Методические указания для студентов к практическому занятию № 37.
Тема занятия: Микробиологическая диагностика лептоспирозов и боррелиозов.
Цель: Изучение методов микробиологической диагностики, терапии и профилактики заболеваний, вызванных лептоспирами и боррелиями.
Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.
Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.
Тема 37: Микробиологическая диагностика лептоспирозов и боррелиозов.
Актуальность темы:
Возбудитель лептоспироза
Лептоспироз - инфекционное заболевание, вызываемое Leptospira interrogans, характеризующаяся поражением кровеносных капилляров, печени, почек, мышц, ЦНС, нередко сопровождающаяся желтухой. Возбудитель лептоспироза был выделен в 1914 г. Р. Инадо и И. Идо.
Таксономия. Возбудитель лептоспироза относится к отделу Gracilicutes, семейству Leptospiraceae, роду Leptospira.
Морфология и тинкториальные свойства. Лептоспиры - бактерии, имеющие извитую форму, длиной 7-14мкм, толщиной 0,1мкм; характеризуются наличием многочисленных мелких завитков, концы лептоспир загнуты в виде крючков (вторичные завитки). Не образуют спор и капсул; подвижны - совершают поступательное, вращательное, сгибательное движения. Лептоспиры анилиновыми красителями красятся плохо, по Романовскому-Гимзе окрашиваются в розовый цвет, грамотрицательны. Оптимальный способ изучения их морфологии - темнопольная микроскопия.
Культивирование. Лептоспиры культивируют в аэробных условиях на специальных питательных средах с нативной кроличьей сывороткой при 25-350С и рН 7,2-7,4. Растут медленно.
Ферментативная активность. Биохимическая активность лептоспир невысокая.
Антигенная структура. Среди представителей рода Leptospira выделяют около 200 сероваров, объединенных в 19 серологических групп. Родоспецифическим является полисахаридный фибриллярный антиген, принадлежность к группе и варианту определяется соответственно оболочечными белковыми и липопротеиновым антигенами.
Факторы патогенности. Патогенные свойства лептоспир обусловлены образованием малоизученных экзотоксиноподобных веществ и эндотоксинов. Лептоспиры, кроме того, продуцируют фибринолизин и плазмокоагулазу.
Резистентность. Лептоспиры очень быстро погибают при действии высоких температур, дезинфицирующих средств, но достаточно устойчивы к низким температурам. В воде естественных водоемов сохраняют жизнеспособность в течение 5-10 дней, в сырой почве - до 270 дней.
Восприимчивость животных. Многие животные чувствительны к лептоспирам.
Эпидемиология. Лептоспироз - широко распространенный зооноз, встречается во всех частях света. Существуют природные очаги лептоспироза - преимущественно в лесах, заболоченных местностях, реках. Источником инфекции в них являются дикие животные - грызуны, лисы, песцы и др. Моча животных попадает в воду, загрязняет почву, растительность. Заболеваемость характеризуется строгой сезонностью (июнь - сентябрь) и связана с сельскохозяйственными работами (покос лугов, уборка сена), а также сбором грибов, ягод, охотой, рыбалкой. В сельской местности источником инфекции могут быть домашние животные: свиньи, крупный рогатый скот, собаки. Заражение может происходить пищевым путем, например при употреблении молока. Возможен также контактно-бытовой путь передачи - при уходе за больными животными. Однако основной путь передачи инфекции - водный. Нередко в сельской местности при купании людей в загрязненных мочой больных животных водоемах возникают «купальные» вспышки. Возможны случаи лептоспироза также в портовых городах, где много крыс.
Патогенез. Входные ворота инфекции - слизистые оболочки ротовой полости, глаз, носа, кожа. Лептоспиры распространяются по лимфатическим путям, проникают в кровь и током крови разносятся по организму, попадая в различные органы - печень, почки, легкие и т.д. В органах микроорганизмы интенсивно размножаются, затем вновь поступают в кровь. В результате действия возбудителей и их токсинов повреждается стенка кровеносных капилляров и наблюдаются кровоизлияния в различные органы и ткани. Больше всего страдают печень, почки, надпочечники, сердце, мышцы.
Клиническая картина. Инкубационный период обычно продолжается 7-10 дней, заболевание – 5-6 нед. Болезнь, как правило, начинается остро, температура тела повышается до 39-400С, появляются головная боль, резкие боли в мышцах, особенно в икроножных. В зависимости от поражения тех или иных органов появляются симптомы их повреждения: почечная недостаточность, желтуха и др. Характерна волнообразная лихорадка. Клинические формы лептоспироза различны - от легких до тяжелейших, приводящих к смерти.
