Малые молекулы модуляторы с хорошо охарактеризованными клеточными мишенями часто использовались в качестве реагентов для изучения биологических процессов. В Toxoplasma, например, исследование с цитохалазином D замешан актин в качестве ключевого игрока в инвазии хоста-клетки (Добровольский и Сиб, 1996). Динитроанилиновые ингибиторы полимеризации тубулина, были использованы для изучения клеточного деления (Morrissette и Сиб, 2002). Брефелдин А, ингибитор, который блокирует фактор переработки АДФ-рибозилирование в аппарате Гольджи, был использован для изучения перемещения белков (Hager и др., 1999). Ингибиторы были также полезными инструментами, чтобы помочь понять механизмы питательного приобретения от хоста (Коппенс и др., 2000), а также для исследования иммунной системы сигнальных путей, которые индуцируются в ответ на паразитировать вторжение (Ким и др., 2004, 2005), Если механизм действия хорошо подтверждено, ингибиторы могут предложить простую альтернативу генетических подходов. Поскольку малые молекулы действуют быстро, последствия ингибирования желаемой цели могут быть изучены в режиме реального времени.
Даже тогда, когда механизм эффекта малой молекулы не очень хорошо понимать в самом начале, анализ subse-Quent может доказать, проницательным, когда Asso-лем, связанный фенотип является достаточно убедительным. Хорошим примером является использование соединения 1 (рис 19.2), чтобы исследовать развитие скрытого Brady-zoite стадии. Соединение 1 было первоначально наблюдалось, сильный индуктор брадизоитных дифференцировок в пробирке (Нарэ и др., 2002). Механизм, ответственный был прослежен к клетке-хозяина, так как предварительная обработка с соединением 1, является достаточной, чтобы вызвать переключение с развитием в последующем вторжении паразитов (Радка и др., 2006). Эффект может быть аннулирована 5,6-дихлор-1-бета-D-ribofuranosylbenzimida-Zole (DRB), признанного ингибитора гена Тран-scription с помощью РНК-полимеразы II полимеразы, предполагая, что экспрессия гена-хозяина клеток опосредует эффект.
сигнализации МАР-киназы, возможно, не отвечает. Гены, которые избирательно активируемых в ответ на соединение 1 лечения были идентифицированы с помощью анализа ДНК-микрочипов. После гена миРНК нокдаун эксперименты подтвердили, что ингибирование транскрипции отдельных генов-хозяев могут Inde-висимо блок брадизоитный дифференциации. Эти результаты дали новое направление исследователям, изучающим брадизоитную дифференциацию empha-проклейки роли хозяина-клетки микроокружения в модуляции стадии дифференцировки.
В смелом новом подходе пионеров Гари Уорд и его коллеги, высокопроизводительный скрининг (HTS) библиотек соединений было использовано, чтобы идентифицировать небольшие молекулы, которые мешают с определенным аспектом взаимодействия хозяв-патогеном, с тем чтобы обеспечить понимание, лежащие в основе Biol-логия (Ward и др., 2002). В пионерской оценки этой стратегии, был разработан сложный микроскоп на основе экран для модуляторов, которые влияют на вторжение хост-клеток путем Toxoplasma (Кэри и др., 2004). Используя автоматизированную 384-луночную систему захвата изображения, исследователи смогли идентифицировать 30 не-цитотоксические соединения с эффектами на вторжении из библиотеки 12160 структурно-различных малых молекул. Вторжение YFP-меченые паразитов в соединении обработанных микро-луночных монослои количественно путем измерения отношения внеклеточных паразитов (меченное с помощью непрямой иммунофлуоресценции) к внутриклеточным из них (выведено из YFP-сигнала). Обнаружение было достаточно Sensi-TIVE для различения соединений, которые усиливают вторжение (6 молекул), от тех, которые ингибируют его (24 молекул). В серии вторичных анализов, различные подмножества ингибиторов показали целый ряд профилей активности на инвазионных-ассоциированных процессов - в том числе планирующего моторики, секреции microneme кальция индуцированных и коноида extru-Sion. Некоторые из ингибиторов / усилители Т. гондий вторжения показали сходные свойства на инвазии эритроцитов по Plasmodium Mero-zoites, предполагая, что они могут быть ориентированы на консервативные компоненты apicomplexan вторжения Machín-ERy. Интересно, что
526 Toxoplasma В качестве модельной системы ДЛЯ APICOMPLEXAN открытия новых лекарств
энхансеры вторжения показали никакого влияния на intracel-lular уровни кальция. В отсутствии какого-либо knowl-край молекулярных мишеней этих соединений, осуществление показало неожиданную степень сложности в отношении механизмов вторжения паразитов, особенно в отношении роли кальция в этих процессах. Хотя ни одна из молекул, идентифицированных на этом экране показывает suffi-Cient противопаразитарная потенция следует рассматривать ведут разработки лекарственных средств, они обладают потенциалом в качестве исследовательских реагентов для выявления механизмов, лежащих в основе вторжения хоста-клетки.
