МИНИСТЕРСТВО
СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА Утверждаю
И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ Заместитель руководителя Департамента
РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ветеринарии Минсельхозпрода России
(Минсельхозпрод России) В.В.Селиверстов
ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ
Г. №13-7-2/2045
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
По лабораторной диагностике
Эймериозов животных
Общие положения
Эймериозы (кокцидиозы) - протозойные болезни животных,
Вызываемые простейшими рода Eimeria отряда Coccidiida, встречаются
Повсеместно, чаще в весенне-летний периоды, в теплых помещениях
Возможны зимой и протекают остро, подостро, хронически.
Сельскохозяйственные животные, пушные звери, кролики чаще болеют в
Возрасте - 15-120дн, птицы - с 10-дневного возраста и старше.
Диагноз на эймериозы устанавливают с учетом эпизоотологических,
Клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных
Исследований (микроскопического, копрологического).
1.3. В лабораторию для исследования на эймериозы направляют:
От 20-30 подозреваемых в заболевании животных из прямой кишки
пробы фекалий до 5 г;
От павших или вынужденно убитых - отрезки пораженных тонких и
толстых кишок, перевязанные с обоих концов;
От пушных зверей, кроликов и птиц — групповые пробы фекалий или
Трупы целиком.
Отобранный патологический материал и пробы фекалий упаковывают во
Влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в день отбора, а трупы
- не позднее 4-6 ч. после гибели.
1.4. Лабораторные исследования на эймериозы включают:
Микроскопию препаратов из соскобов пораженных участков органов и
кишечника;
копроскопию мазков из фекалий;
Определение видов и интенсивности инвазии.
Микроскопическое исследование
Трупы животных вскрывают и делают соскобы с пораженных
Мест слизистых оболочек тонких, толстых кишок, дополнительно у
Кроликов - из печени, птиц - со слизистой слепых отростков и гусей - из
Почек. Соскобы исследуют сразу.
Из каждого соскоба готовят по одному препарату. Небольшую
Часть соскоба наносят на предметное стекло, добавляют 2-3 капли
Жидкости, состоящей из равных частей глицерина и воды, тщательно
Размельчают иглой, накрывают покровным стеклом и исследуют в
Раздавленной капле в затемненном поле зрения микроскопа при
Увеличении в 140 - 280 раз.
При микроскопии учитывают, что меронты (шизонты) - тельца
Овальной или круглой формы, внутри которых сформировано множество
Мерозоитов; мерозоиты - клетки продолговатой формы с ядром; незрелые
Ооцисты - клетки с зернистой цитоплазмой шарообразной формы.
Копрологическое исследование
Фекалии исследуют для определения видового состава и
Количества ооцист эймерий.
Определение видов. Берут 3 г фекалий, переносят в ступку,
Добавляют 20 см3 воды, тщательно размешивают, фильтруют через
Капроновое или металлическое сито с размером ячеек 0,5 - 1,0 мм2,
Перемешанный фильтрат переливают в пробирку и центрифугируют при
Об/мин в течение 2-3 мин. Затем надосадочную жидкость
Сливают, к осадку добавляют жидкость, состоящую из равных частей
Насыщенного раствора хлорида натрия (380-400 г хлорида натрия
Растворяют в 1 дм3 горячей воды) и глицерина, размешивают и вновь
Центрифугируют при 1500 об/мин - 2-3 мин. При отсутствии глицерина
Можно использовать один насыщенный раствор хлорида натрия.
Наибольшей флотационной способностью растворы обладают при
температуре 20-22 °С. Металлической петлей (диаметр 5-7 мм) снимают с
Поверхностной пленки 3 капли, переносят на предметное стекло,
Накрывают покровным и исследуют в затемненном поле зрения микроскопа
При увеличении в 140-280 раз.
При микроскопии обнаруживают незрелые и спорулированные
Ооцисты эймерий. Виды эймерий дифференцируют по локализации,
Спорулированным ооцистам, их размеру, форме, цвету, характеру
Оболочек, наличии микропиле и остаточных тел в ооцисте (приложение).
Определение интенсивности инвазии. Берут 3 г фекалий,
Переносят в ступку, добавляют 45 см3 воды, хорошо размешивают и фильтруют через
Металлическое или капроновое сито с размером ячеек 0,5 -
Мм2. Затем берут 10 см3 фильтрата, переливают в пробирку,
Центрифугируют при 2000-2500 об/мин в течение 2-3 мин и жидкость
Сливают полностью. К осадку добавляют 10 см3 насыщенного раствора
Хлорида натрия, размешивают, пипеткой набирают 0,15 см3 суспензии,
Переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и
Исследуют в затемненном поле зрения микроскопа при увеличении 140-280
Раз.
Подсчитывают количество ооцист эймерий в препарате. Подсчет
Ооцист проводят во всех 225 квадратах камеры Горяева и полученную
Сумму умножают на коэффициент 1111. Полученное количество показывает
число ооцист в 1 г фекалий.