Определение чувствительности культуры к антибиотикам.

Тема: Микробиологическая диагностика урогенитальных инфекций, вызванных микоплазмами и уреаплазмами

Задача №1 Исследование соскоба из цервикального канала от обследуемой с бесплодием с помощью тест-системы MуcoplasmaDUO

Набор Mуcoplasma DUO позволяет культивировать, идентифицировать и дифференциально титровать урогенитальные микоплазмы, а также определять чувствительность культуры к антибиотикам. Метод позволяет получить результаты в течение 24-48 ч.

Материалом для исследования являются соскобы из уретры, цервикального канала, влагалища (и др.). Так как микоплазмы прилипают к поверхности эпителиальных клеток, материал следует собирать со слизистой с помощью специальной цервикальной щеточки после чего погрузить щеточку в 2 мл транспортной среды и взбалтать, чтобы смыть все клетки в среду.

Идентификация и титрование урогенитальных микоплазм основаны на специфических метаболических свойствах каждого микроорганизма, которые гидролизуют:

- Ureaplasmaurealiticum (UU) – мочевину;

- Mycoplasma hominis (MH) – аргинин.

При этом образуется ион аммония и происходит защелачивание среды. Вследствие этого изменяется цвет (с желтого на красный) индикатора кислотности среды, что позволяет визуализировать реакцию. Таким образом, при желтой окраске содержимого лунок – микоплазмы отсутствуют, при красной окраске – микоплазмы присутствуют в пробе. Если покраснела лунка U – в пробе присутствует UU; если покраснела лунка Н – в пробе присутствует МН; если покраснели лунки U и Н – в пробе присутствуют и UU, и МН.

Т и т р о в а н и е (определение количества) основано на принципе разведения исследуемого материала в жидкой среде. Проба последовательно разводится в транспортной среде, в лунке D (разведение 10^-1) и, наконец, в лунках U> 10⁴ и Н > 10⁴ (разведение 10^-2). Таким образом, может быть определен титр микоплазм. Этот титр соответствует лунке, цвет которой изменился на красный через 24-48 ч инкубации.

Данный набор позволяет определить титры порядка 10^-3 – 10^-4 мл, которые уже считаются этиологически значимыми.

Учет результатов: первые результаты считываются через 24 ч инкубации. При наличии положительной реакции в лунке с высоким титром (10⁴), получают окончательный результат. Второй раз считывают результаты через 48 ч в следующих случаях:

- если нужно подтвердить отрицательный результат,

- определить присутствие микоплазм в низких титрах,

определить штаммы, присутствующие в высоком титре, но характеризующиеся медленным метаболизмом

Вывод: __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Определение чувствительности культуры к антибиотикам.

Микроплата для определения чувствительности к антибиотикам включает два ряда по 8 лунок, содержащих различные антибиотики. Разные концентрации антибиотиков в лунках позволяют получить профиль чувствительности тестируемых микоплазм (чувствительная, умеренно устойчивая, устойчивая). Лунки Тс служат контролем роста без антибиотиков. Определение осуществляется с использованием содержимого лунки Х набора MуcoplasmaDUO.

Оценка-интерпретация. Тест интерпретируется тогда, когда контрольные лунки роста изменят цвет с желтого на красный. На практике плата исследуется через 24 ч и через 48 ч для установления низкой резистентности:

- 2 желтых лунки – отсутствие роста (чувствительна),

- 2 красных лунки – рост в присутствии антибиотиков (устойчива),

- лунка с низкой концентрацией антибиотика – красная, лунка с высокой концентрацией антибиотиков – желтая (умеренно устойчива).

Для клиндамицина и пристинамицина используется лишь одна концентрация антибиотика, поэтому возможны только два варианта результата: культура чувствительная или устойчивая.

Спектр используемых антибиотиков Название антибиотика Код антибиотика Результат теста Офлоксацин (1мг/л и 4 мг/л) OFX1,   OFX4   Клиндамицин (2мг/л) CM2   Пристинамицин (2мг/л) PT2   Эритромицин (1мг/л и 4 мг/л) E1,   E4   Джозамицин (2 мг/л и 8 мг/л) JM2,   JM8   Тетрациклин (4 мг/л и 8 мг/л) TE4,   TE8   Миноциклин (4 мг/л и 8 мг/л) MNO4,   MNO8   Доксициклин (4 мг/л и 8 мг/л) DO4,   DO8   Контроль роста без антибиотика Tc, Tc

Результаты теста:

Вывод:________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Заключение:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

_____________________________________________________________________________________