Микроорганизмы, развиваясь на поверхности агаризованных сред, могут расти в виде колонии, штриха или сплошного газона.
Колония (клон) - изолированное скопление клеток одного вида, выросшее в большинстве случаев из одной клетки. В зависимости от того, где развивались клетки (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее или на дне сосуда), различают поверхностные, глубинные и донные колонии.
Колонии, выросшие на поверхности среды, отличаются большим разнообразием и являются наиболее существенной особенностью роста микроорганизмов на плотном субстрате. Поэтому описание характера колоний — один из признаков, который необходим для идентификации микроорганизма. При их описании учитывают следующие признаки:
Форму колонии — округлая, амебовидная, неправильная, ризоидная и т. д. (слайд 1);
Размер (диаметр) колонии измеряют в миллиметрах; если размеры колонии не превышают 1 мм, то их называют точечными;
Поверхность колонии — гладкая, шероховатая, бороздчатая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кругами или радиально исчерченная (слайд 2);
Профиль колонии — плоский, выпуклый, кратерообразный, конусовидный и т. д. (слайд 3);
Блеск и прозрачность — колония блестящая, матовая, тусклая, мучнистая, прозрачная;
Цвет колонии — бесцветная (грязно-белые колонии относят к бесцветным) или пигментированная — белая, желтая, золотистая, оранжевая, сиреневая, красная, черная. Особо отмечают выделение пигмента в субстрат. При описании колоний актиномицетов отмечают пигментацию воздушного и субстратного мицелия, а также выделение пигментов в среду;
Край колонии — ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т. д. (слайд 4);
Структуру колонии — однородная, мелко- или крупнозернистая, струйчатая и т. д. (слайд 5). Край и структуру колонии определяют под микроскопом при малом увеличении. Для этого чашку помещают на столик микроскопа крышкой вниз;
Консистенцию колонии определяют, прикасаясь к ее поверхности петлей. Колония может легко сниматься с агара, быть плотной, мягкой или врастающей в агар, слизистой (прилипает к петле), тягучей, пленчатой (снимается целиком), хрупкой (легко ломается при прикосновении петлей).
Глубинные колонии, напротив, довольно однообразны. Чаще всего они по виду похожи на более или менее сплющенные чечевички, в проекции имеющие форму овалов с заостренными концами. Лишь глубинные колонии немногих бактерий напоминают пучки ваты с нитевидными выростами в питательную среду. Образование глубинных колоний часто сопровождается разрывом плотной среды, если развивающиеся микроорганизмы выделяют углекислоту или другие газы.
Донные колонии самых разнообразных микроорганизмовимеют вид тонких прозрачных пленок, стелющихся по дну.
Рост по штриху. Отмечают следующие особенности: скудный, умеренный или обильный, сплошной с ровным или волнистым краем, четковидный (от «четки »), напоминающий цепочки изолированных колоний, диффузный, перистый, древовидный или ризоидный (слайд 6). Характеризуют оптические свойства налета, его цвет, поверхность и консистенцию.
Характеристика субстратного мицелия. Субстратный мицелий(нитевидные отростки клетки) у актиномицетов — продуцентов антибиотиков - как правило, развивается в глубине питательной среды. Бактериологической петлей прикоснитесь к поверхности культуры и убедитесь, что она плотно врастает в агар и не снимается петлей с поверхности агара. Обратите внимание на цвет субстратного мицелия (бесцветный, белый, темно-песочный, буровато-желтый и т.д.).
Микроскопия продуцента. Приготовьте препараты «раздавленная капля» и «отпечаток», рассмотрите под микроскопом.
Препарат «раздавленная капля»
На предметное стекло нанести 1 каплю метиленого синего (1:40). В каплю поместить небольшое количество продуцента из пробирки, воспользовавшись шприцом или микробиологической петлей. Размешать и покрыть покровным стеклом, слегка притирая его к поверхности предметного стекла и вытесняя воздух. Избыток жидкости убрать фильтровальной бумагой. Рассмотреть под микроскопом и зарисовать клетки продуцента.
Приготовление препарата «отпечаток»
Из плотной среды, на которой микроорганизмы растут сплошным газоном или в виде отдельных колоний, вырезают скальпелем небольшой кубик и переносят его на предметное стекло так, чтобы поверхность с микроорганизмами была обращена вверх. Затем к газону или колонии прикладывают чистое покровное стекло, слегка надавливают на него петлей или пинцетом и тотчас же снимают, стараясь не сдвинуть в сторону. Полученный препарат помещают отпечатком вниз в каплю метиленового синего (1:40) на предметное стекло. Рассматривают под микроскопом.
Отработанные препараты погружают в дезинфицирующий раствор.
Оформление результатов
Описание поверхностной культуры на плотной (агаризованной) среде необходимо для оформления паспорта культуры, проводится по следующей схеме:
А. Название продуцента;
Б. Состав среды;
В. Возраст культуры(подсказка: 7 суток), температура выращивания;
Г. Характеристика колоний или роста по штриху
Д. Характеристика мицелия.
Е. Результаты изучения культуры под микроскопом