Выделение геномной ДНК E.coli




Характеристика РГП «Национальный центр биотехнологии»

Республиканское государственное предприятие «Национальный центр биотехнологии» Комитета науки Министерства образования и науки Республики Казахстан – ведущий биологический научный центр страны, реализующий государственную политику поддержки и развития биотехнологической отрасли - создан Указом Президента Республики Казахстан в 1993 г.

Национальный центр биотехнологии в 2015 году переехал в новое здание в Левобережной части столицы по Кургальжинской трассе.

Строительство нового научно-исследовательского комплекса проводилось по проекту известной в мире компании CUH2A, специализирующейся на проектировании лабораторных помещений. Площадь центра составляет более 29000 кв.м. Комплекс включает 5 отдельных зданий, соединенных между собой теплыми переходами. Площадь лабораторных помещений составляет 10 000 кв.м, включает 20 лабораторий, оснащенных высокотехнологичным научным оборудованием. Более 4000 кв.м. площади занимает виварий для содержания лабораторных животных и проведения исследований. Для проживания ученых предусмотрено общежитие площадью более 6000 кв.м. Комплекс соответствует всем научным и экологическим международным стандартам, в том числе и стандартам биологической безопасности BSL-2, которые обеспечивают экологическую и биологическую безопасность проводимых исследований для окружающих.

Научный потенциал НЦБ составляют 325 высококвалифицированных специалистов в области биотехнологии, молекулярной биологии, генетики, биохимии, вирусологии, иммунологии, фармакологии. Среди них 7 докторов наук, 37 кандидатов наук, 4 доктора Ph.D, также 7 выпускников программы «Болашак».

 

 

Рис.№1 РГП «Национальный центр биотехнологии»

Структура РГП «Национальный центр биотехнологии»

 

 

 

Лаборатория генетики и биохимии микроорганизмов

Заведующий лабораторией - кандидат химических наукХасеновБекболатБауржанович.

 

Направления исследований лаборатории

ü Создание генно-инженерных конструкций для получения целевых продуктов: белков, рекомбинантных микроорганизмов, трансгенных растений

ü Разработка технологии получения трансгенных растений, экспрессирующих гены белков медицинского назначения

ü Получение рекомбинантных белков с ферментативной и антигенной активностями в культуре бактерий и дрожжей

ü Изучение механизмов репарации ДНК в прокариотических и эукариотических организмах

 

Инновационные разработки

ü Генетическая конструкция и штамм, продуцирующий белок р24 вируса лейкоза крупного рогатого скота в бактериальной культуре

ü Высокоактивная рекомбинантная полимераза taq-pol

Материалы и методы исследований

3.1 Выделение плазмидной ДНК E.coli

 

Выделение геномной ДНК E.coli

 

Для выделения геномной ДНК использовала набор для выделения нуклеиновых кислот американской компании Promega. Для выделения была взята культура клеток штаммаE.coliS(грамотрицательный).

 

 

Рис. №2 Культура клеток штамма E.coliS

 

 

Процесс состоит из следующих этапов:

1) К культуре добавила 600 мклNucleiLysissolution (лизирующий раствор) и ресуспензировала

2) Инкубировала на водяной бане при температуре 800С в течение 5 мин. Затем охладила до комнатной температуры

3) Добавила 3 мклRNAsesolution (раствор РНКазы), перемешала инвертированием

4) Инкубировала на водяной бане при температуре 370С в течение 60 мин. Охладила до комнатной температуры

5) Добавила 200 мклProteinPrecepitationsolution (раствор для осадки белков). Открутила на вортексе и спине по 20 сек

6) Инкубировала на льду в течение 5 мин

7) Центрифугировала в течение 3 мин при 13000-16000 об

8) Удалиласупернатант в чистую пробирку с 600 мклизопропанола

9) Инвертировала

10) Центрифугировала в течение 2 мин при 13000-16000 об

11) Удалила супернатант. Добавила 600 мкл 70% этанола. Инвертировали

12) Центрифугировала в течение 2 мин при 13000-16000 об. Удалила этанол

13) Подсушила осадок на фильтровальной бумаге в течение 10-15 мин

14) Добавила 100 мклDNARehydrationsolution (раствор регидратации ДНК). Инкубировали на водяной бане при температуре 650С в течение 60 мин

15) Хранить полученный продукт рекомендуется при температуре 2-8 С

 



Поделиться:




Поиск по сайту

©2015-2024 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2016-04-26 Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных


Поиск по сайту: