ЗАНЯТИЕ 12
Тема: Иммунопрофилактика, иммунотерапия инфекционных заболеваний.
Этиотропная химиотерапия инфекционных заболеваний.
Контрольные вопросы:
1. Антимикробные химиопрепараты: понятие, классификация по способу получения, химической структуре, механизму и спектру действия.
2. Механизмы действия антимикробных химиопрепаратов.
3. Антибиотикорезистентность микроорганизмов, ее механизмы.
4. Пути преодоления лекарственной устойчивости бактерий.
5. Методы определения чувствительности бактерий к антимикробным химиопрепаратам.
6. Принципы эмпирической и рациональной терапии инфекционных заболеваний.
7. Вакцины. Понятие, современная классификация вакцин: живые, убитые, субклеточные, субвирионные, рекомбинантные, дивергентные, трансгенные. Достоинства и недостатки различных типов вакцин.
8. Тактика применения вакцин. Адъюванты. Аутовакцины.
9. Гомологичные и гетерологичные сыворотки и иммуноглобулины. Способы получения, применения.
10. Побочные эффекты при серотерапии и их профилактика. Работы А. М. Безредко.
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):
1. Подобрать препараты для:
- активной специфической профилактики инфекционных заболеваний;
- пассивной специфической профилактики и терапии инфекционных заболеваний;
- вакцинотерапии хронических инфекционных заболеваний;
- создания антитоксического, антибактериального, противовирусного иммунитета.
Указать, что они содержат, для чего и как применяются.
2. Подобрать вакцины: живые, убитые, химические, анатоксины, рекомбинантные. Указать, что они содержат, для чего и как применяются.
3. Подобрать вакцины, включенные в календарь профилактических прививок: живые, бактериальные; живые, вирусные; анатоксины; рекомбинантные. Указать, что они содержат, для чего и как применяются.
4. Учесть и оценить результаты определения антибиотикограмм исследуемых культур:
- методом радиальной диффузии;
- методом серийных разведений.
5. Учесть и оценить результаты определения метициллинрезистентности культур S.aureus, выделенных от больных с разными сроками госпитализации.
Методические указания к выполнению исследовательского задания:
1-3. Подберите препараты для иммунопрофилактики и иммунотерапии инфекционных заболеваний.
Ознакомьтесь с набором иммунобиологических препаратов, включая препараты, представленные на стенде, и подберите препараты в соответствии с конкретным заданием. В случае необходимости используйте календарь профилактических прививок РФ.
Результат оформите в виде таблицы, указав название препаратов, что они содержат, для чего и как применяются.
4 Учтите и оцените результаты определения антибиотикограмм методами радиальной диффузии и серийных разведений:
Метод радиальной диффузии – см. информацию в методических указаниях и протоколах практических занятий по теме «Бактериологический метод исследования. 3, 4 этапы».
Метод серийных разведений основан на использовании двойных разведений антибиотиков от максимальной концентрации к минимальной, которые вносят в соответствующую жидкую или плотную питательную среду. Контролем служит пробирка (чашка), содержащая только питательную среду. В каждую пробирку или на поверхность агара вносят бактериальную суспензию определенной плотности. После инкубации при 37° С в течение 16-18 ч проводят визуальный учет полученных результатов.
Критериями активности препарата являются минимальная подавляющая концентрация (МПК) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК). МПК – это наименьшая концентрация антибиотиков, которая in vitro полностью подавляет видимый рост бактерий. Она выражается в мг/л или мкг/мл. МБК – это наименьшая концентрация антибиотика, которая вызывает бактерицидный эффект. Для ее определения необходимо провести высев из пробирок (визуально отсутствует рост) на плотный питательный агар, не содержащий антибиотик. Этот показатель имеет большое клиническое значение, особенно в случаях эндокардита. На основе метода серийных разведений созданы микрометоды, предусматривающие использование меньшего объема питательной среды. В настоящее время для проведения такого рода исследований выпускаются многочисленные коммерческие наборы, состоящие из высушенных стабилизированных разведений антибиотиков, которые разбавляются суспензией тест-микроба. Данные наборы могут храниться в обычных условиях, вследствие чего исключается необходимость в приготовлении разведений среды и антибиотиков в лабораторных условиях. Достоинством тестов микроразведений является также то, что они включаются в автоматизированную систему.
На основании полученных данных (диаметра зоны задержки роста или величины МПК) микроорганизмы подразделяют на чувствительные, умеренно-резистентные или резистентные. Для разграничения этих категорий используют так называемые пограничные концентрации антибиотиков, которые не являются неизменными величинами. Они пересматриваются по мере изменения чувствительности популяции микроорганизмов. Разработкой и пересмотром критериев интерпретации занимаются ведущие специалисты (химиотерапевты, микробиологи), входящие в специальные комитеты. Одним из них является национальный комитет по клиническим лабораторным стандартам (N ational C ommitte for C linical L aboratory S tandars – NCCLS), организованный в США. В настоящее время стандарты NCCLS признаются в мире и используются как международные для оценки результатов определения чувствительности бактерий при многоцентровых микробиологических и клинических исследованиях.
Полученные результаты определения антибиотикограмм диско-диффузионным методом и методом серийных разведений на жидкой среде внесите в протокол и оцените полученные результаты.
5. Учтите и оцените результаты определения метициллинрезистентности культур S.aureus, выделенных от больных с разными сроками госпитализации.
Резистентность стафилококков к метициллину (оксациллину), обусловленная продукцией дополнительного пенициллинсвязывающего белка (ПСБ) – ПСБ-2а (фермента, участвующего в синтезе клеточной стенки) имеет большое клиническое значение. Это связано с тем, что при инфекциях, вызванных метициллинрезистентными (MR) штаммами стафилококков, терапия b-лактамами будет неэффективна. Кроме того, эти штаммы часто бывают резистентны к другим классам антибиотиков (аминогликозидам, макролидам, фторхинолонам, тетрациклинам); исключение составляют гликопептиды (ванкомицин, тейкопланин), линезолид. С момента появления в 70-х годах и до настоящего времени метициллинрезистентные штаммы стафилококков, прежде всего S. aureus ( MRSA ), а также S. epidermidis и других коагулазонегативных стафилококков ( MRSE ), являются одними из ведущих возбудителей внутрибольничных инфекций.
Метод скрининга предусматривает использование оксациллина, т.к. он обладает большей стабильностью при хранении по сравнению с метициллином. Оксациллин в концентрации 0,6 мг на 100 мл среды добавляется в агар Мюллера-Хинтона, содержащий 4% NaCI. Контролем служат чашки с агаром без антибиотика.
Из исследуемых культур микроорганизмов готовят взвесь в соответствии со стандартом мутности 0,5 по МакФарланду (1,5х108). Посев осуществляется стерильным ватным тампоном путем прикосновения к поверхности питательной среды. Параллельно проводится посев контрольных штаммов MRSA и MSSA.
Учет и интерпретация результатов. Рост культуры на среде с оксациллином означает устойчивость данного штамма к оксациллину (метициллину) – MRSAилиMRSE, отсутствие роста – чувствительность – MSSA и MSSЕ. На среде без оксациллина должен быть рост контрольных и исследуемых штаммов стафилококков.
Полученные результаты определения метициллинрезистентности стафилококков внесите в протокол и оцените полученные результаты.