Методы микробиологической диагностики протозоозов.

Простейших выявляют в различных биологических материалах, взятых от больного.

Фекалии исследуют в день дефекации (обычно доставляют в лабораторию утром), причем вегетативные подвижные формы дизентерийной амебы выявляют не позд­нее 20 мин после дефекации, а вегетативные формы других простейших (лямблий, диэнт-амеб) исследуют в течение первых 1 — 1,5 ч после дефекации.

Кровь доставляют в лабораторию в стериль­ных пробирках (для серологических исследо­ваний) или в виде мазков и препарата «толстая капля» для исследования на малярию.

Микроскопический метод - основной метод диагностики протозойных инфекций. Микро- скопируют мазки, окрашенные по Романовскому-Гимзе или Райгу. Иногда применяют серологический, аллергологический, биологиче­ский и молекулярно-генетический (ПЦР и др.) методы диагностики.

Исследование фекалий. Фекалии исследуют в день дефекации. Из фекалий, внесенных в небольшом количестве (с булавочную головку) в каплю физиологического раствора, готовят мазок в виде негу­стой эмульсии на предметном стекле и смешивают с каплей 1% рас­твора Люголя. На приготовленную смесь наносят покровное стекло и микроскопируют с окуляром х 10 и объективом х 40 для выявления амеб и жгутиковых (лямблий и диэнгамеб). Дополнительно изучают трофозоиты дизентерийной амебы при окраске буферным раствором метиленового синего. Ооцисты криптоспоридий выявляют модифи­цированными методами окраски по Цилю—Нильсену. Они окраши­ваются в красный цвет (кислотоустойчивые).

Исследование крови. Для исследования крови готовят тонкий мазок и толстую каплю, которые окрашивают по Романовско­му—Гимзе или Райту. Для приготовления тонкого мазка на край предметного стекла наносят небольшую каплю крови, к которой касаются краем шлифованного стекла, наклоненного под углом 45° к предметному стеклу. Растекшуюся каплю по шлифованному краю быстро и равномерно передвигают к противоположному краю стек­ла. Мазок должен быть равномерным и тонким по всей поверхности стекла. Дату исследования, фамилию и инициалы или номер истории болезни наносят простым карандашом на высохшем мазке (надпись не смывается после окрашивания).

Основной метод выявления плазмодий малярии — изучение тол­стой капли на подкладке. Для этого на предметном стекле готовят мазок крови с помощью края шлифованного стекла. Невысохшей (влажной) поверхностью мазка прикасаются к капле крови, которая при покачивании предметного стекла распределяется (растекается) на большую площадь. Оптимальную толщину полученного препа­рата определяют возможностью рассматривания печатного текста через толстую каплю.

Для фиксации препаратов применяют метиловый спирт (1—2 мин), этиловый спирт (10 мин) или смесь Никифирова (20 мин). Толстую каплю не фиксируют.

Микроскопическое исследование патологического материа­ла заключается в приготовлении как нативных препаратов («толстая капля»), так и мазков, окрашенных по методу Рома­новского - Гимзы, и является основным методом диагностики заболеваний, вызванных простейшими. В некоторых случаях применяют серологический и аллергологический методы диаг­ностики. Непрямой метод серологических исследований на оп­ределение антител к антигенам простейших, иммуноферментный — метод и реже метод непрямой гемагглютинации на протозоозы: токсоплазмоз, лямблиоз, трихомониаз; аллергологи­ческий метод основан на регистрации реакции кожи в ответ на введение аллергенов возбудителей.

Аллерген сохраняет антигенные свойства, но лишен инфекциозности. Постановка внутрикожных проб с аллергеном про­изводится на внутренней стороне предплечья, вводится 0,1 мл аллергена (тулярин).

Ответ оценивается спустя 1—2 суток по диаметру папулы, зоны гиперемии и отека. Например, при токсоплазмозе используется внутрикожная проба с токсоплазмином, она считается положи­тельной, если на месте введения 0,1 мл токсоплазмина появля­ется гиперемия и инфильтрация кожи диаметром не менее 10 мм (более 20 мм — резко положительная) и через 48 часов размер инфильтрата не уменьшается. Для суждения об активности про­цесса можно использовать титрационную пробу с токсоплазми­ном, при постановке которой внутрикожно вводят различные раз­ведения токсоплазмина (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10 000, 1:100 000) по 0,1 мл каждого разведения. При активном процессе реакция наблюдается на высокие разведения (до 1:100 000 и выше), а ди­аметр инфильтрата на более слабые разведения может быть ра­вен или даже больше, чем на высококонцентрированные.

Вопросы для самоконтроля

1. Какие простейшие относятся ксаркодовым?

2. Каковы особенности морфологии дизентерийной амебы?

3. Перечислите представителей жгутиковых.

4. Назовите характерные клинические проявления кишечных ин­вазий.

5. Каков жизненный цикл малярийного плазмодия?

6. Какой источник инфекции мочеполовых инвазий?

7. Назовите клинические проявления токсоплазмоза.

8. Профилактические мероприятия, проводимые в очаге инфекции.

9. Охарактеризуйте микроскопические методы исследования про- тозоозов.

10. Каков путь заражения балантидиазом?