Технологическая карта проведения практического занятия

Методические указания для студентов к практическому занятию № 24

Тема: Грамположительные кокки (стафилококки и стрептококки).

Актуальность темы.

1. Стафилококки. Семейство Micrococcaceae, род Staphylococcus. Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки диаметром 0,5-1 мкм. В мазке располагаются обычно несимметричными гроздьями («гроздья винограда»), но встречаются одиночные клетки, пары клеток. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некоторых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовывать L-формы. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А.

Стафилококки хорошо растут на простых средах (рН 7,0-7,5); факультативные анаэробы. На плотных средах образуют гладкие круглые выпуклые колонии с различным пигментом. Пигмент не имеет токсономического значения. Продуцируют сахаролитические и протеолитические ферменты. Стафилококки вырабатывают гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, β-лактамазу и др.

Стафилококки очень пластичны: быстро вырабатывают устойчивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдукцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерминируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, в т.ч. и за счет экстрацеллюлярной продукции β-лактамазы – фермента, разрушающего пенициллин, разрывающего его β-лактамное кольцо.

Антигенная структура – сложная и вариабельная. Известно около 30 антигенов. Протеин А обладает свойством прочно связываться с Fc-фрагментом любой молекулы IgG. При этом Fab-фрагмент молекулы иммуноглобулина остается свободным и может соединяться со специфическим антигеном. В связи с этим свойством протеин А нашел применение в диагностических методах (коагглютинация).

При микробиологической диагностике отнесение культуры к роду стафилококков основывается на типичной морфологии и окраске клеток, их взаимном расположении и анаэробной ферментации глюкозы. Для видовой идентификации используют в основном 3-4 теста: продукцию плазмокоагулазы, лецитовителлазы, анаэробную ферментацию маннита и глюкозы. В сомнительных случаях проводят тесты на наличие ДНК-азы, α-токсина.

Возбудителем стафилококковых инфекций чаще бывает S. aureus, несколько реже - S. epidermidis, очень редко - S. saprophyticus. Стафилококки являются представителями нормальной микрофлоры человеческого тела, поэтому микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций не может ограничиваться выделением и идентификацией возбудителей; необходимы количественные методы исследования, т.е. определение микроорганизмов в пробе.

Лечение стафилококковых инфекций обычно проводят антибиотиками и сульфаниламидными препаратами. При резистентности стафилококков к большинству химиотерапевтическим препаратам используют антитоксическую противостафилококковую плазму или иммуноглобулин, полученные из крови доноров, иммунизированных стафилококковым анатоксином. Для активной иммунизации может быть использован адсорбированный стафилококковый анатоксин.

2. Стрептококки. Семейство Streptococcaceae, род Streptococcus. В род Streptococcus входят более 20 видов, среди которых есть представители нормальной микрофлоры человеческого тела и возбудители тяжелых инфекционных эпидемических заболеваний человека.

Стрептококки – мелкие (меньше 1 мкм) шаровидные клетки, располагающиеся цепочками или попарно, грамположительны, спор не образуют, неподвижны. Большинство штаммов стрептококков образуют капсулу, состоящую из гиалуроновой кислоты. Клеточная стенка содержит белки, углеводы и пептидогликаны. Легко переходят в L-формы.

Растут на средах, обогащенных углеродами, кровью, сывороткой, асцитической жидкостью. На плотных средах обычно формируют мелкие серые колонии. На жидких средах для стрептококков характерен придонный рост. Стрептококки – факультативные анаэробы. На кровяном агаре вызывают α-гемолиз (зеленящий) и β-гемолиз (полный). Погибают при пастеризации при 56⁰С в течение 30 мин.

Генетический обмен возможет за счет трансформации и трансдукции, но не конъюгации. Устойчивость к антибиотикам вырабатывается медленно.

На основе полисахаридного антигена стрептококки делятся на серогруппы. Стрептококки группы А вырабатывают более 20 внеклеточных веществ, обладающих антигенной активностью. Наибольшее значение в патогенезе стрептококковых инфекций имеют: стрептокиназа (фибринолизин), ДНК-аза, гиалуронидаза, эритрогенин.

Стандартный разведенный эритрогенин используют при постановке внутрикожной пробы (проба Дика) для выявления чувствительности к этому токсину (восприимчивость к скарлатине).

3. Пневмококки – Streptococcus pneumoniae – грамположительные диплококки, обычно ланцетовидные или располагающиеся в виде цепочек, имеющие полисахаридную капсулу, которая позволяет легко «типировать» их специфическими антисыворотками. Пневмококки неподвижны, спор не образуют; факультативные анаэробы. При культивировании на искусственных питательных средах теряют капсулу, переходят из S- в R-форму. Хорошо растут на кровяных и сывороточных средах.

Иммунитет к пневмококковой инфекции является типоспецифическим. Пневмококки чувствительны ко многим антибактериальным препаратам, включая пенициллины.

Конкретные цели:

· Трактовать методики приготовления бактериологического препарата и окрашивание его по Граму;

· Трактовать результаты микроскопического исследования микроорганизмов;

· Делать выводы по микроскопии демонстрационных бактериологических препаратов;

· Делать посев исследуемого материала на питательные среды;

· Трактовать результаты бактериологического исследования микроорганизмов.

Уметь:

· Охарактеризовать колонии, образованные стафилококком или стрептококком на МПА в чашке Петри;

· Приготовить мазок, окрасить по Граму, промикроскопировать, зарисовать;

· Идентифицировать выделенную культуру по морфологическим, культуральным, биохимическим свойствам, пигментообразованию.

Теоретические вопросы:

1. Морфологические, культуральные, биохимические свойства стафилококков и стрептококков.

2. Принципы классификации стафилококков (эпидермальные, золотистые) и стрептококков.

3. Заболевания, вызванные этими микроорганизмами.

4. Распространение грамположительных кокков в природе. Потенциально-патогенные.

5. Носительство стафилококков.

6. Пути заражения, патогенез.

7. Схема микробиологической диагностики инфекционных заболеваний, вызванных грамположительными кокками.

Практические задания, используемые на занятии:

1. Приготовление микропрепаратов из чистых культур стафилококков, стрептококков.

2. Окраска микропрепаратов по Граму.

3. Микроскопия микропрепаратов из чистых культур бактерий, их анализ и зарисовывание в протокол.

4. Микроскопия демонстрационных препаратов, зарисовывание их в протокол.

5. Разбор и запись схем лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, вызванных грамположительными кокками.

6. Оформление протокола.

Литература:

1. Пяткін К.Д., Кривошеїн Ю.С. Мікробіологія з вірусологією та імунологією.– Київ: Вища школа, 1992.– 431с.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашкола Е.П., Рибакова А.М. Микробиология.– М.: Медицина, 1998.– 336с.

3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского.– М.: ГЄОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

4. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология /Под редакцией академика А.А. Воробьева,- М.: Медицинское информационное агентство, 2004.– 691с.

5. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену Крок-1. Загальна лікарська підготовка.– Київ: „Медицина”, 2004.- С. 300-333.

2. Методические указания для преподавателей к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии.– Харь-ков,1986.– 125с.

3. Сборник тестовых заданий для самоподготовки по медицинской микробиологии и вирусологии.– Харьков, 2005.– 28с.

Короткие методические указания к работе на практическом занятии:

В начале занятия проводиться проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа складывается из исследования материала, полученного от больного:

1. Приготовление мазков-препаратов, окраска их по Граму, микроскопия и оценка результатов бактериоскопического метода исследования.
2. Микроскопическая характеристика колоний, которые выросли на МПА в чашке Петри.
3. Изучение характера изменения среды (сахарный бульон) при росте в нем микроорганизмов – возбудители сепсиса (стафилококков) после посева крови больного. Сравнение с внешним видом незасеянной среды в колбе.
4. Изучение биохимических свойств стафилококка по пестрому ряду.
5. Разбор и запись схем лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, вызванных грамположительными кокками.

В конце занятия проводиться тестовый контроль и анализ итогов результатов самостоятельной работы.

Технологическая карта проведения практического занятия