Методики имеют решающую роль в проведении исследований. В ветеринарной
медицине применяются в основном методики, которые так или иначе модифици
руют методики, использующиеся в гуманной медицине или биологии; нередко такие
методики прямо переносят на материал ветеринарного происхождения. Это тем
более логично, поскольку определенное количество методик вначале разрабаты
ваются на животны х (мышах, крысах, морских свинках, собаках и др.).
Использованы различные методы исследования: зоотехнические — определение
массы тела животных в разных вариантах опытов, среднесуточных привесов; общекли-
нические методы (осмотр, пальпация, аускультация) в оценке габитуса, состояния кожи,
слизистих оболочек, состояния отдельных систем организма, измерение температуры
тела, частоты дыхания и пульса; морфологические — при исследовании количества эри
троцитов и лейкоцитов в крови (в счетной камере ГЬряева), выведение лейкограммы — по
общепринятой методике, а также цитологическое и гистологическое изучение.
Гемоглобин определяли гемоглобин-цианидным методом.
В крови подопытных животных определяли популяционный состав лимфоцитов
по методу М. Jondaletal. в модификации в реакции спонтанногорозеткообра-
зован и я с 1 % -м раствором эритроцитов баран а, который добавляли к суспензии
лимфоцитов (1:1) и инкубировали в термостате при температуре 37 °Снапротяже
нии 5 мин, после чего суспензию лимфоцитов центрифугировали со скоростью
1500 о б /м и н и выдерживали 18 ч при температуре 4 °С. Из осадка готовили мазки,
которые фиксировали метиловым спиртом (20 мин), красили азур-эозином (pH 6,8)
по методу Романовського-Лймза (10 мин) и изучали под микроскопом (х 1500). В
мазках подсчитывали относительное соотношение лимфоцитов, которые образо
вывали «розетки» (лимфоциты, присоединяющие 3 и больше клеток) с эритроцита
ми баран а, к количеству всех лимфоцитов.
Выделение В-лимфоцитов проводили по методике Е-розеткообразования.
В части опытов иммунологические показатели оценивали несколько иначе.
Лимфоциты выделяли на фикол-верографине (плотность 1,077 г/с м 3). Количество
Т-лимфоцитов идентифицировали методом Е-РОК, В-лимфоцитов с рецепторами
к комплемента ЕАС-РОК, с Ig G- и Ig М -рецепторами (B-RIgG и B-RIgM) — в антиимму-
ноглобулиновомрозеткообразующемтесте. В сыворотке крови определяли концентра
ции иммуноглобулинов диффузионным методом в агаре, бактерицидную активность
(БАСК) — по О. В. Смирновой и Т. А. Кузьминой, лизоцимную (ЛАСК) — по К. А. Каграмановой и 3. В. Ермольевой, C lq - и СЗ-компоненты комплемента с моноспецифиче-
скимикроличьимиантисыворотками в РИД. Фагоцитарную активность и фагоцитар
ный индекс лейкоцитов определяли по В. С. 1Ъстеву.
В большинстве же опытов фагоцитарную активность лейкоцитов и фагоцитарный
индекс определяли по методу. Иммуноглобулины определяли в реакции радиаль
ной иммунодиффузии по Манчини, а также дискретны мосаждением, при
котором иммуноглобулины разны х классов осаждаются под влиянием веронал-
мединал-цинк-сульфитного, аммоний-сульфатного и цинк-салицилатного реактивов
и фотонефелометруются при длине волны 440А,. Бактерицидную активность сыво
ротки крови изучали по методу О. В. Бухарина и В. Л. Созыкина.
Лизоцимную активность сыворотки крови определяли фотонефелометрическипо
методу, розработанному отделом зоогигиены УНД1ЕВ [12].
Белоксинтезирующую функцию печени устанавливали по содержанию общего
белка, который определяли рефрактометрическим способом, пигментную — по
содержанию билирубина (по методу Иендрашика, Клеггорна и Грофа в модификации
В. И. Левченка и В. В. Влизла).Мочеобразуюшую функцию печени изучали по уров
ню мочевины в сыворотке крови, применяя реакцию с диэтилмонооксимом.
Состояние клеток печени оценивали по активности индикаторных ферментов —
аспарагиновой (ACT) и аланиновой (АЛТ) трансфераз методом Ратмана и Френзеля.
Содержание общего кальция в сыворотке крови определяли комплексонометрическим
методом с трилоном Б, а также набором реактивов фирмы «EogleDiagnostics» (USA).
Уровень неорганического фосфора устанавливали в реакции с аскорбиновой кис
лотой по Dyce.
Уровень витамина А в сыворотке крови устанавливали по методике О. Г. Бассея в
модификации В. И. Левченка и соавт. (1998).
Изучение проводили в начале опытов, в ходе опытов, а так же по их окончанию.
В проведении исследований также применяли биохимический анализатор S tatfox
(США). Определение содержания металлов в сыворотке крови животныхосущест
вляли методом атомно-абсорбционнойспектрофотометрии.
В сыворотке крови определяли содержание гликопротеинов методом Щ. П. Штейн-
берг и Я. И. Доценко, хондроитинсульфатов — методом М. N emeth-C soka в м одифика
ции JI. И. Слуцкого (1969), гликозамингликанов — методом М. Р. Ш терна, Ф. С. Леон
тьевой, О. П. Тимош енко (1990).
Количество сиаловых кислот в сыворотке крови определяли по методу Гесса.
Динамику заживления ран определяли методом целлофанографии с вычислением
площади на милилиметровой бумаге.
Кислородзависимый метаболизм фагоцитов определяли при помощи НСТ-теста.
Статистическую обработку проводили н а персональном компьютере по програм
ме «Статистика» с использованием t -критерия Стьюдента.