Сахаролитические свойства - способность микроорганизмов расщеплять углеводы (сахара)

Их изучают на средах Эндо, ЭМС, Плоскирева. Микроорганизмы, сбра­живая до кислоты находящийся в этих средах молочный сахар (лактозу), образуют окрашенные колонии — кислота изменяет цвет имеющегося в среде индикатора. Колонии микробов, не ферментирующих лактозу, бесцветны. Например, при культивировании кишечной палочки на среде Эндо, Левина, Плоскирева образуются окрашенные в цвет самой среды колонии: На Эндо - малиновые, на Плоскирева - красные, на Левина - фиолетовые. Это происходит вследствие того, что кишечная палочка выделяет фермент лактазу, расщепляющий лактозу в перечисленных средах. В процессе ферментации выделяется кислота, которая изменяет цвет индикатора, что и приводит к изменению цвета самой колонии.

Для изучения сахаролитических свойств часто используют пестрый ряд сред Гисса с разными углеводами: лактозой, глюкозой, маннитом, мальтозой, сахарозой и индикатором. На данных средах можно изучить способность бактерий расщеплять сахара и многоатомные спирты. Под действием образующейся при расщеплении углевода кислоты индикатор изменяет окра­ску среды. Поэтому эти среды названы «пестрый ряд». Если бактерии выделяют фермент, расщепляющий тот или иной углевод с образованием кислоты, то цвет среды после инкубации в термостате меняется. Если в процессе ферментации еще выделяется и газ, то в толще агара можно наблюдать и появление его пузырьков. Микробы, не ферментирующие данный углевод, растут на среде, не изменяя ее цвет.

Наличие газа устанавливают и по скопле­нию его в «поплавке» на жидких средах. «Поплавок» — узкая стеклянная трубочка с запаянным концом, обращен­ным вверх, которую до стерилизации помещают в пробир­ку со средой.

Молоко с лакмусом. Перед стерилизацией к обезжиренному молоку прибавляют 5-10% лакмусовой настойки и столько же 10% раствора бикарбоната натрия, чтобы пена молока приняла синевато-фиолетовый оттенок. При кислотообразовании молоко становится розовым (до красного), при щелочеобразовании – сине-фиолетовым (до синего). В среде может образоваться кислотный сгусток.

Протеолитические свойства - способность расщеп­лять белки, полипептиды. Изучают на средах с желатином, молоком, сывороткой, пептоном.

При росте на желатиновой среде микробов, ферментирующих жела­тин, среда разжижается. Характер разжижения, вызываемый разными микробами, различен (см. приложение).

Молоко. Свежее молоко доводят на огне до кипения и кипятят 5 минут. Оставляют в прохладном месте на сутки. Освобождают от верхнего жирного слоя. Вторично кипятят 5 минут, оставляют на сутки, опять снимают верхний слой. Фильтруют 2-3 раза через плотную ватную пробку, нейтрализуют 10% раствором карбоната натрия до рН 7,2, определяемого розоловой бумажкой или по потенциометру. Разливают и стерилизуют текучим паром 2 дня по 30 минут. Протеолиз казеина в молоке выражается растворением сгустка казеина, образованного бактериями, свертывающими молоко. Оно приобретает вид молочной сыво­ротки. Микробы, расщепляющие казеин (молочный белок), вызывают пептонизацию молока —- при расщеплении пептонов могут выделяться индол, сероводород, аммиак.

Образование газов можно установить с помощью индикаторных бумажек на МПБ. Фильтровальную бумагу заранее пропитывают определенными растворами, высушивают, нарезают узенькими полосками длиной 5 — 6 см и после посева культуры на МПБ помещают под пробку между нею и стенкой пробирки. После инкубации в термостате учитывают результат.

Аммиак вызывает посинение лакмусовой бумажки; при выделении сероводорода на бумажке, пропитанной 20% раствором свинца ацетата и натрия гидрокарбоната, происходит образование свинца сульфата — бумажка чернеет; индол вызывает пок­раснение бумажки, пропитанной раствором щавелевой кислоты.

