ТЕМА: МЕТОДЫИЗУЧЕНИЯ СИСТЕМЫНЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ МАКРООРГАНИЗМА. АНТИГЕНЫ.
ПЕРЕЧЕНЬ КОНТРОЛЬНЫХ ВОПРОСОВ
1. Факторы и механизмы неспецифической резистентности. Барьерные и противомикробные свойства кожи, слизистых оболочек, лимфатических узлов, ареактивность тканей, нормальная микрофлора.
2. Гуморальные факторы неспецифической защиты: эндогенные пептиды-антибиотики, пропердин, лизоцим, b-лизины, фибронектин, белки острой фазы воспаления.
3. Интерфероны. Группы интерферонов по продуцентам, типы ИФН по способу образования. Механизм действия интерферонов
4. Система комплемента. Структура. Пути активации (классический, альтернативный). Активаторы системы комплемента. Ингибиторы и инактиваторы комплементарного каскада. Биологические функции активированных компанентов комплемента. Биологически активные фрагменты, их функции. Анафилатоксины, их биологическая роль. Мембраноатакующий комплекс. Методы определения активности системы комплемента.
5. Полиморфноядерные и мононуклеарные фагоциты (происхождение, характеристика, функции). Фагоцитарная реакция (фазы, механизмы и факторы внутриклеточной бактерицидности). Исходы фагоцитоза.
6. Показатели фагоцитоза и методы их определения.–
7. Естественные киллеры. Механизмы распознавания и цитолиза клетки-мишени.
8. Антигены: определение, принцип строения, свойства антигенов. Классификации антигенов. Групповые, видовые, вариантные, стадийные антигены. Перекрестные антигены. Антигенная мимикрия. Антигены бактерий. Антигенные свойства грибов.
ЛАБОРАТОРНАЯ И САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА
1. Оценка бактерицидной активности кожи по Клемпарской
Принцип метода: На поверхность кожи предплечья наносится культура E. coli. Через определенные промежутки времени определяют количество жизнеспособных бактерий методом отпечатков. На основании полученных результатов рассчитывается индекс бактерицидности (ИБ) по формуле:
КО-К20
ИБ = ------- х 100, где
КО
КО - количество колоний сразу после контаминации кожи;
К20 - количество колоний через 20 минут.
В норме ИБ более 95%
| Время, мин | 0* | 5* | 10* | 15* | 20* |
| Количество колоний |
ИБ = 95,3%
Вывод: бактерицидная активность кожи сохранена
Определение активности комплемента в реакции иммунного гемолиза.
Название реакции: Реакция иммунного гемолиза
Ингредиенты реакции:
Исследуемый материал: сыворотка крови обследуемого (содержит комплемент)
Диагностические препараты: Гемолитическая сыворотка (инактивированная нагреванием 56°С сыворотка крови кролика, иммунизированного бараньими эритроцитами), стандартная 5% взвесь эритроцитов барана, физиологический раствор
| Разведения сыворотки | 1/10 | 1/15 | 1/20 | 1/25 | 1/30 | 1/35 | 1/40 | 1/45 | 1/50 | 1/55 | КГС | КЭ |
| Гемолиз +/- | Гем+ | Гем+ | Гем+ | Гем+ | Гем+ | Гем+ | Гем+ | Гем- | Гем- | Гем- | Гем- | Гем- |
Вывод: Сыворотка крови обследуемого содержит комплемент с титром активности 1/45
Определение активности лизоцима.
Титр лизоцима - это максимальное разведение исследуемого материала, в котором еще проявляется литическая активность лизоцима по отношению к эталонному штамму микроорганизмов (Micrococcus lysodeicticus).
Ингредиенты реакции:
Исследуемый материал: сыворотка крови обследуемого
Тест-объект: Чистая суточная культура Micrococcus lysodeiticus
| Разведения сыворотки | 1/2 | 1/4 | 1/8 | 1/16 | 1/32 | 1/64 | КК | КС |
| Лизис +/- | Нет осадка Лизис + | Нет осадка Лизис + | Нет осадка Лизис + | осадок Лизис - | осадок Лизис - | осадок Лизис - | осадок Лизис - | Нет осадка |
Вывод: Титр ативности лизоцима 1/8.
4.Оценка фагоцитоза.
► Определение процента активных фагоцитов (ФЧ) и фагоцитарного индекса (ФИ)
Процент активных фагоцитов - это количество клеток, обладающих фагоцитарной активностью. В норме - не менее 50%. Фагоцитарный индекс - среднее количество микробов, поглощенных одним фагоцитом (подсчитывают 25 или 50 фагоцитов в разных полях зрения). В норме - 4-6.
Принцип метода: В цитратную кровь вносят культуру стафилококка инкубируют в термостате 30 минут. Затем готовят мазки, окрашивают их по Романовскому-Гимзе, микроскопируют и рассчитывают показатели.
Результат исследования: В поле зрения 25 фагоцитов, 14 захватили стафилококки, фагоцитарная активность: 14 х 100/ 25 = 56%, фагоцитарный индекс: 14 х 4/ 14 = 4
Вывод: Фагоцитарная активность крови обследуемого по активности фагоцитов и фагоцитарному индексу сохранена
► Оценка завершенности фагоцитоза.
| где КО - количество колоний сразу после внесения культуры; К120 - количество колоний через 120 мин. инкубации в термостате. |
Принцип метода: В цитратную кровь вносят культуру кишечной палочки и делают высев на питательную среду. После 120 минутной инкубации в термостате высев повторяют и инкубируют оба посева в термостате. Через сутки проводят подсчет колоний и рассчитывают процент завершенности фагоцитоза (ЗФ) по формуле: КО-К120
ЗФ = ------- х 100,
КО
В норме завершенность фагоцитоза - 50-99%.
Результат: Количество колоний в первом высеве 25; количество колоний во втором высеве 12; завершенность фагоцитоза: 25-12=13 х 100/ 25 = 52 %
Вывод: Фагоцитарная активность крови обследуемого по завершенности фагоцитоза сохранена
(соотвествует норме).
| 
|
| Зарисовать демонстрационный препарат незавершенный фагоцитоз N. gonorrhoeae Окраска Граму Увеличение: x630 | Схема иммунный фагоцитоз (нарисовать):1. опсонины; 2. антитела; 3. комплемент; 4. Fc-рецепторы;5. бактерия 6. макрофаг |
