Реакции иммунного лизиса

ЗАНЯТИЕ 1.3.5

СИСТЕМА АНТИГЕН-АНТИТЕЛО В ДИАГНОСТИКЕ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ (ПРОДОЛЖЕНИЕ)

Цель: изучить механизмы взаимодействия АГ-АТ, принципы и методы постановки РСК, РИФ, ИФА.

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

 

1. РСК. Механизм, компоненты, применение.
2. РИФ. Механизм, компоненты, применение.

1. ИФА, иммуноблоттинг. Механизм, компоненты, применение.

 

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

 

· интерпретировать результаты серологических исследований.

 

 

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:

методами постановки и оценки результатов серологических реакций

 

Работа № 1. Реакция связывания комплемента (РСК)

Цель: разобрать механизм, освоить различные методы постановки РСК в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций.

Самостоятельная работа. Учесть результат РСК, поставленной с целью идентификации возбудителя.

Направление:

Ингредиенты:

I. Опытная система:

1)

2)

3)

4)

Через 30 минут:

I.I Индикаторная система:

1)

2)

Механизм:

 

Постановка:

 

Ингредиенты	Опыт	КАТ	КАГ	КС	Индикаторная система - ГС
АГ
АТ
С
Физ. раствор
ЭР (АГ)
ГС (АТ)

 

 

 

Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Самостоятельная работа. Оценить результат РСК, с целью выявления комплементсвязывающих АТ в парных сыворотках больного.

Направление:

Ингредиенты:

I. Опытная система:

1)

2)

3)

4)

Через 30 минут:

II. Индикаторная система:

1)

2)

 

Механизм (см. схему выше):

 

Постановка:

I неделя

 

 

 

II неделя

 

 

1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 КС КД КГС

 

Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 2. Реакция иммунной флюоресценции (РИФ)

 

Цель: разобрать механизм, освоить различные методы постановки РИФ в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций.

Самостоятельная работа. Прямой метод постановки РИФ. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.

 

Направление:

Ингредиенты:

1)

 

2)

 

3)

Механизм:

 

 

Постановка:

 

 

Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Самостоятельная работа. Непрямой метод постановки РИФ. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.

Направление:

Ингредиенты:

 

1)

 

2)

 

3)

 

4)

Механизм:

 

 

Постановка:

 

 

Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 3. Иммуноферментный анализ (ИФА)

 

Цель: разобрать механизм, освоить различные методы постановки ИФА в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций.

Самостоятельная работа. Прямой метод постановки ИФА. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.

 

Направление:

Ингредиенты:

1)

2)

3)

4)

5)

Механизм:

 

Постановка:

 

 

 

«О» «КН» «КП»

Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Самостоятельная работа. Непрямой метод постановки ИФА. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.

 

Направление:

Ингредиенты:

1)

2)

3)

4)

5)

Механизм:

 

Постановка:

I неделя

 

 

II неделя

 

 

1/14 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 «КН» «КП»

Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________________________________________________

Самостоятельная работа во внеурочное время:

Решить задачи:

I. В клинику поступил пациент с предполагаемым диагнозом «Хроническая гонорея». Для подтверждения диагноза проведено серологическое исследование путем постановки РСК. Титр первой недели 1/128, второй – 1/128. Изучите механизм РСК, запишите ингредиенты. Сделайте вывод о предполагаемом диагнозе.

Ингредиенты для постановки РСК:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

4.___________________________________________________________________________

5.___________________________________________________________________________

6.___________________________________________________________________________

Результатом первой фазы РСК является_____________________________________________________________________

Результатом второй фазы РСК является_____________________________________________________________________

Феномен реакции _____________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

II. У пациента с подозрением на сибирскую язву взято на исследование отделяемое карбункула. Проведена прямая РИФ. При люминесцентной микроскопии наблюдается свечение. Изучите механизм прРИФ, запишите ингредиенты. Сделайте вывод о предполагаемом диагнозе.

Ингредиенты для постановки прямой РИФ:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

Иммунные сыворотки в РИФ обрабатываются______________________________________________________________

Феномен реакции_____________________________________________________________

Вывод_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

 

III. В анонимный кабинет обратился гражданин Я. С просьбой проверить его на инфицирование ВИЧ. Проведено серологическое исследование с применением ИФА. Обнаружены антигены вируса gp 120 и gp41.. Изучите механизм ИФА, запишите ингредиенты. Сделайте вывод о предполагаемом диагнозе.

Иммуноферментный анализ основан на:

______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Ингредиенты для постановки ИФА:

1.___________________________________________________________________________

2.___________________________________________________________________________

3.___________________________________________________________________________

4.___________________________________________________________________________

Феномен реакции_____________________________________________________________

Вывод:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Подпись преподавателя ________________________________________________________

Теоретическая справка

Реакции иммунного лизиса

 

Антитела могут вызывать лизис, т.е. растворение клеток, только при участии комплемента (С). Следовательно, все реакции с участием С называются реакциями иммунного лизиса. К ним относят: РСК, р. гемолиза, р. бактериолиза.

Для реакции необходимы:

1. Антиген - микробы, эритроциты и другие клетки.

2. Антитела (лизины) - иммунная сыворотка, реже сыворотка больного. Бактериологическая сыворотка содержит антитела, лизирующие бактерии, гемолитическая - гемолизины, способствующие лизису эритроцитов, лизис спирохет вызывают спирохетолизины, клеток - цитолизины и т. д. Титр гемолитической сыворотки - ее наибольшее разведение, при котором происходит полный гемолиз 3% взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента 1:10.

3. Комплемент - неспецифический белок, содержащийся в сыворотке

человека и теплокровных животных. Больше всего комплемента в сыворотке морских свинок.

Эту сыворотку (смесь от нескольких животных) обычно используют в качестве комплемента. Свежий (нативный) комплемент нестоек и легко разрушается при нагревании, встряхивании, хранении, поэтому пользоваться им можно не позже 1-2-го дня после получения. Консервированный комплемент (на 10 мл сыворотки 0,2 г борной кислоты и 0,3 г сульфата натрия) сохраняется при 4°С до 2 недель. Чаще применяют сухой комплемент. Перед употреблением его растворяют изотоническим раствором хлорида натрия до первоначального объема, указанного на этикетке.

4. Изотонический раствор хлорида натрия.

К работе № 1