В теории, соединение, идентифицированное в таком экране фенотипической пары-сайте может быть использовано для идентификации соответствующего клеточного детерминанта через молекулярную маркировку и протеомические методы. На практике целевая идентификация является наиболее сложной частью общей стратегии. Синтезируя радио-меченного производного с достаточно высокой удельной активности для использования в лиганд-связывающих анализов требует доступа к выделенной радиохимии объекта. Для строительства нерадиоактивной «метки», такие как биотин, флуоресцентные хромофоры, или фото-аффинных реагенты, значительные эмпирические мастерить может потребоваться для того, чтобы найти изменения, которые не ставят под угрозу деятельности. При отсутствии высокого разрешения структурной информации, дизайн аффинных лигандов для связывания с опорой хроматографии является попадание или пропал усилие. После того, как биологически акти-чески активного производного помечено идентифицируется, доступ к первой скорости объекта протеомики необходимо для того, чтобы идентифицировать меченым мишень из экстрактов паразитов фракционировали с помощью электрофореза или хроматографическими методами. В тех случаях, когда соединение является достаточно мощным, и когда может быть выбран geneti-чески доминирующие соединение устойчивых мутантов, комплементационная клонирование белка-мишени также могут быть рассмотрены (Striepen и др., 2002).
Ограничения в сторону, эта новая химия на основе парадигмы для биологических исследований становится все более осуществимым с улучшенным доступом к различным общественных и коммерческих коллекций малых молекул. библиотеки Compound, доступные для квалифицированных исследователей включают при поддержке Национального института рака и Национального института неврологических расстройств и инсульта.
Несколько хорошо наделенные научные учреждения, такие как Университет штата Висконсина, Стэнфордский университет, Гарвард и MIT, разработали хорошо оборудованные основные средства, которые обеспечивают доступ к ряду коммерческих библиотек (ChemBridge, Microsource и другим), а также поддержка автоматизации. Хотя основное внимание в этом малой молекуле подхода заключается в том, чтобы обеспечить более глубокое понимание биологических систем, она имеет дополнительное преимущество потенциально проверки новые химиотерапевтические стратегий. Если повезет, есть надежда, что она может даже идентифицировать соединение свинца для дальнейшего развития.
ПЕРСПЕКТИВЫ
Реализация постоянно увеличивающейся пособ Тион молекулярных инструментов позволило укрепить позиции токсоплазмы в качестве модельной системы для Apicomplexa. Развитие системы генетической комплементации способствовало клонированию генов, для которых выбираемого или скринируемого фенотип существует (Striepen и др., 2002). Тек-Nique использует библиотеку ввода высокой частоты и эффективной стратегии рекомбинации спасательную для идентификации кДНК-клонов, способных к комплементации мутанта паразита. Она была успешно использована для клонирования Cryptosporidium IMPDH (Striepen и др., 2002) и, чтобы спасти условный клеточный цикл мутант через захват митотического белка suppres-соровой (White и др., 2005). В сочетании с проточной цитометрии и флуоресцентной микроскопии, метод также был использован для клонирования СПОРО-zoite стадии конкретного поверхностного антигена (Radke и др., 2004), а также для восстановления YFP-маркированные гены, белки нацелены на различных субклеточных местах (Gubbels и др., 2004). Эта система должна оказаться особенно полезной для понимания механизмов лекарственной устойчивости, путем облегчения идентификации белковых детерминант следующей химического мутагенеза и экстракорпоральной селекции дополняя клоны.
