ПЛАН:
1. Иммунологические реакции
2. Серологические реакции
3. Аллергодиагностика
4. Оценка иммунологического статуса
1. Иммунологические реакции -
это реакции между антигенам и антителом или между антигеном и сенсибилизированными лимфоцитами, которые происходят в живом организме и могут быть воспроизведены в лабораторных условиях. Антигены специфичны, т.е. они способны взаимодействовать только с гомологичными антителами или лимфоцитами соответствующего клана. Специфичность во взаимодействии с антителами определяется особенностью поверхностной структуры антигенов - наличие эпитопов - детерминантных групп на поверхности молекулы носителя.
Специфичность реакции антиген - антитело сегодня представляют как взаимодействие детерминантных групп антигена и активных центров антител. Так как антитела формируются под воздействием антигена, их структура соответствует детерминантным группам антигена. Детерминантная группа антигена и фрагменты активных центров антитела имеют противоположные электрические заряды и, соединяясь, образуют комплекс, прочность которого зависит от соотношения компонентов и среды, в которой они взаимодействуют.
Реакции антигена с антителом называются - серологическими, потому что участвующие в них антитела (иммуноглобулины) всегда находятся в сыворотке крови (от лат. Serum - сыворотка). Антигены с сенсибилизированными лимфоцитами называются клеточными.
Иммунологические реакции легли в основу лабораторных методов диагностики инфекционных и неинфекционных заболеваний. Они используются для выявления специфических антител, идентификации возбудителей и других антигенов, определения групп крови и подбора активного донора при пересадке органов и тканей. Они широко используются в медицинской практике иммунологами, биохимиками, генетиками, онкологами.
2.Серологические реакции. Серодиагностика.
Одно из основных применений серологических реакций - лабораторная диагностика инфекционных заболеваний.
Их используют:
• для выявления антител в сыворотке больного, т.е. для серодиагностики;
• для определения вида или серовара антигена (например выделенного от больного микроорганизма), т.е. его идентификация.
При этом неизвестный компонент определяется по известному. Для определения антител в сыворотке больного используют набор известных антигенов. Для идентификации микроорганизма его испытывают в реакции с известной диагностической антисывороткой.
Серологические реакции дают возможность судить о динамике накопления антител в процессе заболевания, о напряженности иммунитета, возникающего после профилактических прививок. Критерием для постановки диагноза является нарастание титра антител.
- Титр - это то максимальное разведение сыворотки, в котором образуется комплекс «антиген + антитело».
Серологические реакции характеризуются специфичностью и чувствительностью.
Специфичность - способность антигенов реагировать только с гомологичными антителами.
Чувствительность характеризуется минимальным количеством антигенов или антител, которое выявляет данная реакция.
Внешние проявления реакции зависят от свойств антител и антигенов и от условий постановки реакции.
Серологические исследования применяют также для определения антигенов различных веществ, групп крови, тканевых антигенов, антигенов опухолей, а также уровня гуморального звена иммунитета.
В лабораторной практике используют реакции
• агглютинации;
• преципитации;
• связывания комплемента;
• иммунофлюоресценции - РИФ (реакция с использованием меченых антител или антигенов);
• иммуноферментный анализ (ИФА), применяется для диагностики вирусных, бактериальных и паразитарных заболеваний, в частности для диагностики ВИЧ-инфекции, гепатита В;
• радиоиммунологический метод (РИМ) применяется для выявления антигенов микроорганизмов, определения гормонов, ферментов лекарственных веществ и иммуноглобулинов;
• иммуноблоттинг - определение антигенов с помощью известных сывороток (блот-пятно). Используется при ВИЧ-инфекции как диагностический метод.
3. Аллергодиагностика проводится с учетом типа аллергии.
При реакциях анафилактического типа важнейшей задачей является идентификация причинного аллергена. С этой целью ставятся кожноаллергические пробы с аллергенами из стандартных наборов: пылевых, пыльцевых, пищевых, лекарственных и др. На месте введения через 20 -30 мин. возникает покраснение, может образоваться волдырь.
