ТЕМА: МИКРООРГАНИЗМЫОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА
Цель занятия: изучить состав микробиома организма человека, оценить роль микробиоты организма человека, понятия «гнотобиология» и «дисбиоз».
План занятий
1. Микробиом организма человека: резидентная и транзиторная микробиота, различия в составе микробиоты различных органов и тканей.
2. Значение нормальной микробиоты для организма человека.
3. Понятие о колонизационной резистентности микробиоты организма человека и селективной деконтаминации.
4. Методы изучения микробиома организма человека.
Задания для выполнения лабораторной работы.
1. Провести исследование препарата из зубного налета.
Из зубного налета можно приготовить прижизненные препараты («раздавленная» капля) и обнаружить подвижные микроорганизмы с помощью темнопольной и (или) фазово-контрастной микроскопии. Препарат из зубного налета можно окрасить по Бурри (зубной налет поместить в каплю физиологического раствора, полученную взвесь смешать с каплей туши и при помощи стекла со шлифовальным краем приготовить мазок, как мазок крови), высушить на воздухе и микроскопировать с иммерсией.
2. Провести посев смывов со слизистой оболочки зева.
Смыв со слизистой оболочки зева делают смоченным в изотоническом растворе хлорида натрия стерильным тампоном. Затем этим же тампоном делают посев на чашку Петри с кровяным агаром.
Смывы исследуют на общую обсемененность микроорганизмами, на присутствие санитарно-показательных (стафилококки, стрептококки) и других патогенных микроорганизмов. Ориентировочно идентификацию микробов проводят по характеру выросших колоний и морфологии клеток в мазках, окрашенных по методу Грама.
3. Провести посев с кожи рук.
Метод смывов. Смывы с кожи рук производят стерильными марлевыми салфетками размером 5х5 см, погруженными в физиологический раствор. Марлевой салфеткой тщательно протирают обе ладони, проводя не менее 5 раз по одной ладони и пальцам, затем околоногтевые и межпальцевые пространства обеих рук. После отбора проб марлевую салфетку помещают в широкогорлые пробирки или колбы с физиологическим раствором и стеклянными бусами, встряхивают в течение 10 минут. Жидкость засевают на 2 чашки Петри с мясопептонным агаром (по 0,5 мл) и в 2 пробирки с 0,5% сахарным бульоном (по 1 мл). Посевы инкубируют при температуре 370С в течение 48 часов.
Рис. 16. Микрофлора зубного налета.
Метод отпечатков (контактный метод). Кусочки марли (в виде кружков диаметром 3-6 см), мембранные фильтры или полоски фильтровальной бумаги помещают в чашки Петри и заливают расплавленной плотной средой (3% мясо-пептонным агаром или средой Эндо двойной концентрации). После остывания стерильным пинцетом забирают кружочки или полоски и накладывают стороной, пропитанной средой, на исследуемую поверхность, прижимая осторожно пинцетом и затем переносят в стерильную чашку Петри для последующей инкубации (нижней поверхностью вверх). Метод отпечатков выгодно отличается от метода смывов возможностью непосредственного обнаружения загрязнения объектов окружающей среды и отсутствием потери микробов на исследуемых предметах (что всегда происходит при распределении микрофлоры со смытой поверхности в смачивающей жидкости). Посевы инкубируют при температуре 370С в течение 48 часов.
Смывы и отпечатки исследуют на общую обсемененность микроорганизмами, на присутствие санитарно-показательных (БГКП, энтерококков), условно-патогенных и патогенных (стафилококки, сальмонеллы, синегнойная палочка и др.) микроорганизмов. Ориентировочно идентификацию микробов проводят по характеру выросших колоний, газообразованию на глюкозопептонном среде и морфологии клеток в мазках, окрашенных по методу Грама.
Кожа операционного поля и рук хирурга перед оперативным вмешательством должна быть стерильна, то есть рост микроорганизмов должен отсутствовать как на твердой, так и на жидкой питательных средах.
Вопросы для обсуждения.
1. Микрофлора кожи, глаз и уха. 2. Микрофлора рта и желудочно-кишечного тракта. 3. Микрофлора дыхательных путей. 4. Микрофлора мочеполовой системы. 5. Значение нормальной микрофлоры для организма человека. 6. Различия между резидентной и транзиторной микрофлорой человека. 7. Какие факторы влияют на изменение видового и количественного состава микрофлоры человека. 8. Различия в составе микрофлоры в различных отделах кишечника. 9. Причины незначительного содержания микроорганизмов в желудке. 10. Изменения, происходящие при дисбиозе. 11. Понятия «эубиоз», «дисбиоз» и «дисбактериоз».
Оформление лабораторной тетради.
Зарисовать мазок зубного налета. Зарисовать колонии на чашке Петри с посевом кожи рук и смыва со слизистой оболочки зева.