Пожалуй, наиболее мощный инструмент генетического для использования в целевой проверке представляет собой система Expres-Sion регулируемого гена, который позволяет создавать ули-ционные мутант гена нокаута. До недавнего времени, демонстрация того, что ген имеет важное значение в
| ПЕРСПЕКТИВЫ |
гаплоидные тахизоит могут быть выведено только инди-rectly - например, показывая, что ген может быть инактивирован только в присутствии Комплексов-альной копии или через невозможность восстановления нуля мутанта из сконструированного локуса гена pseu-dodiploid (Donald и Руса, 1994, 1998). Возможность отключить экспрессию генов с малой молекулой модулятора стало возможным в клетках млекопитающих с адаптацией к tetracy-Клайн регулируемой системы транс-активирующего из E.coli (Gossen и Bujard, 1992). Это так называемый переключатель «Tet-Off» позволяет прямую оценку функции гена с построением APPRO-priate трансгенного фона, в котором целевой ген экспрессируются до тех пор, тетрациклин модулятор не будет добавлен, который выключает экспрессию генов. Успешное осуществление этой технологии для Toxoplasma необходим выбор функционального химерного Tet-трансактиватор, способного конститутивной активации Tet-оператор (Teto), содержащего реагирующий промотор в отсутствии тетрациклина. Это было достигнуто за счет инсерционного захвата домена активирующего в рамке с проксимальным E.coli, тетр ДНК-связывающий домен, используя вниз по течению HXGPRT и гены LacZ в качестве селектируемых маркеров и просеянного соответственно (Мейснера и др., 2002). После того, как захватили и проверено, то трансактиватор был использован для построения условного нокаута гена MyoA, в которых этот эндогенный ген был нарушен в присутствии второго регулируемой копии. Ослабление миозина-A с выражением tetracy-Клайн дополнение вызвало серьезные нарушения в инвазии хост-клеток, однозначно установить существенность этого мотора как в пробирке и в мышиной модели (Мейснер и др., 2002). Общая полезность этой методики в Toxoplasma была продемонстрирована с построением условного нокаута в белке ациле-носителем (упоминались ранее), что подтверждает, что путь Т. гондий ФАС II, является необходимым для распространения паразита (Мазумдар и др., 2006). Важно отметить, что токсоплазмы-специфический Tet-transactivators также функ-Тион в P. малярийного, и поэтому они должен быть адаптирован для генерации условных нокаутов для малярийных генов кровотока стадии (Мейснер и др., 2005). Общая полезность этой методики в Toxoplasma была продемонстрирована с построением условного нокаута в белке ациле-носителем (упоминались ранее), что подтверждает, что путь Т. гондий ФАС II, является необходимым для распространения паразита (Мазумдар и др., 2006). Важно отметить, что токсоплазмы-специфический Tet-transactivators также функ-Тион в P. малярийного, и поэтому они должен быть адаптирован для генерации условных нокаутов для малярийных генов кровотока стадии (Мейснер и др., 2005). Общая полезность этой методики в Toxoplasma была продемонстрирована с построением условного нокаута в белке ациле-носителем (упоминались ранее), что подтверждает, что путь Т. гондий ФАС II, является необходимым для распространения паразита (Мазумдар и др., 2006). Важно отметить, что токсоплазмы-специфический Tet-transactivators также функ-Тион в P. малярийного, и поэтому они должен быть адаптирован для генерации условных нокаутов для малярийных генов кровотока стадии (Мейснер и др., 2005).
