1)Метод подсчета в счетной камере. Принцип метода: в строго определенном объеме камеры подсчитывают под микроскопом клеточные элементы, а затем производят пересчет полученного результата на 1 мкл крови. Кровь предварительно разводят с целью уменьшения числа клеток, подлежащих счету.
2)Суть пробирочного метода: в предварительно высушенную чистую коническую пробирку точно отмеривают пипеткой 4 мл разводящей жидкости (физиологический раствор) и осторожно выдувают в нее 0,02 мл капиллярной крови (кровь забирают пипеткой от гемометра Сали). Полученное разведение, которое составляет 1:202, можно практически принять равным 1:200. Взвесь тщательно перемешивают и затем заполняют камеру. У нас в стране обычно пользуются камерой с двумя сетками Горяева.
3)Фотометрический метод. Принцип метода основан на фотометрическомизмерении степени погашения света определенных длин волн взвесью эритроцитов. Процент задержанного света прямо пропорционален числу (концентрации) эритроцитов, В качестве разводящей жидкости можно пользоваться 3,5% раствором хлорида натрия. Этот раствор повышает оптическую плотность эритроцитов и создает благоприятные условия для длительного их хранения (до 2 суток). Приготавливают разведение крови 1:500, 1:700 (0,02-0,01 мл крови и соответственно 10,0 -7,0 мл 3,5% раствора хлорида натрия). Взвесь тщательно перемешивают. Измеряют экстинцию при красном фильтре и толщине слоя 0,5 см против разводящей жидкости. Снимают показания прибора и определяют количество эритроцитов по таблице, составленной из данных калибровочной кривой. Ошибка расчета может составлять 30-40%. Причина такой ошибки: различные размеры эритроцитов, степень концентрации гемоглобина, количество эритроцитов.
4) Электронно-автоматический метод. Это метод подсчета эритроцитов с помощью автоматического или полуавтоматического анализатора.
Дополнение к вопросу №8. Методы определения количества гемоглобина.
Первую каплю крови снимают стерильной ваткой, а вторую набирают (насасывают) в капилляр Саля с резиновой трубкой до метки. Это следует делать осторожно, чтобы не насосать» крови больше необходимого количества и не набрать пузырьков воздуха.
Как только уровень взятой крови достигнет метки, резиновую трубку зажимают пальцами, вытирают кончик капилляра ваткой, еще раз проверяют уровень крови и опускают капилляр в пробирку Сали, наполненную децинормальным раствором хлористоводородной кислоты до 10-го деления, но только так, чтобы кончик слегка погрузился в кислоту, и начинают осторожно выдувать кровь в пробирку. Последнюю каплю крови выдувают не в хлористоводородную кислоту, а на стенку выше уровня кислоты, последующим наклоном пробирки каплю крови смывают.
Красная жидкость быстро, на глазах, приобретает коричневую окраску различной интенсивности в зависимости от содержания гемоглобина. Капилляр Сали еще раз наполняют путем насасывания жидкости из пробирки, чем достигается полное смывание крови с его стенок, а затем, заметив время, ставят пробирку в штатив.
Гемоглобин определяют колориметрическим методом, т. е. путем сравнения цвета стандартного раствора гемоглобина с цветом образовавшегося в хлористоводородной кислоте хлорида гематина.
Прибор для определения гемоглобина - так называемый гемометр - представляет собой деревянный штатив с тремя гнездами; два боковых гнезда заняты пробирками со стандартными растворами, а в среднее гнездо вставляют градуированную пробирку с исследуемым раствором солянокислого гематина и сравнивают цвета. Если цвет в исследуемой пробирке сразу же окажется светлее, чем в стандартной, набирают еще раз такое же количество крови из пальца, а при подсчете полученный результат делят пополам. Если же исследуемая жидкость темнее стандартной, то через 10 мин приступают к колори-метрированию.
Для этого гемометр берут в левую руку и держат на уровне глаз, а правой в исследуемую жидкость пипеткой добавляют по каплям дистиллированую воду и размешивают стекляной палочкой. Воду прибавляют до тех пор, пока цвет содержимого исследуемой пробирки и боковых стандартов не станет одинаковым. Деления на градуированной пробирке обозначают содержание гемоглобина в исследуемой крови. Уровень жидкости в градуированной пробирке (одинаковой с цветом стандарта) укажет процентное содержание гемоглобина в определяемой крови.
При определении количества гемоглобина допускается ошибка в пределах 5%.