Микроскопия. Хорошо красится фуксином Циля, синью Леффлера, а также по методу Муромцева. При окраске обычными анилиновыми красителями окрашивается неравномерно. В мазках-препаратах из пораженной ткани и из исследуемой культуры располагается длинными нитевидными цепочками.
В свежих культурах, в мазках из некротических очагов имеет форму длинных, зернисто окрашенных, переплетающихся нитей, часто с колбовидными утолщениями, шаровидными вздутиями, окрашивающимися более интенсивно.
В мазках из старых культур и отпечатках из хронических очагов поражения, особенно инкапсулированных, фузобактерии имеют форму коротких палочек длиной 0,7-4 и шириной 0,3-0,5 мкм. Окрашиваются они зернисто, неравномерно, часто по концам более интенсивно. В таких препаратах встречаются также кокковидные формы.
Выделение чистой культуры. Поскольку из данного материала чистую культуру получить трудно (фузобактерии некроза всегда находятся в ассоциации с другими микробами), исследуют пораженные очаги внутренних органов. С этой целью некротизированную ткань растирают в ступке с небольшим количеством физраствора и полученной взвесью патологического материала заражают кролика. После гибели последнего труп вскрывают и из очагов поражения производят посевы на питательные среды для культивирования анаэробов и готовят бактериоскопические препараты.
Культуральные свойства. Фузобактерии — облигатные анаэробы. Выделение чистой культуры возбудителя из организма сопряжено с трудностями главным образом вследствие частой ассоциации его в кожных
поражениях с другими микробами, особенно стрептококками и стафилококками. Легче получить чистую культуру из внутренних органов пораженного животного — печени, селезенки, легких, Из некротической ткани кожи материал берут из участков, граничащих со здоровой тканью (прижизненные соскобы). Оптимальная температура роста 34-3 7°С.
Для культивирования бактерий некроза используют среду Китта - Тароцци, бульон Мартена, печеночный бульон Хоттингера, сывороточный и глюкозо-кровяной агары, полу жидкий агар, мозговую среду. Добавление к среде Китта — Тароцци 10-20% свежей бычьей сыворотки, 0,2-0,5% глюкозно или дрожжевого экстракта приводит к более интенсивному росту микроорганизма. В среде Китта — Тароцци через 24-48 ч, происходит помутнение среды, и на кусочках печени образуется хлопьевидный осадок; через 5-8 сут наступает просветление среды и выпадение крошковатого осадка, разбивающегося при встряхивании в равномерную муть. При посеве в сыворочный агар (столбиком) на 3-4-е сутки появляется рост по уколу, формируются небольшие чечевицеобразные колонии, от которых отходят волокнистые отростки,
На поверхности глюкозо-кровяного агара бактерия растет при создании вакуума до 1,3 кПа, на 2-3-е сутки появляются мелкие круглые или продолговатые росинчатые колонии. Иной да колонии окружены слабой зоной гемолиза. Поверхность колоний гладкая, матовая. В аэробных условиях культура продолжает расти, но колонии становятся непрозрачными, шероховатыми.
Микроорганизм хорошо растет на мозговой среде и при добавлении 0,05% сернокислого железа. Среда чернеет за счет образования сероводорода.
Биохимические свойства. Фузобактерии — хемоорганотрофы, одни обладают сахаролитической активностью, другие не ферментируют сахара, но зато ферментируют пептоны. Fusobacteriumm necrophorum ферментирует с образованием кислоты и газа арабинозу, глюкозу, галактозу, левулезу,
мальтозу, сахарозу, салицин. Слабо ферментирует лактозу. Желатин и свернутую сыворотку не разжижает, не свертывает яичный белок, слабо и непостоянно пептонизирует молоко, образует индол и сероводород. Аммиак не вырабатывает. Не восстанавливает нитраты в нитриты. Различная биохимическая активность фузобактерий может быть использована для их идентификации.
Биопроба. Для биопробы используют кроликов, которых заражают аппликацией патологического материала в подкожный отпрепарированный «кармашек» или инъецируют подкожно сбоку, и белых мышей. Кролики гибнут через 1-2 мес, мыши — через 8-14 сут. Обнаружить F. necrophorum можно и методом флуоресцирующих антител.
Возбудитель копытной гнили
Возбудитель — Bacteroides nodosus (или Fusiformisnodosus) относится к семейству Bacteroidaceae, роду Bacteroides, вызывают инфекционную болезнь у овец и коз, характеризующуюся мацерацией и воспалением кожи свода межкопытной щели прогрессирующим гнойно-гнилостным распадом копытном) рога и хромотой.
Впервые болезнь описал во Франции Гойэ (1810), а выделил возбудителя Беверидж (1941). Болезнь регистрируют во всей странах мира, где развито овцеводство, главным образом в зонам с повышенной влажностью, на низменных, сырых пастбищах.
Морфология. Возбудитель — крупная (6-8 мкм) прямая или слегка изогнутая, грамотрицательная, неподвижная, полиморфная палочка с утолщениями на одном или обоих концах. Спор и капсул не образует. По внешнему виду напоминает гантели.
Материал для исследования. Для исследования необходимо брать свежепораженные участки основы кожи копытец и слизь, покрывающую кожу межпальцевых щелей.
Бактериологическая диагностика.
Микроскопия, Препараты окрашивают простым методом либо по Граму.
Выделение чистой культуры.
Культуральные свойства. Bad. Nodosus - облигатный анаэроб. Весьма требователен к составу питательных сред. Оптимальная температура роста 37°С. Его удается культивировать в полужидкой среде Китта — Тароцци и жидкой питательной среде из экстракта головного мозга с добавлением 2-5% триптического перевара порошка копытного рога. На этих средах микробы растут в виде тяжей, на дне пробирка образуют осадок. На лактоальбуминовом агаре вырастают плоские блестящие шероховатые колонии. Бактерии содержат поверхностный термолабильный К-антиген, дающий хлопчатым легко разбивающийся агглютинат, и соматический термостабильный О-антиген, образующий мелкозернистую агглютинацию.
Биопроба. Заражают ягнят путем аппликации материала в межкопытную щель.
Серологическая диагностика. Используют РСК.
Комилементсвязывающие антитела у животных появляются с началом заболевания, достигают максимальных значений в разгар болезни и угасают с исчезновением клинических признаком. Идентифицировать возбудителя можно при помощи непрямого метода иммунофлюоресценции.