Полный потенциал этого условного «Tet-Off» нокаут гена подход был применен в широком масштабе к грибковым патогеном Candida Альби-банок для использования в качестве инструмента обнаружения наркотиков (Haselbeck и др., 2002; Роемер и др., 2003). Реализация этой технологии в широком масштабе для развития противогрибкового препарата иллюстрирует возможный дальнейший путь для открытия apicomplexan наркотиков, при условии, что достаточные ресурсы могут быть направлены на такой инициативе. Для диплоидного C. Albicans, условные нокаутов построены в два последовательных этапе, связанных с целевым гомологичной recombina-ции в штамме, экспрессирующий химерный белок transactiva-TOR, содержащий домен дрожжей активации GAL4. На первом этапе, гетерозиготная мутация в гене-мишени производятся путем заменой гена. Во-вторых, экспрессия остальные аллель находится под контролем регулируемого промотора Tet. Этот подход был использован на систематической основе, чтобы оценить относительную сущест-Cance из 823 генов ортологов существенных генов из S.cerevisiae, (Roemer и др., 2003). Analy-сестренка разрешается ранг упорядочение генов считается наиболее привлекательными мишенями наркотиков на основе фенотипической информации как в пробирке и в естественных условиях генных экспериментов коммутируемых вниз. Такая оценка предполагает рассмотрение ли ген нокдаун в сопровождении цитоцидного или цитостатических кинетиками, или как резко вирулентность в модели мыши была затронута. Гетерозиготы или условные нокауты, соответствующие высокий приоритет гены могут быть впоследствии использованы в качестве скрининга инструментов в анализах на основе клеток для идентификации соединений с селективностью для мишени, представляющей интерес. Основной принцип таких анализов является понятием haploin-достаточность, где понижение дозировки гена приводит в штамме, который сенсибилизированный к любому препарату, который действует на продукте этого гена (Гиавер и др., 1999). Селективность соединения для конкретного генного продукта демонстрируется, когда штамм Atten-экспрессии закончил институт этого гена появляется hypersen-sitive по сравнению с контролем родительского штамма. За систему C. Albicans «Tet-Off», уровни тетрациклина, необходимые для достижения оптимального hypersen-sitivity без чрезмерного подавления роста несколько штамма-зависимыми и определяются эмпирически. Для условных штаммов нокаутных где понижение дозировки ген приводит в штамме, который сенсибилизированный к любому препарату, который действует на продукте этого гена (Гиавер и др., 1999). Селективность соединения для конкретного генного продукта демонстрируется, когда штамм Atten-экспрессии закончил институт этого гена появляется hypersen-sitive по сравнению с контролем родительского штамма. За систему C. Albicans «Tet-Off», уровни тетрациклина, необходимые для достижения оптимального hypersen-sitivity без чрезмерного подавления роста несколько штамма-зависимыми и определяются эмпирически. Для условных штаммов нокаутных где понижение дозировки ген приводит в штамме, который сенсибилизированный к любому препарату, который действует на продукте этого гена (Гиавер и др., 1999). Селективность соединения для конкретного генного продукта демонстрируется, когда штамм Atten-экспрессии закончил институт этого гена появляется hypersen-sitive по сравнению с контролем родительского штамма. За систему C. Albicans «Tet-Off», уровни тетрациклина, необходимые для достижения оптимального hypersen-sitivity без чрезмерного подавления роста несколько штамма-зависимыми и определяются эмпирически. Для условных штаммов нокаутных уровни тетрациклина, необходимого для достижения оптимального hypersen-sitivity без чрезмерного подавления роста несколько штамма-зависимыми и определяются эмпирически. Для условных штаммов нокаутных уровни тетрациклина, необходимого для достижения оптимального hypersen-sitivity без чрезмерного подавления роста несколько штамма-зависимыми и определяются эмпирически. Для условных штаммов нокаутных
528 Toxoplasma В качестве модельной системы ДЛЯ APICOMPLEXAN открытия новых лекарств
соответствующая мишеней лекарственных средств, таких как Erg11p, Alg7p или His3p, стало возможным создать условия, которые дают 30-100 раз большую чувствительность к известным ингибиторам (Haselbeck и др., 2002). При наличии аналогичных систем для регулируемых Т. гондий и П. малярийного, этот подход так же возможен для apicomplexan паразитов.
