ТЕМА: «Изучение грамотрицательных патогенных кокков»
Задачи:
· Изучить методы выявления менингококка
· Изучить методы выявления гонококка
· Закрепить навык микроскопии готовых микропрепаратов
ЗАДАНИЕ № 1
Изучите методы выявления менингококка
Менингококковая инфекция – острая инфекционная болезнь, поражающая носоглотку, оболочки головного и спинного мозга, вызывается менингококком.
При заболеваниях, вызванных менингококком в лабораторию доставляется следующий материал: отделяемое носоглотки, спинномозговая жидкость, кровь.
Материал для исследования доставляется в бактериологическую лабораторию немедленно после забора и посева в термоконтейнерах.
При невозможности немедленной доставки рекомендуется использовать коммерческие транспортные системы и другие, готовые к употреблению, предназначенные для транспортировки требовательных микроорганизмов.
Если немедленно доставить СМЖ в лабораторию невозможно, допустимо хранение ее в течение 1-2 часов в термостате при температуре 37ºС.
Во время транспортировки СМЖ следует тщательно предохранять от охлаждения.
Поддержание соответствующих условий транспортировки и хранения СМЖ, от момента взятия пробы до момента выполнения исследования, имеет решающее значение для результатов бактериологического исследования. Следует помнить, что неправильное хранение пробы даже хотя бы в течение 1 часа значительно уменьшает количество или полностью исключает возможность выделения таких особо чувствительных микроорганизмов как N. Meningitides, H. Influenzae. Если проба высылается в лабораторию, которая находится на значительном расстоянии, следует заблаговременно, до взятия пробы, позаботиться о транспорте. Необходимо использовать для транспортировки нагретый термос или сумку термос (условия доставки около 37ºС).
Полученную пробу доставить в лабораторию, избегая чрезмерного перегрева и особенно охлаждения (может быть использован термос). Охлаждение ликвора ниже 30ºС ведет к гибели менингококков.
Транспортировка тампонов со взятым материалом или тампонов, погруженных в транспортные среды, доставляют в лабораторию тщательно защищенными от охлаждения – в термоконтейнерах при 37ºС.
При транспортировке материала в течение 1-2 часов применение транспортных сред не рекомендуется. При транспортировке в течение 2-4 часов уместно применение тампонов, смоченных питательной средой.
При транспортировке в течение 3-х часов и более используют транспортную среду.
Обязательно использование термоконтейнеров.
Подготовительный этап:
1. Подготовить рабочее место согласно правил работы в бактериологической лаборатории.
2. Подготовить емкости с дез. растворами для обеззараживания предметов, используемых в процессе работы, согласно инструкции.
Основной этап:
1. Бактериоскопическое исследование.
Основным в экспресс – диагностике менингококковых инфекций является бактериоскопическое исследование спинномозговой жидкости и слизи носоглотки и обнаружение в них бобовидных диплококков.
Мазки из носоглотки и спинномозговой жидкости окрашивают водным раствором основного фуксина и метиленовым синим, реже – по Граму.
Готовят 2 мазка для микроскопического исследования: на поверхность предметного стекла наносят две капли ликвора, высушивают на воздухе. Не следует распределять материал по большой поверхности, так как это снижает вероятность обнаружения микроорганизмов.
1. В качестве экспресс-метода диагностики рекомендуется приготовление мазка «толстой капли» крови, взятой из вены или пальца.
Приготовление мазка:
§ На середину предметного стекла пипеткой наносят каплю крови или прикладывают стекло непосредственно к капле, выступающей из пальца.
§ Стекло оставляют в горизонтальном положении до подсыхания крови.
2. Бактериологическое исследование.
Несколько капель крови, взятой стерильно из вены, засевают у постели больного на чашки с питательными средами: менингококк агар или сывороточный агар, «шоколадный» агар, агар Эндо, 0,1 % полужидкий сывороточный агар в соотношении 1:10 (1-2 мл крови – в пробирку с 7-10 мл полужидкого агара) или 5 мл крови засевают во флакон с 50 мл полужидкого агара или в двухфазную среду на основе «шоколадного» агара.
Все среды перед посевом должны быть подсушены и подогреты в
термостате при температуре 37ºС.
Посев крови на чашки с питательными средами производится следующим образом:
1-2 капли крови наносят на среду у края чашки, затем чашка наклоняется таким образом, чтобы кровь стекла по среде в виде дорожки до другого ее края.
Менингококки образуют небольшие, круглые, выпуклые, прозрачные колонии.
3. Серологическое исследование.