Выраженность кожной реакции зависит от степени сенсибилизации организма. Лабораторная диагностика при РНТ основывается на выявлении антител класса Ig E, фиксированных на клетках и содержащихся в сыворотке крови.
Аллергические реакции замедленного типа (ТЗТ) обусловлены реакцией на аллерген сенсибилизированных Т-лимфоцитов, например при инфекционной аллергии, которая наблюдается при туберкулезе, бруцеллезе, туляремии, токсоплазмозах и др. Ввиду специфичности с целью диагностики этих заболеваний, ставят диагностические кожно-аллергические пробы с предполагаемым аллергеном (туберкулин, бруцеллин, туляремии). Результат учитывают через 24 - 48 часов.
4. Оценка иммунологического статуса.
Совокупность показателей специфического и неспецифического характера определяет иммунное состояние организма, т.е. иммунный статус.
Эти показатели могут быть измерены и выражены в количественной форме, т.к. известен их уровень при нормальном функционировании иммунной системы и можно наблюдать отклонения при нарушении ее работы.
Показателями состояния специфического звена иммунной системы являются:
• уровень иммуноглобулинов всех классов в крови;
• количество и функциональная активность Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций;
• выраженность клеточного и гуморального иммунитета.
Оценка иммунного статуса организма начинается с ориентировочного клинического (первого) этапа, на котором собирается и оценивается иммунологический анамнез: частота инфекционных заболеваний, характер их течения, выраженность температурной реакции, наличие очагов хронической инфекции. Далее оцениваются результаты клинического анализа крови: содержание гранулоцитов, моноцитов, лимфоцитов. С помощью бактериологических, вирусологических и серологических исследований выявляется бактерио- или вирусоносительство.
На втором этапе проводятся иммунологические тесты 1-го и 2-го уровней.
Тесты 1-го уровня позволяют выявить грубые нарушения со стороны иммунной системы путем определения в крови процентного содержания и абсолютного количества Т- и В-лимфоцитов.
Для подсчета Т-лимфоцитов наиболее доступным является тест выявления клеток, образующих розетки с эритроцитами барана (Е-РОК). У здоровых людей количество Т-лимфоцитов (Е-РОК) среди всех лимфоцитов периферической крови составляет 40-70 %. Более точными являются методы выявления Т- лимфоцитов с помощью специфических анти-Т-сывороток, например с использованием меченых моноканальных антител в иммунофлюоресцентном геле.
Тесты для количественного подсчета В-лимфоцитов основаны на обнаружении некоторых поверхностных маркеров, отсутствующих на Т- лимфоцитах и представленных на В-лимфоцитах: поверхностных иммуноглобулинов, рецепторов СЗ-компонента комплемента, специфических В- антигенов. Количество В-лимфоцитов определяется по наличию на них рецепторов к СЗ-компоненту комплемента методом ЕАС (эритроциты, сенсибилизированные антителами и комплементом) - розеткообразующих клеток (ЕАС-РОК), которое в норме составляет 10-30 % общего числа лимфоцитов.
Кроме того, к тестам 1-го уровня относится определение концентрации сывороточных иммуноглобулинов Ig M, Ig G и Ig A (по Манчини). Для этого используется реакция преципитации в геле (тест иммунодиффузии) между антителами к Ig M, Ig G и Ig A. Уровень сывороточных иммуноглобулинов отражает функциональное состояние В-системы иммунитета.
Для оценки факторов неспецифической защиты организма определяют фагоцитарную активность нейтрофилов крови. О фагоцитарной активности судят по проценту фагоцитирующих клеток и среднему количеству микробных частиц, поглощенных одним лейкоцитом.
Тесты 2-го уровня позволяют провести более тщательный анализ иммунного статуса организма человека, который позволяет уточнить характер дефекта, выявленного на предыдущем этапе с помощью ориентировочных тестов. К ним относятся определение субпопуляций регулярных Т-лимфоцитов: (Т-хелперы/Т-супрессоры), оценку функциональной активности регуляторных и эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов и др. Большинство тестов 2-го уровня весьма трудоемки, результаты их могут быть получены не ранее чем через 3-7 суток.