Связанные химические геномные платформы также были разработаны для профилирования соединений с целью выяснения механизма действия (Haselbeck и др., 2002; Lum и др., 2004). Штаммы сенсибилизированных в мишени-специфическим образом могут быть собраны в комплексную панель для оценки пригодности отдельных штаммов в ответ на воздействие наркотиков. Способ действия селективных ингибиторов, может быть установлен в таком испытании пригодности путем количественного истощение сенсибилизированных штаммов растущих конкурена-венно в присутствии лекарственного средства. Штаммы выращивают в бассейнах и обнаруживаются ДНК-микрочипов гибридизации или с помощью мультиплексной ПЦР. При применении к коллекции гетерозиготном S.cerevisiae, или С. Альби-банок, этот подход был использован для подтверждения механизма противогрибковых препаратов (Гиавер и соавт, 1999;. Haselbeck и др., 2002;. Lum и др, 2004), Аналогичная стратегия химической Genomics также была применена к стафилококк, используя только регулируемую экспрессию антисмысловой РНК в качестве средства для набора вниз экспрессии генов (Forsyth и др., 2002). Такие испытания пригодности профилирования платформы служат мощные инструменты для идентификации ингибиторов специфических целевых среди хитов иден-tified в эмпирическим экранах целых клеток, и априори-мику приводит согласно целевому биологии.
К сожалению, ресурсы для применения генома на уровне имеющихся молекулярных инструментов пока не распространяются на антипаразитарную терапевтическую область. В кокцидиозе арене, регулирующие проблемы и экономические факторы привели к возобновлению интереса к разработке вакцин, с инвестицией в программах обнаружения наркотиков рассматриваются как более рискованные. Из-за относительно небольшого объема дел, мало коммерческий интерес к разработке новых препаратов для лечения оппортунистического криптоспоридиоза или токсоплазмоза. Что касается малярии, где есть кон-венное публичность и озабоченность по поводу devastat-ки потери жизни, связанный с П. малярийного в странах Африки к югу от Сахары, проблема для коммерческого развития явно не объема, но
маржи. С давлением, чтобы производить наркотики на «на-стоимость» основе для развивающихся стран, а также с повышенными нормативными и ответственности за качество продукции проблем в условиях увеличения затрат на разработку, потенциальную отдачу (общественные отношения отдающее или прибыли) просто недостаточно, чтобы компенсировать присущий риск. С приходом нового Millen-nium, увеличивая давление на фармацевтической промышленности повлияла на другую область обнаружения инфекционного заболевания наркотиков, а также. Многие из крупных компаний, либо полностью устранить или сильно сократить антибактериальное исследование и разработки (Projan и Youngman, 2002; Projan, 2003; Projan и Shlaes, 2004). При нынешних условиях, где будущие препараты для лечения заболеваний, вызванных паразитами apicomplexan которые могут исходить от?
Одним из возможных источников новых препаратов для лечения сироты возбудителей инфекционных заболеваний, является ареной для здоровья животных. Прецедент устанавливающего примером является успешным применение ивермектина (Мектизаны) для лечения онхоцеркоза, или африканской речной слепоты, в странах Африки к югу от Сахары. Используется в основном в качестве лекарственного средства здоровья животных для лечения глистных инфекций у домашнего скота и домашние животные, позже достигнут значительный клинический успех, в основном в рамках хорошо разрекламированной программы донорства производителя (Merck и Co.). Для apicomplexan паразитов, коммерческие программы обнаружения кокцидиоза наркотиков являются потенциальным каналом для клинических препаратов. В этом случае, запись до сих пор было несколько неоднозначным. Суб-оптимальные фармакокинетические свойства coccidiostat соединений, применяемые в клинической практике, вероятно, будет общее ограничение, так как они оптимизированы для использования в куриный корм, где дозирование Continu-ОЕ, а не на раз или дважды ежедневно. Пожалуй, наиболее широко используемый класс coccidio-стат соединений домашней птицы являются полиэфирные ионофоры, такие как монензин и салиномицина (Гриф и др., 2001). К сожалению, они слишком неселективные и токсичны для клинического применения, несмотря на их широкий спектр действия анти-кокцидии активности (Novilla, 1992;. Мид и др, 1995; Oehme и Pickrell, 1999). В отличие от этого, успешные триазина кокцидиостаты diclazuril и Toltrazuril - мех-ханизм которого неизвестна - нашли применение за пределами птичники. Diclazuril была использована с некоторым успехом в небольших неконтролируемых 2001). К сожалению, они слишком неселективные и токсичны для клинического применения, несмотря на их широкий спектр действия анти-кокцидии активности (Novilla, 1992;. Мид и др, 1995; Oehme и Pickrell, 1999). В отличие от этого, успешные триазина кокцидиостаты diclazuril и Toltrazuril - мех-ханизм которого неизвестна - нашли применение за пределами птичники. Diclazuril была использована с некоторым успехом в небольших неконтролируемых 2001). К сожалению, они слишком неселективные и токсичны для клинического применения, несмотря на их широкий спектр действия анти-кокцидии активности (Novilla, 1992;. Мид и др, 1995; Oehme и Pickrell, 1999). В отличие от этого, успешные триазина кокцидиостаты diclazuril и Toltrazuril - мех-ханизм которого неизвестна - нашли применение за пределами птичники. Diclazuril была использована с некоторым успехом в небольших неконтролируемых
| ПЕРСПЕКТИВЫ |
исследования для лечения Isospora и Cryptosporidium инфекций у пациентов со СПИДом (Menichetti и соавт, 1991;. Limson Pobre и др., 1995). К сожалению, Свободны-состоянии данные предполагают, что diclazuril поглощаются медленно и достигает относительно низких уровней в крови (Соаве и др., 1990). Тем не менее, ponazuril, метаболит толтразурила, был одобрен FDA для лечения лошадей протозойных myeloencephalitis (EPM), вызванных Sarcocystis neurona инфекций. Ponazuril также показывает хорошую пероральную эффективность против Toxoplasma в мышиной модели (Mitchell и др., 2004), что указывает на потенциальное клиническое применение против широкого спектра оппортунистических инфекций кокцидий паразитов. Очевидное преимущество изучения наркотиков для здоровья животных для клинического применения является наличием обширной фармакокинетики, эффективность,
Неожиданно, противопаразитарные соединения также были обнаружены среди препаратов, уже одобренных для клинического использования в FDA. Бисфосфонаты, которые используются для лечения резорбции костных заболеваний, как были показаны ингибировать рост ин витро кинетопластида и apicomplexan паразитов (Т. гондий и П. Falci-parum) (Martin и др., 2001). Вероятная мишень этих препаратов является фермент фарнезилпирофосфата-синтазами (ГФП), который отмечает точку разветвления мевалонатного пути, ведущую к стеролу и биосинтезу долихола, а также фарнезильной и геранилгеранильной модификацию белков (Keller и Fliesler, 1999; ван Бик и др, 1999;.. Бергстр и др, 2000; Гроув и др, 2000).. Два из наиболее сильнодействующих противопаразитарных соединений из числа совокупности 60 структурно различных bisphospho-ягодиц показали отличную защитную активность в мышиной модели токсо-plasmosis (Лин и др., 2005). Оба соединения показывают хорошее терапевтическое окно, отображение, по меньшей мере, 1000×повышенная активность против токсоплазмов, чем против линии клеток человека в анализе пролиферации управления. Так как трансгенный штамм Toxoplasma гиперэкспрессию рекомбинантного TgFPPS требуемые значительно более высокие уровни этих бисфосфонатов, чтобы достичь 50 процентов роста inhi-bition, ГЛС является вероятной внутриклеточной мишенью. Хотя эти более активные соединения не являются более распространенными бисфосфонатами, используемыми в терапии резорбции кости, они представляют собой приводят для
дальнейшая оптимизация для повышения биодоступности и потенции. Чтобы это пример поиска новых мероприятий из существующих препаратов быть отклонена как маловероятной, аβлакты антибиотик, недавно был идентифицирован с неожиданное клиническое применение. Антибактериальный агент был найден для индукции экспрессии переносчика глутамата и помогают предотвратить нейродегенерации, связанный с уровнями neurotransmit-тер повышенной глутамата в различных неврологических расстройств, в том числе инсульта, травмы спинного мозга, АЛС, невропатии СПИДом, и болезнь Альцгеймера (Ротштейн и др., 2005). Коллекции одобренных лекарств в настоящее время коммерчески доступны для облегчения скрининга новых видов биологической активности (MicroSource Inc.; https://www.msdiscovery.com/index.html).
