АНАЛИЗ АДРЕНАЛИНА
1. Реакция с хлоридом окисного железа
Адреналина гидрохлорид при добавлении FeCl3 окрашивается в изумрудно-зеленый цвет, переходящий от прибавления одной капли раствора аммиака в вишнево-красный, а затем в оранжево-красный.
2. Реакция азосочетания
Адреналин, как соединение, содержащее фенольную группу, обладает способностью сочетаться с солями диазония. В качестве диазореактивов применяют обычно диазотированную сульфаниловую кислоту. При взаимодействии диазобензосульфокислоты с фенолами в щелочной среде образуются азокрасители; сочетание протекает в пара- или орто- положении к гидроксильной группе.
Выполнение реакции: 1 мл 0,1% адреналина гидрохлорида растворяем в воде, прибавляем 5 – 6 капель диазореактива и через 3 – 5 мин – 2 – 3 капли раствора едкого натра; при этом возникает темно-красное окрашивание.
3. Реакция с фосфорномолибденовой кислотой
Фосфорномолибденовая кислота в кислом или нейтральном растворе не окисляет слабые восстановители. В щелочной среде окислительная способность фосфорномолибденовой кислоты значительно повышается, в результате чего происходит окисление многих соединений, в молекуле которых содержится фенольный гидроксил; фосфоромолибдат при этом восстанавливается до так называемой молибденовой сини, как следствие этого появляется синее или зеленое окрашивание.
Выполнение реакции: 1 мл 0,1% адреналина гидрохлорида растворяем в 1 мл воды и прибавляем 5 – 6 капель 10% раствора фосфорномолибденовой кислоты; адреналина гидрохлорид 0,1% приобретает зеленое окрашивание; после прибавления раствора аммиака появляется интенсивное темно-фиолетовое окрашивание.
4. Реакция окисления.
Препараты, содержащие в молекуле фенольный гидроксил окисляются раствором йодата калия в кислой среде, образуя окрашенные комплексы.
Выполнение реакции: к 1 мл 0,1% адреналина гидрохлорида прибавляют 1 мл воды, по 5 капель раствора фосфорной кислоты и 1% раствора йодата калия и нагреваем на водяной бане.
5. Тонкослойная хроматография (ТСХ)
На стеклянную пластинку наносим силикагель, гранулы которого предварительно измельчаем на шаровой мельнице, просеиваем через сито с размером отверстий 0,1 мм, обрабатываем концентрированной соляной кислотой, отмываем до нейтральной реакции дистиллированной водой и сушим на воздухе. Затем на тонкий слой силикагеля наносим каплю адреналина гидрохлорида 0,1%, помещаем в камеру с 70% этиловым спиртом, закрываем крышкой. Затем рассчитываем значение величины Rf, который должен быть равен 0,13, что свидетельствует о подлинности препарата.
6. Спектр поглощения.
0,005% раствор в 0,01 н растворе соляной кислоты, адреналина гидротартрата имеет максимум поглащения при длине волны 279 нм.
АНАЛИЗ НОРАДРЕНАЛИНА
1. Реакция с нингидрином.
0,005 г препарата растворяют в 1 мл воды, прибавляем 1 к4аплю 0,1 н раствора едкого натра, несколько капель 0,25% раствора нингидрина и кипятим смесь 1-2 мин; появляется желтое окрашивание.
2. Реакция с сульфитам меди в щелочной среде.
0,01 г препарата растворяем в 1 мл воды, прибавляем 0,1 мл раствора сульфата меди и 1 мл раствора едкого натра; появляется синевато-зеленое окрашивание.
3. Тонкослойная хроматография (ТСХ).
Как и в случае адреналина в качестве сорбента используем тонкий слой силикагеля в виде порошка, либо в виде водной суспензии; в качестве растворителя также используем 70% этиловый спирт. Коэффициент подвижности Rf равен 0,12.
4. Спектр поглощения.
Определяем на спектрометрах. Анализируемый раствор помещается в специальную кювету (ультрафиолетовая спектроскопия), источник света подается в устройство монохроматора, а оттуда свет попадает в кюветное отделение, после того как раствор поглощает свет, спек р определяется индикатором. Максимум поглощения 0,005% водного раствора норадреналина гидротартрата равен 279 нм.
5. Спектр флюоресценции.
Флюресценция норадреналина вызывается облучением коротковолновым ультрафиолетовым светом. Так, норадреналина гидротартрат флуоресцирует в ультрафиолетовом свете желто-зеленым светом. Максимум флуоресценции норадреналина гидротартрата составляет 505 нм.
АНАЛИЗ ЭФЕДРИНА
1. Реакция образования окрашенных комплексов меди:
0,01 г препарата растворяем в 1 мл воды, прибавляем 0,1 мл раствора сульфата меди и 1 мл раствора едкого натра. Появляется синее окрашивание, при взбалтывании этого раствора с 1 мл эфира эфирный слой окрашивается в фиолетово-красный цвет, что служит реакцией отличия эфедрина от остальных препаратов этой группы, у которых эфирный слой остается бесцветным.
Эфедрин, кроме того. дает следующую реакцию:
0,01 г препарата в 1 мл воды добавляем 8-10 капель раствора феррицианида калия и 2-3 капли раствора едкого натра; при нагревании ощущается запах бензальдегида.
2. Тонкослойная хроматография (ТСХ).
На стеклянную пластинку размером 9x12 см наносим слой окиси алюминия толщиной 0,6 мм.
В качестве растворителей используем смесь бензол-метанол (9:1), помещаем в этот раствор пластинку и рассчитываем потом Rf, который должен быть 0,15.
3. Хроматография на бумаге (БХ).
В данном случае неподвижной фазой служит вода, адсорбированная на бумаге. В качестве растворителя используем: 1) месь циклогексан-диэтиламин в соотношении 9:1, при этом Rp = 0,47; 2) смесь петролийный эфир-этиламин (9:1), Rf = 0,26; 3) смесь циклогексан-хлороформ-диэтиламин (7:2:1), Rf = 0,76.
4. Флюоресценция.
К 1-2 мг эфедрина гидрохлорида в сухой пробирке прибавляем 7-8 капель реактива Марки (раствор фармальдегида в H2SO4) и 5 – 7 капель воды. Наблюдается интенсивно голубая флюоресценция.