РАБОТА В ЛАБОРАТОРИИ № 4
1. Определите молекулы азотистых оснований, представленные на схемах.Какие из них относятся к пуриновым основаниям,а какие к пиримидиновым основаниям?
| |
| |
| |
| |
| |
| |
|
Задание №2" Уровни компактизации ДНК в хромосоме" Определите и опишите уровень компактизации генетического материала
| Уровни | Схема | Описание процесса |
| 1. | 
| |
| 2. |  
| |
| 3. | 
| |
| 4. | 
| |
| 5. | 
| |
| 6. | 
|
Задание №3 "Полиморфизм структуры ДНК" Определите структуру молекулы ДНК по предложенным схемам
| Схемы | Структура |
| |
| |
| |
|
Задание №4. Изучите фото. Отнесите пары согласно Денверской классификации. Дайте морфологическую характеристику каждой группы. На каком методе окрашивания основана данная классификация?
Группа A _________________________________________
Группа B _________________________________________
Группа C _________________________________________
Группа D _________________________________________
Группа E _________________________________________
Группа F _________________________________________
Группа G ________________________________________
Метод ___________________________________________
Практика:
Задание №5 Определение полового хроматина в клетках буккального эпителия человека.
Половой хроматин, плотное окрашивающееся тельце, обнаруживаемое в неделящихся ядрах клеток у гетерогаметных (имеющих Х и Y половые хромосомы) животных и человека. Половой хроматин подразделяют на Х-хроматин, или тельце Барра (открыт в 1949 английскими исследователями М. Барром и Л. Бертрамом), и Y-хроматин (открыт в 1970 шведскими учёными Т. Касперсоном и Л. Цех). Х-хроматин — интенсивно окрашивающееся основными красителями тельце (0,7—1,2 мкм), чаще прилегающее к ядерной оболочке и имеющее треугольную полулунную или округлую форму.Число ядер с Х-хроматином зависит от интенсивности размножения клеток в данной ткани и от гормонального состояния организма.В препаратах мазков из полости рта мужчин половой хроматин встречается только в 0,5–0,7% клеточных ядер; у женщин в15-60%.
Реактивы и оборудование: одноразовые палочки, предметные и покровные стекла, метиленовый синий, микроскоп с объективом 90х, иммерсионное масло.
Методика приготовления цитогенетического препарата:
Сглотнуть слюну, сделать шпателем соскоб клеток со слизистой щеки.
Содержимое соскоба равномерно нанести на предметное стекло и окрасить метиленовым синим (1-2 капли на препарат) в течение 3-5 минут.
Накрыть препарат покровным стеклом.
Положить на покровное стекло вчетверо сложенный лист фильтровальной бумаги и осторожно надавить на него.
Исследовать препарат при большом увеличении микроскопа, найти эпителиальные клетки слизистой оболочки с окрашенными ядрами и крупные, плотные глыбки хроматина, прилегающие к ядерной оболочке (половой хроматин или тельце Барра) (при необходимости использовать иммерсионное масло).
Проанализировать 15-20 клеток в каждом препарате. Посчитать число ядер с тельцами Барра. Отметить количество телец Барра в каждом ядре.
7.Сравнить данные у мужчин и женщин. Обратить внимание, что в клетках мужчин тельце Барра не встречается, а в женских клетках они встречаются в 40-60% клеток (остальные находятся на стадии деления) по одному тельцу в ядре.
Задание №6…. Выделение ДНК из буккального эпителия.
Реактивы и оборудование. 8% раствор хлорида натрия, 25% раствор детергента, дистилированная вода, холодный 96% этиловый спирт, водяной термостат, прогретый до 50℃, стакан, пробирка, пипетки
Подготовка к работе:
1. Подготовить раствор детергента: смешать 25 мл моющего средства («Фейри») и 75 мл дистиллированной воды. Делать аккуратно, чтобы избежать образования большого количества пены.
2. Поместить спирт в морозильную камеру.
Протокол:
1. В пробирку налить 1.5 мл8% раствора хлорида натрия
2. В стаканчик налить 10 мл воды, поместить ее в рот (пожевать щеки), активно прополоскать рот водой около 30 секунд, выплюнуть все это обратно.
3. В пробирку из п.1 добавить 3 мл воды с буккальным эпителием.
4. Добавить в пробирку 1,5 мл детергента
5. Аккуратно перемешать содержимое пробирки, не перебалтывая.
6. Поместить пробирку в термостат на 10 минут.
7. Вынуть пробирку, остудить.
8. Держа пробирку под углом аккуратно добавить 5 мл 95% холодного этилового спирта, чтобы он наслоился на имеющийся раствор. Отметить происходящее на границе двух растворов: спирта и лизата: формирование облака белых нитей – ДНК. Она не растворяется в спирте.
В рабочей тетради около пунктов 5-6 и 8дать развернутое описание происходящего в пробирке.