Наиболее часто используются реакция преципитации (РП), для обнаружения антител в крови больных ставят реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА).
Исследование ликвора
Спинномозговую жидкость (СМЖ)в количестве 2-5 мл берут у больного сразу же при поступлении в стационар. С целью недопущения контаминации посторонней микрофлорой взятие ликвора производят, как правило, два человека – врач и медицинская сестра – с соблюдением всех правил асептики.
Первую порцию СМЖ (около 1 мл) берут в отдельную пробирку для проведения общего ликворологического исследования.
Вторую порцию СМЖ (1-2 мл), предназначенную для бактериологического исследования, забирают в стерильную центрифужную пробирку. Касаться руками краев канюли, иглы и краев пробирки нельзя. Ватно-марлевую пробку полагается держать на весу за ее наружную часть.
Немедленно у постели больного производят посев ликвора (0,5 мл) в полужидкий сывороточный агар, подогретый в термостате при температуре 37ºС.
Исследование носоглоточной слизи на менингококк
Материал – слизь с задней стенки носоглотки – берут натощак или через 3-4 часа после еды стерильным ватным заглоточным тампоном, укрепленным на изогнутой проволоке. Материал берут с обязательным надавливанием шпателем на корень языка. Тампон вводят концом кверху за мягкое небо в носоглотку и проводят 2-3 раза по задней стенке. При извлечении тампон не должен касаться зубов, слизистой щек, языка и язычка. У детей до года рекомендуется забирать материал из носа специальным тонким тампоном.
Материал может быть засеян на месте его взятия на чашку Петри с питательной средой или погружен в пробирку с транспортной средой, или взят смоченным тампоном.
При отсутствии возможности доставить материал в лабораторию в течение 1-2 часов также необходимо применять 0,1 % полужидкий сывороточный агар с ингибитором. Все посевы производятся на подогретые при 37ºС питательные среды.
ЗАДАНИЕ № 2
2.1 Изучите методы выявления гонококка.
Гонорея – гнойное воспаление слизистой оболочки мочеполовых путей, передающееся при половом контакте.
Бленнорея – воспаление конъюнктивы глаз с выделением слизи, возникающие у новорожденных, заражающихся от больных гонореей матерей.
При заболеваниях, вызванных гококком в лабораторию доставляется следующий материал: у мужчин служит отделяемое уретры, у женщин - отделяемое влагалища, шейки матки, которое берут ватным тампоном непосредственно из пораженного органа.
При хронической форме гонореи, а также к концу лечения острой гонореи у мужчин исследуют слизисто-гнойные нити или хлопья, содержащиеся в моче. Для исследования берут утреннюю мочу в количестве 10-15 мл.
При поражении глаз материалом для исследования служат гнойные выделения конъюнктивы глаза. Берут их ватным тампоном, предварительно увлажненным стерильным раствором 0,9 % NaCl.
Патологический материал тотчас же после взятия необходимо доставить в лабораторию. При доставке следует защищать материал от холода, в лаборатории хранить его в термостате до исследования.
За 2-3 дня до взятия материала для бактериологического исследования больному не вводят антибиотики, антисептики и не проводят спринцевание. Патологический материал тотчас же после получения засевают на питательные среды, т.к. гонококки очень чувствительны к температурным колебаниям, высыханию и даже в гнойном содержимом гибнут в течение нескольких часов.
1. Бактериоскопическое исследование.
Мазки окрашивают щелочным раствором метиленового синего и по Граму. В гнойном содержимом мазка гонококки располагаются в виде бобовидных диплококков.
2. Бактериологическое исследование.
Проводят в тех случаях, когда гонококка в мазках не обнаруживают или находят нетипичные, измененные формы. Посев делают сразу после взятия гноя в чашки Петри с теплой питательной средой (агар) содержащий гидролизат казеина и нативную сыворотку крупного рогатого скота. Через сутки инкубации при температуре 370С на поверхности среды вырастают прозрачные с ровными краями, выпуклые, слизистой консистенции колонии гонококка, напоминающие капли росы. Для выделения чистой культуры колонии гонококка пересевают на скошенный агар и определяют чувствительность к антибиотикам.
3. Серологическое исследование.
При хронической гонорее, когда прекращается гноевыделение, ставят реакцию связывания комплемента (РСК), реакцию непрямой гемагглютинации(РНГА), реакцию иммунофлюоресценции (РИФ). В качестве антигена используют гонококковую вакцину или диагностикум, приготовленный из убитых гонококков.
ЗАДАНИЕ № 3