Процедура. Оценка методики.




Оценку точности проводили на трех концентрациях, лежащих в диапазоне нормируемого количества белка в препарате: 0,020-0,100 мг/мл..

В мерные пробирки вместимостью 10 мл помещали навески СО Лактоферрин содержащего 0,02-0,100 мг белка, растворяли в 1 мл раствора. Рассчитывали содержание белка в модельных пробах (мг).

В каждую пробирку добавляли по 5 мл реактива Фолина. Тщательно перемешивали и оставляли на 10 мин в темноте при комнатной температуре. Затем добавляли 0,5 мл реактива Фолина и оставляли пробы на 30 мин в темноте при комнатной температуре.

Оптическую плотность растворов измеряли на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 750 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Между измерениями кюветы промывали 50 % раствором этанола в воде.

В качестве раствора сравнения использовали контрольный раствор, не содержащий препарата.

С помощью калибровочонго графика стандартного раствора БСА (400 мкг/мл) определяли содержание белка в каждой модельной пробе н), мкг.

 

Определяли открываемость R (%) содержания белка по формуле:

R= (Mн×100)/Mв,

где и – истинное (взятое) и экспериментально найденное значения содержания белка в модельной пробе.

Результаты.

Полученные результаты представлены в таблице 2.

Зависимость между взятым Мв и найденным Mн количеством белка в модельных пробах в диапазоне нормируемого количества белка в препарате 0,020-0,100 мг/мл., определенная методом наименьших квадратов, представлена на рис. 2 и выражается следующим линейным регрессионным уравнением:

Мн = 0,9913*Мв + 0,46

r =0,9994; S = 32,7724; n = 9,

 

где r - коэффициент корреляции, S – стандартное отклонение.

 

Низкое значение свободного члена уравнения 0.46 мкг по сравнению с навеской СО Лактоферрин подтверждает высокую точность методики, а высокий коэффициент корреляции r = 0,9994 – хорошую линейность.

 


Протокол № 5 (продолжение)

Таблица.

Результаты определения открываемости содержания белка в модельных пробах СО Лактоферрин,

Количество СО в 1 мл модельной пробы, мг Содержание белка в модельной смеси Оптическая плотность D Открываемость R= (Mн·100)/Mв, %
Взято Mв, мкг Найдено Mн, мкг (по калибровочой прямой)
0,104 101,0 99,9 0,186 98,91
0,107 104,0 102,0 0,192 98,1
0,103 99,0 100,9 0,180 101,870
0,057 55,0 55,7 0,115 101,30
0,053 51,0 50,5 0,110 99,04
0,058 56,0 55,9 0,118 99,88
0,025 24,0 24,4 0,067 101,65
0,027 26,0 26,6 0,070 102,12
0,029 28,0 27,5 0,074 98,24
Средний результат 100,123
Стандартное отклонение 1,624
Критерий Стьюдента 2,31
Средневзвешенная дисперсия 2,637
Относительное стандартное отклонение RSD 1,624

 

Рис. 2. Зависимость между взятым и найденным количеством белка в модельных пробах

СО Лактоферрин.

Отклонения/ примечания: нет

Заключение: подтвержден показатель точности (правильность) методики определения содержания белка (количественное определение). Открываемость с доверительной вероятностью 95 % составляет 98,1 ¸ 102,1 % то есть практически не выходит за пределы критерия приемлемости 98,0 - 102,0% (точка 8, для которой найденное значение открываемости составило 102,1 % находится на нижнем пределе диапазона чувствительности данной методики, поэтому полученное отклонение 102,1 % можно считать несущественным).

Выполнил _________ ____________ ________ ___________________

(дата) (должность) (подпись) (расшифровка подписи)

Проверил _________ ____________ ________ ___________________

(дата) (должность) (подпись) (расшифровка подписи)

ПРОТОКОЛ № 6

ОЦЕНКА МЕТОДИКИ НА ВНУТРИЛАБОРАТОРНУЮ ПОВТОРЯЕМОСТЬ (СХОДИМОСТЬ)

Повторяемость (один из показателей точности методики) – степень близости друг к другу независимых результатов, полученных в условиях повторяемости, а именно:

- одним и тем же методом

- на идентичных объектах испытаний (идентичных частях пробы)

- в одной и той же лаборатории, одним и тем же оператором

- с использованием одного и того же оборудования и средств измерений

- в короткий промежуток времени (в который не проводится перекалибровка оборудования) и сохраняются параметры окружающей среды.

Мерой рассеяния результатов в условиях повторяемости является относительное стандартное отклонение повторяемости (Sr).

 

Объект. Методика определения белка (количественное содержание) по методу Лоури в препарате Лапрот.

Описание теста. Определяется внутрилабораторная повторяемость (сходимость) результатов содержания белка в одной серии препарата Лапрот, выполненных одним аналитиком на одном спектрофототометре в течение одного дня.

 

Критерий приемлемости: Относительное стандартное отклонение повторяемости Sr ≤ 2,0 %

 



Поделиться:




Поиск по сайту

©2015-2024 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2017-12-12 Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных


Поиск по сайту: