляют, оставшуюся жидкость на стекле микроскопируют на наличие личинок нематод.
Метод Беумана-Орлова
Эта методика наиболее широко распространена и несложна по технике исполнения.. Для исследования по этому методу нужно иметь металлические или пластмассовые воронки (с верхним диаметром 10 см), маленькие гельминтологические пробирки (5-8 см высотой и 0,8-1 см диаметром), резиновые трубки (диаметром 0,7-0,8 см), штатив для воронок и зажимы.
Метод основан на следующем: личинки в теплой влажной среде активно выбираются из фекалий и, попав в воду, падают на дно.
Фекалии (5-10 г) кладут на металлическое сито или заворачивают в марлю и помещают в воронку. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку длиной 10 см с зажимом, в свободный конец трубки вставляют пробирку. Собранный в таком виде аппарат Бермана ставят в штатив и заполняют теплой водой (40°С).
Аппарат с пробами от овец и коз оставляют при комнатной температуре на 3-6 часов, крупного рогатого скота и лошадей на 12 часов. За это время личинки нематод выползают из пробы в жидкость и опускаются до места перекрытия трубки зажимом. После истечения срока зажимы открывают и наполняют пробирки водой, в которой могут находиться личинки нематод. Пробирки ставят в штатив на 20 мин. для осаждения личинок. Затем воду из пробирок сливают до осадка. Осадок встряхивают на предметные стекла и микроскопируют. Личинки нематод подвижны и они легко обнаруживаются.
Метод Шильникова
Автор еще более упростил методику Бермана-Орлова. В этой методике используются обыкновенные медицинские градуированные стаканчики (емкостью 30 мл), имеющие форму усеченного конуса и сферическое дно. Выпуклость дна направлена кверху. Пробы фекалий завертывают в марлевые салфетки, раскладывают по стаканчикам и заливают теплой водой. Через 8-10 часов пробы осторожно вынимают, а жидкость отстаивают 10-15 мин Затем стаканчики медленно наклоняют, сливают воду до появления мути. Дают отстояться осадку жидкости 5-10 мин- После этого стаканчик медленно наклоняют и из него глазной пипеткой отсасывают верхний прозрачный слой воды до тех пор, пока в пипетку не начнет всасываться осадок на дне. При аккуратном отсасывании на дне стаканчика остается 0,5-1 мл жидкости. Этот осадок каплями наносят на предметное стекло и микроскопируют.
Эта методика заслуживает внимание практиков. Она проста и удобна для выполнения в любых условиях.
Культивирование личинок гельминтов
Его проводят с целью диагностики гельминтозов вообще и дифференциальной диагностики в частности. Культивирование заключается в создании для яиц гельминтов, находящихся в фекалиях, благоприятных условий, чтобы личинки выросли до инвазионной стадии. По их морфологии определяют вил возбудителей.
У домашних и диких травоядных в пищеварительном факте часто паразитируют нематоды из подотряда стронгилят. Выделяющиеся с фекалиями яйца этих нематод трудно различимы. Поэтому методами овоскопии практически ставят только общий диагноз. Дифференциальный диагноз возможен по развившимся личинкам
4.5.1. Метод культивирования личинок
Порцию свежих фекалий животного в количестве 10-30 г помещают в стакан, закрывают куском стекла и оставляют в. термостате при 25-27°С на семь дней или при комнатной температуре на 10-12 дней. По мере подсыхания пробу фекалий слегка увлажняют водой. По истечении указанных сроков пробу фекалий исследуют по методу Бермана-Орлова или Шильникова.
Освобожденный от фекалий стакан заполняют водой, выдерживают 15-20 мин., затем верхний слой осторожно сливают, а осадок исследуют в часовом стекле под микроскопом.