С ограниченным участием фарма-ceutical промышленности в поисках новых лекарств для лечения протозойных заболеваний, это возможно для академических исследовательских групп, чтобы заполнить пустоту? Успех нитазоксанида наркотиков свидетельствует о том, что в начале исследование и разработки действительно могут быть достигнуты в научных кругах. Это -бензамидо-5-нитротиазол соединение было впервые синтезировано исследовательской группой в Институте Пастера в Париже, во главе с Жаном-Франсуа Rossignol в начале 1970-х лет (Rossignol и Cavier, 1975). Однако клиническое развитие не происходило гораздо позже, после того, как Rossignol сами основал Romark Labs в 1993 году с необходимой промышленной спонсорстве и успехом в клинических испытаниях для лечения протозойной диареи, с тех пор она стала важным агентом широкого спектра действия для лечения лямблиоза лямблии и Cryptosporidium parvum (Россиньоль и др., 2001; Белый, 2004; Фокс и Saravolatz, 2005; Очоа и White, 2005). Удивительно, но препарат также эффективен против кишечных нематод, ленточных червей и трематод (Rossignol и Maisonneuve, 1984; Favennec и др., 2003). Его активность против anaero-БИК бактериальных штаммов, восприимчивых к метронидазолу (Дюбрейль и соавт, 1996;.. Ямамото и др, 1999) указывает на общий механизм посредством восстановительного активации нитрогруппы этих препаратов с помощью кислородно-чувствительной пируват-НАДФ-оксидоредуктазы (Dubreuil и др, 1996;. Кумбс и Мюллер, 2002).
Возможно, наиболее обнадеживающие в борьбе, чтобы найти лекарства для сироты вызывает заболеваний является собирательством совместной промышленности-общественность
530 Toxoplasma В качестве модельной системы ДЛЯ APICOMPLEXAN открытия новых лекарств
консорциума на основе инициативы, такие как Medi-Cines для предприятия по борьбе с малярией (MMV, HTTP:. // WWW mmv.org/) или One World Health (OWH; Http: // www.oneworldhealth.org/). В соответствии с этой новой парадигмой обнаружения наркотиков, развитие на ранней стадии может включать в себя фармацевтические-ресурсах, но бремя расходов и риски ответственности, связанные с клиническим развитием и за его пределы, мигрировало к общественному достоянию с поддержкой частных пожертвований и грантов (например, от фонда Билла и Мелинды Гейтс). Партнерство, как правило, способствует передаче прав интеллектуальной собственности, связанных с ранним развитием наркотиков из коммерческих, а также научных секторов. До сих пор соединения в стадии разработки МОВ и OWH были ограничены, прежде всего артемизининовой соединений, с которыми имеются вопросы, касающиеся затрат и производственные проблемы, производные старых соединений (диаминов), или комбинации обоих (aminoacridines, прогванил, fosmidomycin и атовахон). Очевидно, что появление новых antipara-SITIC соединений потребует более широкого участия промышленного компонента этого партнерства, с тем чтобы использовать доступ к критически важным ресурсам, таким как сложные библиотеки и экспертизы лекарственной химии. К счастью, есть свидетельства более тесного сотрудничества, как показывает приверженность GlaxoSmithKline к партнерству ММВ. Тем не менее, акцент глобального здравоохранения consor-тиа всегда будет на главных убийц (малярия, ВИЧ, туберкулез), где, вероятно, будет более сильное воздействие, а не на заболеваниях, вызванных менее патогенов. В следствии, новые методы лечения oppor-tunistic кокцидий паразитов, таких как токсоплазмы и Cryptosporidium, скорее всего, возникают как побочный продукт коммерческих программ по разработке лекарственных средств антимикробных или, возможно, противомалярийных. С другой стороны, как показано на примере nitazox-anide, удачи и настойчивости может также случай союзник приводят к успеху следующие ранние исследования и разработки в полностью академической обстановке.