Помимо указанных сред, способность микроорганиз­мов расщеплять различные питательные субстраты опре­деляют с помощью бумажных дисков, пропитанных опре­деленными реактивами (системы индикаторные бумажные «СИБ»). Эти диски опускают в пробирки с исследуемой культурой и уже через 3 ч инкубации в термостате при 37 °С по изменению цвета дисков судят о разложении углеводов, аминокислот, белков и т. д.

Гемолитические свойства - способность разрушать эрит­роциты. Изучают на средах с кровью. Жидкие кровяные среды при этом становятся прозрачными, а на плотном кровяном агаре вокруг колонии появляется прозрачная зона гемолиза. При образовании метгемоглобина среда зеленеет.

Задание № 24.

Сделайте посев на углеводные и белковые среды для изучения сахаролитических и протеолитических свойств культуры. Внимание! Соблюдайте правила техники безопасности при работе с живыми культурами.

Задание №25.

Запишите в дневник методики исследований.

Задание №26.

Зарисуйте в альбом биохимический ряд.

Задание № 27.

Ознакомьтесь с серологическими свойствами бактерий.

Серологические свойства микроорганизмов - это свойства, описывающие антигенное строение микробной клетки. Они определяются с помощью серологических реакций. Например, реакции агглютинации на стекле. При этом используются исследуемая чистая культура и различные агглютинирующие сыворотки.

Задание № 28.

Произведите окончательную идентификацию бактерий. Выпишите результат исследования, используя бланк специального образца.

Вопросы для закрепления

1. Что называют культуральным методом лабораторной диагностики?

2. Каковы достоинства и недостатки этого метода?

3. Назовите задачи бактериологического метода.

4. Каковы правила взятия биологического материала в бактериологическую лабораторию?

5. Расскажите о правилах оформления направления, прилагаемого к материалу.

6. Расскажите о правилах транспортировки материала в бактериологическую лабораторию.

7. Каковы основные правила регистрации материала?

8. Перечислите основные манипуляции, производимые на 1 этапе бактериологического метода диагностики.

9. Назовите известные вам способы посева материала на плотные и жидкие питательные среды.

10. Расскажите об основных правилах приготовления окрашенных препаратов.

11. Перечислите основные манипуляции, производимые на 2 этапе бактериологического метода диагностики.

12. Что называют культуральными свойствами бактерий?

13. Какие способы изучения колоний вы знаете?

14. Какие признаки колоний можно описать, наблюдая невооруженным глазом в отраженном свете?

15. Какие признаки колоний можно описать, наблюдая невооруженным глазом в проходящем свете?

16. Какие признаки колоний можно описать при малом увеличении микроскопа или с помощью лупы?

17. Каковы правила приготовления мазков из колоний?

18. Какие правила техники безопасности необходимо выполнять при проведении посевов?

19. Какие манипуляции проводят на 3 этапе бактериологического метода исследования?

20.Для чего на 3 этапе бактериологического метода исследования изучают морфологические свойства бактерий?

21. Расскажите об основных этапах приготовления окрашенного мазка.

22. Что называют морфологическими свойствами бактерий?

23. Что называют ферментативными свойствами бактерий?

24. Какие субстраты расщепляют микроорганизмы?

25. Что называют сахаролитическими свойствами?

26. Как определить сахаролитические свойства на средах Эндо, Левина, Плоскирева?

27.Каким образом оценить сахаролитические свойства, используя пестрый ряд сред Гисса?

28. Какие конечные продукты выделяются при ферментации? Как их определить?

29. Как увидеть газообразование на плотных и жидких средах?

30. Что называют протеолитическими свойствами?

31. Какие питательные среды используют для их изучения?

32. Как проявляется протеолиз на желатиновом агаре?

33. Как выглядит протеолиз в молоке?

34. Что называют гемолитическими свойствами?

35. На каких средах их можно оценить?

36. Что такое гемолиз? Как выглядит гемолиз на жидких и плотных средах?

37. На основании каких свойств производится окончательная идентификация возбудителя?

Домашнее задание: учебник Ф.К. Черкес, с.111-113,

115-116.

Учебник С.А. Павловича, с.87-92