При инфекционных болезнях во внутренней среде организма присутствуют возбудитель и его продукты (антигены, токсины, ферменты). Ответная реакция организма на присутствие таких чужеродных агентов выражается в образовании антител или иммунных лимфоцитов.
Возможность обнаружения специальными методами любого из участников иммунного ответа лежит в основе иммунодиагностики инфекционных болезней.
С этой целью широко используют иммунохимические методы, которые называют также серологическими (от лат. serum – сыворотка и logos – учение), для обнаружения АТ или Аг микроорганизмов в биологических нативных материалах, полученных от больных или здоровых людей при диагностических и иммунологических исследованиях. Исследуют сыворотку крови, мочу, другие жидкости организма, ткани, а также выделенные культуры микроорганизмов.
Эти методы в зависимости от характера и состояния антигена можно объединить в несколько групп:
прямые методы взаимодействия и визуального определения результатов реакции Аг-АТ: реакции агглютинации, преципитации, лизиса и связывания комплемента;
методы пассивной агглютинации с использованием носителей антигена или антитела (реакции со свидетелями). К ним относят реакции пассивной гемагглютинации, латекс-агглютинации, коагглютинации и др.;
реакции, основанные на использовании различных меток для одного из участников взаимодействия антиген–антитело (ферментных, флюоресцирующих, радиоизотопных и др.). В зависимости от использованной метки эти тесты называются иммуноферментным анализом (ИФА), реакцией иммунофлюоресценции (РИФ), радиоиммунологическим тестом (РИТ) и др.
Выбор реакции для диагностики обусловлен ее специфичностью и чувствительностью Специфичность характеризуется способностью АГ реагировать только с гомологичным AT, чувствительность – минимальным количеством антигенов (или антител), которое возможно выявить с помощью данной реакции.
Обнаружение в сыворотке крови больного антител против антигенов возбудителя позволяет поставить диагноз болезни. При выделении микроба от больного проводят идентификацию возбудителя путем изучения его антигенных свойств (идентификация антигенов) с помощью иммунных диагностических сывороток, т. е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела. Это так называемая серологическая идентификация микроорганизмов. Серологические исследования применяют также для идентификации различных биологически активных веществ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепторов клеток и др.
Прямая реакция in vitro между Аг и АТ состоит из специфической и неспецифической фазы. В специфическую фазу происходит быстрое специфическое комплементарное связывание активного центра антитела с детерминантой антигена с образованием ИК. Он визуально не определяется, но в присутствии изотонического раствора образует агломераты, которые выпадают в осадок и хорошо различимы визуально,– это вторая неспецифическая фаза реакции – более медленная, которая проявляется видимыми физическими явлениями, например образованием хлопьев (феномен агглютинации) или преципитата в виде помутнения. Эта фаза требует наличия определенных условий (электролитов, оптимального рН среды).
Ниже мы остановимся на принципах и схемах основных иммунодиагностических реакций. Детальная техника постановки реакций будет изучаться на практических занятиях по иммунологии.