РЕАКЦИЯ НЕЙТРАЛИЗАЦИИ ВИРУСОВ




Реакция нейтрализации основана на способности специфических вируснейтрализующих антител блокировать инфекционные, гемагглютинирующие, гемадсорбирующие, цитопатические, бляшкообразующие и др. свойства вирусов. Она применяется в двух направлениях:

1) для идентификации вирусов;

2)для серодиагностики вирусных инфекций, т.е. для определения нарастания титра вируснейтрализующих антител в «парных» сыворотках.

Компоненты:

1.Исследуемый вирус (при идентификации выделенного вируса) или исследуемая сыворотка (при серодиагностике инфекции).

2.Диагностическая (группо-, видо-, типоспецифическая) сыворотка (при идентификации вируса) или известный вирус – диагностикум (при серодиагностике).

3.Индикаторный объект: животные, куриные эмбрионы, культуры тканей или эритроциты.

Реакции нейтрализации in vivo ставят в культурах клеток (см. прилож. 3, рис.15), куриных эмбрионах и на лабораторных животных.

Принцип. Смесью вирус (исследуемый или известный) + сыворотка (диагностическая или исследуемая), выдержанной в течение определенного времени, заражают культуру клеток, куриный эмбрион или лабораторное животное. При (+) реакции, т.е. при нейтрализации вируса антителами индикаторные объекты продолжают нормально существовать, а в контроле – гибель или характерные изменения.

Реакция нейтрализации in vitroреакция торможения гемагглютинации (РТГА).

РТГА применяется:

- для серотипирования вирусов;

- для серодиагностики инфекций.

Выделяют два способа постановки:

- капельный способ на стекле (ориентировочная реакция), применяется для серотипирования вирусов;

- развернутый в пробирках.

Механизм. У некоторых вирусов (например, гриппа) есть гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов различных животных в зависимости от вида вируса: При наличии в сыворотке антител – антигемагглютининов наблюдается ингибированные активности вирусов (см. прилож. 3, рис.16).

РТГА. Цель: серотипирование вируса гриппа А.

Компоненты.

1.Исследуемый материал – аллантоисная жидкость куриного эмбриона.

2.Диагностические противогриппозные типоспецифические сыворотки.

3.5% взвесь куриных эритроцитов.

4.Физиологический раствор.

Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной – выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).

 

ОПСОНО – ФАГОЦИТАРНАЯ РЕАКЦИЯ

Применяется для определения опсонинов – антител, стимулирующих фогоцитарную активность лейкоцитов, т.е. серодиагностики инфекций, например, бруцеллёза.

Усиление фагоцитоза происходит за счёт присоединения опсонинов с активными центрами (Fав – фрагмент) к детерминантам бактерий, а затем с помощью Fc – фрагментов к Fc – рецепторам фагоцитов. В нормальной сыворотке содержится небольшое количество опсонинов, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. В иммунной сыворотке опсонинов больше и их активность в меньшей степени зависит от комплемента.

Компоненты опыт Контрль
1. Исследуемая сыворотка 2. Нормальная сыворотка 3. Суточная микробная культура (напр., стафилококковая) 4. Фагоциты – взвесь нейтрофилов +   - + + -   + + +

 

Инкубация при 370С в течение 30 минут. Из каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Романовскому – Гимзе и считают под микроскопом количество микробов в 100 и более нейтрофилах, т.е. определяют фагоцитарный показатель.

Фагоцитарный показатель – количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом.

Опсонический индекс – фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.

Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.

Опсоно-фагоцитарный индекс – это цифровой показатель = количество фагоцитов х оценка фагоцитоза (в зависимости от количества поглащенных микробов). Максимальный показатель – 75.

 

ИММУННЫЙ СТАТУС

Иммунный статус определяется совокупностью показателей специфических и неспецифических факторов защиты и характеризует индивидуальную иммунореактивность организма. Оценка иммунного статуса имеет значение:

-для выявления иммунологической недостаточности (иммунодефицита) и других патологических нарушений работы иммунной системы;

-наблюдения за эффективностью иммунодепрессивной или иммуностимулирующей терапии;

-определения показаний и выбора терапевтических препаратов.

Исследование иммунного статуса включает проведение тестов 1-го и 2-го уровней.

Тесты 1-го уровня (ориентирующие):

1.определение факторов естественной резистентности (БАС, лизоцим, комплемент и др.);

2.подсчет абсолютного и относительного числа лимфоцитов в периферической крови;

3.подсчет числа Т- и В- лимфоцитов;

4.оценка фагоцитарной активности лейкоцитов;

5.определение концентрации разных классов иммуноглобулинов.

Тесты 2-го уровня (аналитические):

1.определение субпопуляции Т- лимфоцитов;

2.определение функциональной активности Т- и В- лимфоцитов;

3.определение медиаторов иммунной системы;

4.Тесты на ГЧЗТ.

 



Поделиться:




Поиск по сайту

©2015-2024 poisk-ru.ru
Все права принадлежать их авторам. Данный сайт не претендует на авторства, а предоставляет бесплатное использование.
Дата создания страницы: 2017-06-11 Нарушение авторских прав и Нарушение персональных данных


Поиск по сайту: