Методические указания для студентов к практическому занятию № 35.
Тема занятия: Микробиологическая диагностика бордетеллиозов и клебсиеллезов.
Цель: Изучение методов микробиологической диагностики, терапии и профилактики коклюша и заболеваний, вызванных клебсиеллами.
Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.
Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.
Тема 5: Микробиологическая диагностика бордотеллиозов и клебсиеллезов.
Актуальность темы:
Возбудитель коклюша
Коклюш - инфекционная болезнь, вызываемая Bordetella pertussis, характеризующаяся приступами спазматического кашля. Наблюдается преимущественно у детей дошкольного возраста. Возбудитель коклюша был открыт в 1906 г. Ж. Борде и О. Жангу.
Таксономия. Возбудитель коклюша относится к отделу Gracilicutes, роду Bordetella.
Морфология и тинкториальные свойства. В. pertussis. мелкая овоидная грамотрицательная палочка с закругленными концами длиной 0,5-1,2 мкм. Спор и жгутиков не имеет, образует микрокапсулу.
Культивирование. В. pertussis - строгий аэроб, оптимальная температура для роста 370С, рН среды 7,2; очень требовательна к питательным средам, растет на средах Борде-Жангу (картофельно-глицериновом агаре с добавлением крови), на которой образуются колонии, похожие на капельки ртути, и казеиново-угольном агаре (КУА), образуя серовато-кремовые колонии.
Ферментативная активность. В. pertussis биохимически инертна.
Антигенная структура. Бордетеллы имеют О-антиген, состоящий из 14 компонентов (факторов). В. pertussis обладает обязательными факторами 1, 7, а также 2, 3, 4, 5, 6 в различных комбинациях. В зависимости от их сочетания различают серова-ры В. pertussis.
Факторы патогенности. В. pertussis - эндотоксин, вызывающий лихорадку, белковый токсин, обладающий антифагоцитарной активностью и стимулирующий лимфоцитоз, ферменты агрессии, повышающие сосудистую проницаемость, обладающие гистамин-сенсибилизирующим действием, вызывающие гибель эпителиальных клеток. В адгезии бактерий принимают участие гемагглютинин, пили и белки наружной мембраны.
Резистентность. Возбудитель коклюша очень неустойчив в окружающей среде.
Восприимчивость животных. При интраназальном введении культуры В. pertussis белым мышам развивается пневмония.
Эпидемиология. Коклюш - антропонозное заболевание; источником инфекции являются больные люди (особенно опасные в начальной стадии болезни) и носители. Передача инфекции осуществляется воздушно-капельным путем. Заболевание встречается повсеместно. Болеют чаще дети дошкольного возраста. Особенно восприимчивы к коклюшу грудные дети, для которых он наиболее опасен. Осенью и зимой наблюдается повышение заболеваемости.
Патогенез. Входными воротами инфекции являются верхние дыхательные пути, где развивается катаральное воспаление. В результате постоянного раздражения токсином рецепторов дыхательных путей появляется кашель, в дальнейшем в дыхательном центре образуется очаг возбуждения и приступы кашля могут быть вызваны и неспецифическими раздражителями. В возникновении приступов кашля имеет также значение сенсибилизация организма к токсинам В. pertussis.
Клиническая картина. Инкубационный период составляет 2-14 дней. Появляются недомогание, невысокая температура тела, небольшой кашель, насморк. Позднее начинаются приступы спазматического кашля, заканчивающиеся выделением мокроты. Таких приступов может быть от 5 до 50 в сутки. Заболевание продолжается до 2 мес. Различают легкую, среднетяжелую и тяжелую формы коклюша.
Иммунитет. После перенесенного заболевания вырабатывается стойкий иммунитет, который сохраняется на протяжении всей жизни.
Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования является слизь из верхних дыхательных путей. Основной метод диагностики бактериологический. Для ретроспективной диагностики применяют серологический метод (РА, РСК, РИГА).
Лечение. При тяжелых формах коклюша назначают антибиотики, нормальный гомологичный иммуноглобулин. Рекомендуются антигистаминные препараты, холодный свежий воздух.
Профилактика. Для специфической профилактики коклюша применяют адсорбированную коклюшно-дифтерийно-столбнячную вакцину (АКДС). Вводят ее детям начиная с 4 мес. Детям до 1 года и непривитым при контакте с больным вводят нормальный человеческий иммуноглобулин.
Возбудитель паракоклюша - Bordetella parapertussis - вызывает сходное с коклюшем заболевание воздухоносных путей у человека, но легче протекающее. По морфологическим признакам и условиям культивирования напоминает возбудитель коклюша.
Микробиологическое исследование при коклюше и паракоклюше
| Мокрота, слизь из носоглотки | Сыворотка крови |
| Бактериоскопическое исследование | Бактериологическое исследование | Серодиагностика |
| 1 этап | Люминесцентная микроскопия мазков, обработанных флюо-ресцирующей иммун-ной сывороткой | Посев материала методом «кашлевых пластинок» или но-соглоточными там-понами на КУА или среду Борде-Жангу | Реакция агглютинации РСК |
| Ответ | Ответ |
| Характер колоний | Мазок, окраска по Граму |
| 2 этап |    Пересев на пробирки или чашки с КУА либо со средой Борде-Жангу (чистая культура)
|
| 3 этап | Рост на питательном агаре (пигмент) | Реакция агглютинации |
| Проба на уреазу |
| Окончательный ответ |
Клебсиеллы
Бактерии получили название в честь Э. Клебса, который впервые описал микроб в 1875 г. Род Klebsiella относится к семейству Enterobacteriaceae, включает в себя 4 вида: K. pneumoniae, K. oxytoca, K. planticola, K. terrigena, которые отличаются по биохимическим свойствам.
Морфология и тинкториальные свойства. Клебсиеллы – не образующие спор неподвижные палочки, располагающиеся единично, парами или короткой цепочкой. Обычно они локализованы в капсуле, которая является характерным морфологическим признаком.
Культивирование. Клебсиеллы хорошо растут на простых питательных средах. На поверхности плотных питательных сред образуют куполообразные слизистые колонии. В жидких средах вызывают интенсивное помутнение.
Антигенная структура. Клебсиеллы имеют соматические О-антигены (более 10 серогрупп) и более 80 вариантов капсульных К-антигенов.
К факторам патогенности относятся: капсула полисахаридной природы, обладающая антифагоцитарной активностью; термостабильный и термолябильный энтеротоксины.
Экология и распространение. K. pneumoniae входит в состав факультативной микрофлоры кишечника, верхних дыхательных путей, влагалища; также обнаруживается на коже и слизистых оболочках. Клебсиеллы устойчивы к факторам окружающей среды благодаря наличию капсулы и могут в течение длительного времени сохраняться в почве, воде, помещениях. Клебсиеллы погибают при температуре 650С через 60 мин, в растворах обычных дезинфицирующих веществ.
Патогенез и заболевание у человека. K. pneumoniae или палочка Фридлендера является возбудителем неспецифических инфекций дыхательных путей (бронхитов, пневмоний), органов мочевыводящей системы, пищевой токсикоинфекции. Этот микроб может также вызывать гнойные послеродовые осложнения, неонатальную инфекцию, которая проявляется в виде пневмоний у новорожденных, кишечной инфекции и токсико-септических состояний, заканчивающихся летальным исходом. Кроме того, клебсиеллы пневмонии могут вызывать менингит, сепсис, цистит и другие заболевания. Нередко штаммы клебсиелл являются возбудителями внутрибольничных инфекций.
K. ozaenae вызывает поражение слизистой оболочки носа и придаточных пазух, сопровождающееся выделением зловонного секрета.
K. oxytoca вызывает ВБИ в урологической клинике.
Клебсиеллы риносклеромы (K. rhinoscleromatis) – поражают слизистую оболочку носоглотки, гортани, трахеи, бронхов. В тканях образуются гранулемы с последующим рубцеванием. Болезнь протекает хронически. Возможны летальные исходы.
Иммунитет. Гуморальный иммунный ответ защитной активностью не обладает. В защите от инфекции главная роль принадлежит фагоцитозу, опсонизированному специфическими антителами клебсиелл.
Микробиологическая диагностика. Применяется бактериологический метод исследования, который предусматривает выделение чистой культуры возбудителя из мокроты, мочи, испражнений, крови, гноя, в зависимости от локализации процесса, путем посева исследуемого материала на лактозосодержащие дифференциальные питательные среды с последующим выделением чистой культуры возбудителя и его идентификации до вида и подвида. Идентификацию клебсиелл проводят по морфологическим, культуральным, биохимическим и серологическим признакам в РСК с сыворотками больных.
Профилактика и лечение. Средств специфической профилактики не существует. Профилактика осуществляется путем раннего выявления больных, изоляции их от здоровых людей. Для лечения используют клебсиеллезный бактериофаг и антибиотики широкого спектра действия, чему предшествует определение антибиотикограммы.
Конкретные цели:
· Выучить дифференциацию возбудителя коклюша и паракоклюша по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам.
· Выучить морфологию, культуральные, биохимические свойства клебсиелл.
· Выучить источники, пути передачи и некоторые клинические проявление бордотеллиозов и клебсиеллезов.
· Изучить методы микробиологической диагностики.
· Трактовать результаты микроскопического исследования.
· Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии.
Уметь:
· Забирать материал для исследования от больных
- методом кашлевых пластинок
- тампоном
· Выделить чистую культуру
· Трактовать результаты микроскопического исследования
Теоретические вопросы:
1. Возбудитель.
· Свойства. Резистентность.
· Патогенность для человека и животных. Факторы патогенности, токсины.
· Патогенез заболевания у людей, иммунитет.
· Микробиологическая диагностика.
· Специфическая профилактика и лечение
Практические задания, которые выполняются на занятии:
1. Микроскопия демонстрационных препаратов.
2. Изучение коллекции питательных сред.
3. Изучение биопрепаратов дл лабораторной диагностики и специфической профилактики коклюша.
4. Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.
5. Разбор схемы лабораторной диагностики коклюша и клебсиеллезной инфекции.
6. Оформление протокола.
Литература:
1. Коротяев А.И., Бабичев С.А., Медицинская микробиология, иммунология и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, Санкт-Петербург «Специальная литература», 1998. - 592с.
2. Тимаков В.Д., ЛевашевВ.С., Борисов Л.Б. Микробиология / Учебник.-2-е изд., перераб. и доп.- М.:Медицина, 1983,-512с.
3. Пяткин К.Д. Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией. - Киев: Вища школа, 1992. - 431с.
4. Медицинская микробиология / Под редакцией В.И. Покровского. -М.:ГЕОТАР-МЕД, 2001.-768с.
5. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, иммунологии и вирусологии. Под ред. М.П. Зыкова. М. «Медицина». – 1977. – 288 с.
6. Черкес Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельскан Н.А. Микробиология. /Под ред. Ф.К. Черкес. – М.: Медицина, 1986. – 512 с.
7. Конспект лекции.
Дополнительная литература:
1. Макияров К.А. Микробиология, вирусология и иммунология. Алма-Ата, «Казахстан», 1974. – 372 с.
2. Тiтов М.В. Iнфекцiйнi хвороби. - К., 1995. – 321с.
3. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни. - М.: Медицина, 1990. - 559 с.
4. БМЭ, Т. 1, 2, 7.
5. Павлович С.А. Медицинская микробиология в графах: Учеб. пособие для мед. ин-тов. – Мн.: Выш. шк., 1986. – 255 с.