Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые получают с помощью гибридомной, биотехнологии.
Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, который синтезирует специфические моноклональные антитела. Гибридома обладает способностью к неограниченному росту, характерна для опухолевой клетки и присущей лимфоциту способностью синтезировать антитела.
Разработаны стандартные реагенты-моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, применяемые для определения агглютиногенов эритроцитов. Цоликлоны представляют собой лиофилизированный порошок красного (анти-А) и синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлорида натрия непосредственно перед пробой.
Техника проведения.
Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После перемешивания компонентов наблюдают за реакцией агглютинации в течение 2-3 минут. Оценка результатов очень проста.
Определение групповой принадлежности крови может сопровождаться ошибками, которые ведут к неправильной трактовке результатов. Можно выделить три основные группы ошибок: ошибки, связанные с низким качеством реагентов; технические ошибки; ошибки, связанные с особенностями Схема оценки результатов определения групп крови спомощьюмоноклональных антител(цоликлоны анти-А и анти-В)исследуемой крови. Первых двух можно избежать, строго соблюдая описанные выше требования к сыворотке, условиям проведения реакции и др. Третья группа связана с явлением неспецифической панагглютинации (феномен Томсена), сущность которого состоит в том, что сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ. Подобное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и др. Описана также панагглютинация и аутоагглютинация у здоровых людей.
Явление панагглютинации и аутоагглютинации наблюдается только при комнатной температуре. Если определение групповой принадлежности проводить при температуре 37° С, они исчезают.
Нужно строго помнить, что во всех случаях нечеткого или сомнительногскрезультата следует провести повторное определение групп крови при помощи стандартных сывороток других серий, а также перекрестным способом.
ПОНЯТИЕ О РЕЗУС-ФАКТОРЕ
В 1940 г. в эритроцитах человека был обнаружен еще один антиген (агглютиноген), который назвали резус-фактором. Установлено, что резус-фактор присутствует у 85% людей, т. е. они являются резус-положительными (КЬ+), остальные 15% являются резус-отрицательными (Кп-). В отличие от групповых свойств агглютиногенов А и В, по отношению к резус-фактору (резус-антигену) в норме в крови не имеется антирезус-агглютинов (готовых антител). Такие антитела появляются в сыворотке крови лишь в результате иммунизации человека с резус-отрицательной кровью резус-положительными эритроцитами. Такая иммунизация наступает в результате повторных переливаний резус-положительной крови резус-отрицательному реципиенту или при беременности женщины с резус-отрицательной кровью резус-положительным плодом. Люди, иммунизированные подобным образом, становятся сенсибилизированными к повторным переливаниям резус-положительной крови. При этом происходят тяжелые посттрансфузионные реакции вплоть до летального исхода. Поэтому нужно твердо помнить, что реципиенту с резус-отрицательной кровью можно переливать только резус-отрицательную кровь.
СПОСОБЫОПРЕДЕЛЕНИЯ РЕЗУС-ФАКТОРА
Методы определения резус-фактора делятся на применяемые в клинике, не требующие специального лабораторного оснащения, и лабораторные способы.
Существует два способа определения резус-фактора в клинике (так называемые экспресс-методы):
- экспресс-метод со стандартным универсальным реагентом в пробирке без подогрева;
экспресс-метод на плоскости без подогрева.
Для первого способа может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца или из вены непосредственно перед исследованием, консервированная кровь без предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после формирования сгустка и отстаивания сыворотки.
Методика проведения реакции.
Для исследования понадобятся центрифужные пробирки не менее 10 мл в объеме. На дно пробирки наносят одну каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой антирезусную сыворотку группы АВ (IV), содержащую 33% раствор полиглюкина. Затем туда добавляют каплю исследуемой крови или эритроцитов. После этого содержимое размазывают по внутренней поверхности пробирки круговыми вращениями пробирки, добиваясь, чтобы содержимое растеклось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию. Агглютинация наступает обычно в течение первой минуты, но наблюдать следует не менее 3 минут, чтобы успел образоваться устойчивый комплекс «антиген-антитело» и агглютинация проявилась отчетливо.
После этого в пробирку добавляют 2-3 мл физиологического раствора и перемешивают путем однократного или двукратного перевертывания пробирки, но ни в коем случае не взбалтывая ее.
Крупные хлопья на фоне просветленной жидкости, свидетельствующие об агглютинации, указывают на резус-положительную принадлежность крови. Гомогенно окрашенная розовая жидкость в пробирке указывает на отсутствие агглютинации и на резус-отрицательную принадлежность крови.
Методика определения резус-фактора на плоскости без подогрева
На белой пластинке со смачиваемой поверхностью пишут фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется. На левом краю пластинки делается надпись «сыворотка-антирезус», на правом -«контрольная сыворотка». Контрольной сывороткой служит сыворотка группы АВ (IV), разведенная альбумином, не содержащая антител. В соответствии с надписями на пластинке помещают по 1 - 2 капли (0,05 - 0,1 мл) реактива и резус-контрольной сыворотки. К обеим каплям добавляют исследуемые эритроциты. Кровь размешивают с реактивом сухой стеклянной палочкой, размазывая ее на пластинке до образования капли диаметром 1,5 см. Пластинку слегка покачивают. Через 3-4 минуты для снятия возможной неспецифической агглютинации в каждую каплю добавляют 5-6 капель физиологического раствора. После этого пластинку покачивают в течение 5 минут.
Наличие хорошо выраженной агглютинации в капле свидетельствует о резус-положительной принадлежности крови, отсутствие агглютинации (гомогенная окраска) - о резус-отрицательной.
ОЦЕНКА СОВМЕСТИМОСТИ КРОВИ ДОНОРА И РЕЦИПИЕНТА
Для выявления совместимости крови по системе АВО Оттенберг ввел правило, согласно которому агглютинируются эритроциты переливаемой крови, а не крови больного. В соответствии с этим правилом возможно переливание разногруппной крови, а представители группы АВ (IV) являются универсальными реципиентами,
Но современными исследованиями установлено, что правило Оттенберга применимо лишь при переливании до 0,5 литра донорской крови.
Что касается резус-совместимости, то, как уже было сказано, резус-положительным пациентам принципиально можно переливать резус-отрицательную кровь. Но в связи с современными достижениями иммунологии и клинической практики в современной хирургии действует правило, согласно которому можно переливать только одногруппную и однорезусную кровь, за исключением экстренных случаев. Переливание иногруппной крови у детей запрещено вообще.