ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ
Овладеть основными методами и практическими навыками приготовления гистологических препаратов, их изучения под световым микроскопом, объективной количественной оценки микроструктур в связи с широким использованием в клинической практике врачей, патологоанатомов, судебных медиков и экспериментальных исследованиях.
ИНФОРМАЦИОННЫЙ БЛОК
Ключевые слова и понятия: гистологический микропрепарат, гематоксилин-эозиновая окраска, базофилия, эозинофилия, световой микроскоп, электронный микроскоп.
Для изучения гистологических препаратов необходимо взять и зафиксировать материал (биоптат), приготовить срезы, окрасить парафиновые срезы гематоксилин-эозином:
I. Депарафинирование:
1) удаление парафина из срезов в трех порциях ксилола по 3-5 мин. в каждом;
2) удаление из срезов ксилола с помощью 100 гр. спирта – 2-3мин.;
3) удаление из срезов спирта с помощью дист. воды – 1-2мин.
II. Окрашивание срезов:
1) помещение среза в водный раствор гематоксилина – 2-3мин.;
2) затем в водопроводную воду – 5-10мин.;
3) в дистиллированную воду – 2-5 мин.;
4) в водный раствор эозина – 1мин.;
5) в дистиллированную воду – 1мин.
III. Обезвоживание срезов и заключение в бальзам:
1) обезвоживание срезов в 70 гр., затем в 96 гр. спиртах по 1-2мин.;
2) просветление срезов в ксилоле – 2мин.;
3) заключение срезов в бальзам.
Окрашенные микропрепараты можно исследовать под световым микроскопом. Существует множество методик окрашивания препаратов на гликоген, нервные элементы, жир, ДНК и т. д. Для обзорных исследований используется окраска гематоксилин-эозином, при которой оксифильные структуры окрашиваются в розовый цвет кислым красителем, а базофильные структуры в синий цвет основным красителем. Под световым микроскопом на срезе можно отличить «базофильные» и «оксифильные» структуры, идентифицировать ядра различной формы и размеров в разных типах клеток.
Световой микроскоп состоит из трех основных частей: механической, оптической и осветительной. В механическую часть микроскопа входят штатив, предметный столик, тубус, револьвер, макро- и микрометрические винты (позволяют поднимать и опускать тубус) К осветительной части микроскопа относятся зеркало, служащее для направления светового пучка на объект. Оптическая часть микроскопа состоит из окуляров и объективов. На окуляре и объективе имеются цифры, показывающие увеличение. Чтобы узнать увеличение объекта, необходимо перемножить цифры на окуляре и объективе.
Правила работы с микроскопом на малом увеличении:
1. Поставьте микроскоп слева, штативом к себе и предметным столиком от себя.
2. Движением пластинки револьвера подведите до фиксации под тубус объектив малого увеличения ("8х").
3. Вращением макрометрического винта поставьте объектив ("8х") на расстоянии 1 см от предметного столика микроскопа.
4. Установите вогнутое зеркало. Смотрите в окуляр левым глазом, правый не закрывайте. Большим и указательным пальцем (не закрывая поверхность зеркала) поворачивайте зеркало к источнику света до максимального освещения поля зрения.
5. Положите препарат покровным стеклом вверх на предметный столик микроскопа так, чтобы объект совпадал с осью объектива.
6. Макрометрическим винтом опустите объектив малого увеличения на расстояние 0,5 см от препарата. Смотрите сбоку!
7. Смотрите в окуляр. Движением макрометрического винта к себе плавно поднимите тубус до появления четкого изображения препарата.
Правила работы, с микроскопом на большом увеличении:
1. Только после нахождения объекта на малом увеличении и постановки интересующей детали в центр поля зрения можно изучать препарат на большом увеличении. Двигать препарат после установки на малом увеличении нельзя!
2. Вращением пластинки револьвера смените объектив "8х" на объектив "40х".
3. Очень медленно, глядя в окуляр, поднимите тубус макрометрическим винтом до появления изображения объекта.
4. Четкость изображения получите с помощью микрометрического винта, вращая его вперед или назад на пол-оборота.
5. Изучите препарат и зарисуйте.
6. После окончания работы снимите препарат с предметного столика. Замените объектив "40х" на "8х".
КОНТРОЛЬНЫЕ ВОПРОСЫПО ТЕМЕ ЗАНЯТИЯ
1. Цель окрашивания гистологического препарата.
2. Группы красителей, используемых в гистологической практике.
3. Какие структуры при окрашивании называются «оксифильными» и «базофильными».
4. Методы изучения клетки.
5. Увеличительные приборы: лупа, световой микроскоп, электронный микроскоп.
6. Устройство светового микроскопа, принцип работы.
7. Правила работы с микроскопом на малом увеличении.
8. Правила работы с микроскопом на большом увеличении.
СИТУАЦИОННЫЕ ЗАДАЧИ
1) Врач должен срочно получить ответ о состоянии органа. Каким методом можно быстро приготовить гистологический срез?
2) Необходимо выявить наличие жира в клетках. Какой фиксатор Вы рекомендуете использовать?
3) Вами получен материал, фиксированный спиртовым фиксатором. Какие этапы обработки можно исключить?
ЛИТЕРАТУРА
Основная литература:
1) Гистология. [Текст] / под ред. Э.Г.Улумбекова, Ю.А.Челышева - Учебник для студентов мед. вузов. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 408 с, УМО.
2) Учебное пособие [Ил.] / под ред. С.И. Юшканцевой, В.Л Быкова - Гистология, цитология и эмбриология – краткий атлас для студентов мед. вузов. – СПБ: «П-2», 2006. - 96 с, УМО.
СТРУКТУРНЫЕ КОМПОНЕНТЫКЛЕТКИ.