Иммунитет. Иммунитет длительный, напряженный, но характеризуется строгой серовароспецифичностью.
Микробиологическая диагностика. В качестве материала для исследования на 1-й неделе заболевания берут кровь, позже можно использовать мочу, спинномозговую жидкость. Применяют бактериоскопический метод («темнопольная микроскопия»): бактериологический, биологический методы. Но наиболее широко используют серологический метод (РСК, РНГА, РА, реакция лизиса); по нарастанию титра антител судят о наличии заболевания.
Лечение. Применяют антибиотики и противолептоспирозный гетерологичный иммуноглобулин.
Профилактика. Неспецифическая профилактика заключается в соблюдении ряда правил: нельзя употреблять сырую воду из непроточных водоемов для питья и умывания, купаться в небольших водоемах, особенно в местах водопоя скота. Для специфической профилактики по эпидемическим показаниям используют убитую вакцину.
Возбудитель эпидемического возвратного тифа
Эпидемический возвратный тиф (Typhus recurrens) - инфекционное заболевание, вызываемое Borrelia recurrentis, характеризующаяся приступами лихорадки с мышечными и головными болями, сменяющимися безлихорадочными периодами. Антропонозное заболевание. Спирохета открыта в 1868 г. немецким врачом О. Обермейером.
Боррелии - крупные спирохеты с большими неравномерными завитками; грамотрицательны, подвижны.
Переносчиком возбудителей является платяная вошь. При кровососании боррелии от больного поступают в кишечник вши и могут сохраняться там в течение всей ее жизни. Заражение происходит в результате раздавливания вши, втирания возбудителей, содержащихся в гемолимфе, в расчесы. Внедрившиеся в организм боррелии захватываются макрофагами и лимфоидными клетками и по мере размножения поступают в кровь. Разрушаясь, освобождают эндотоксины, являющиеся причиной клинических проявлений - озноба, повышения температуры тела, головных и мышечных болей и других симптомов. Инкубационный период в среднем составляет 7-8 дней.
Постинфекционный иммунитет нестойкий и непродолжительный.
Лечение проводят антибиотиками.
Специфическая профилактика не разработана. Основные меры борьбы сводятся к уничтожению вшей, выявлению больных, санитарной обработке лиц, находившихся в очаге.
Микробиологическая диагностика базируется на обнаружении боррелии в мазках из крови больного, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Вспомогательное значение имеют серологические реакции.
Для дифференциации с эндемическим сыпным тифом применяют заражение морских свинок кровью больного.
Схема микробиологического исследования при возвратном тифе
КРОВЬ СЫВОРОТКА КРОВИ
 |  | ||
Микроскопическое Биопроба РСК и другие
исследование серологические
реакции
Мазок, Препарат Препарат Заражение ОТВЕТ
окраска «толстая» «раздавленная» морской
водным капля, капля, свинки
фуксином окраска микроскопия
по Рома- в темном Мазок из крови, Препарат «толстая»
новскому- поле окраска фуксином капля, окраска по
Гимзе Романовскому-Гимзе
ОТВЕТ
ОКОНЧАТЕЛЬНЫЙ ОТВЕТ
Конкретные цели:
· Изучить методы микробиологической диагностики лептоспирозов и боррелиозов.
· Трактовать результаты микроскопического исследования.
· Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии.
Уметь:
· Забирать материал для исследования от больных
· Выделить чистую культуру
· Трактовать результаты микроскопического исследования
Теоретические вопросы:
1. Возбудитель.
· Свойства. Резистентность.
· Патогенность для человека и животных. Факторы патогенности, токсины.
· Патогенез заболевания у людей, иммунитет.
· Микробиологическая диагностика.
· Специфическая профилактика и лечение
Практические задания, которые выполняются на занятии:
1. Микроскопия демонстрационных препаратов.
2. Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.
3. Разбор схемы лабораторной диагностики
4. Оформление протокола.
Литература:
1. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и ви-усология /Учебник для медицинских ВУЗов, Ст-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.
2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.-2-е изд., перераб. и доп.- М.:Медицина, 1983,- 512с.
3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.- Киев: Вища школа, 1992.- 431с.
4. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.- М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.- 768с.
5. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. /Под ред. М.П. Зыкова.- М. «Медицина». 1977.– 288с.
6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес.– М.: Медицина, 1986.– 512с.
7. Конспект лекции.
Дополнительная литература:
1. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и иммунология.- Алма-Ата.: «Ка-захстан», 1974.– 372с.
2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби.- К., 1995.– 321с.
3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.- М.: Медицина, 1990.- 559с.
4. БМЭ, Т. 1, 2, 7.
5. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов.– Мн.: Выш. шк., 1986.– 255с.