БЛАГОДАРНОСТЬ
Я хотел бы поблагодарить наставник Дэвид Roos и Пол освободитель в частности, для всех их поддержки в течение
года. Я также признателен моим многочисленным коллегам, которые внесли свой Toxoplasma исследовательский опыт такой полезный и приятным. Наконец, я хотел бы поблагодарить моего коллегу Татьяну Чжуна за ее помощь с протеинкиназы purifica Тион и энзимологии.
РЕКОМЕНДАЦИИ
Абрахамсен, МС, Templeton, т, Эномото, S. и др. (2004). Полная последовательность генома от APICOM-plexan, Cryptosporidium parvum. Наука 304, 441-445.
Allocco J., Дональд, RGK, Zhong, T. и др. (2006). Ингибиторы казеинкиназы 1 блокировать рост Leishmania основных promastigotes в пробирке. Международный Дж Parasitol 36, 1249-1259.
Andries, К., Verhasselt П., Guillemont, J. и др. (2005). Препарат diaryiquinotine активен на АТФ-синтазы микобактерий туберкулеза. Наука 307, 223-227.
Энтони, RG, Waldin, TR, Рэй, JA, Брайт, SW и Хасси, PJ (1998). устойчивость к гербицидам, вызванной спонтанной мутацией цитоскелета белка тубулина. Природа 393, 260-263.
Armson А., Сарджент К., Макдональд, Л. М., Finn, MP, Thompson, RC и Reynoldson, JA (1999). Сравнение эффектов двух динитроанилинов против Cryptosporidium parvum в пробирке и в естественных условиях у новорожденных мышей и крыс. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 26, 109-113.
Aspinall, TV, Joynson, DH, Guy E., Hyde, JE и Sims, PF (2002a). Молекулярная основа устойчивости сульфонамидных в токсоплазме и последствие для клинического лечения токсоплазмоза. J. Infect. Дис. 185, 1637-1643.
Aspinall, TV, Марли, Д., Hyde, JE и Sim, TS (2002b). Распространенность токсоплазма в коммерческих мясных продуктах, как контролируется с помощью ПЦР - пищу для размышлений? Международный J. Parasitol. 32, 1193-1199.
Baggish, AL и Hill, DR (2002). Противопаразитарный агент атоваквон. Antimicrob. Агенты Chemother. 46, 1163-1173.
Баль, А., Brunk, Б., Кребтри, J. и др. (2002). PlasmoDB: геном ресурса Plasmodium. База данных инте-решетки экспериментальных и расчетных данных. Nucleic Acids Res. 30, 87-90.
Barik, С., Тейлор, RE и Чакрабарти, D. (1997). Идентификация, клонирование и мутационный анализ казеин-киназы 1 кДНК паразита малярии, Plasmodium фальципарум. Стадия-специфическая экспрессия гена. J. Biol. Химреагент 272, 26 132-26 138.
Beckers, CJ, Руса, DS, Дональд Р. и др. (1995). Ингибирование цитоплазматического и органеллы синтеза белка в токсоплазме. Последствия для целевого макролидных антибиотиков. J. Clin. Вкладывать деньги. 95, 367-376.
Белл, А. (1988). ингибиторы микротрубочек в качестве потенциальных противомалярийных агентов. Parasitol. Сегодня 14, 234-240.
Бенбоу, JW, Bernberg, EL, Корда, А. и Мид, JR (1998). Синтез и оценка динитроанилинов для