Показано, что вакцинные препараты представляют собой смесь многочисленных вариантов вируса варицелла-зостер с множественными точечными мутациями, которые, вероятно, появились в течение процедуры ослабления вируса и могут вносить существенный вклад в ослабление вакцины и развитие осложнений после вакцинации.
It is demonstrated, that the vaccinal preparations are a mixture of many variants of the Varicella-Zoster virus with the multiple dotted mutations, which have probably appeared during a procedure of the virus weakening and can make a substantial contribution to a vaccine weakening and the complication development after vaccination.
Вирус варицелла-зостер (VZV) был открыт в 1958 г. при ранних попытках создать вакцину [1,2]. Он является этиологическим агентом ветряной оспы и опоясывающего лишая (зостер). Штамм дикого типа Ока был произведен в лаборатории М. Такахаши Университета Осаки в 1974 г. путем ослабления вируса традиционным методом повторных пассажей в культуре клеток, был описан как вакцинный штамм и впоследствии принят к производству несколькими изготовителями (Biken, Merck, GlaxoSmithKline), но успешно никогда не клонировался и включает многочисленное, но неидентифицированное число штаммов [3, 4]. Живая ослабленная вакцина против ветряной оспы штамма Ока (в-Ока) обычно используется для вакцинации детей в различных странах. Запрошлые 10 лет от ветряной оспы вакцинировались миллионы детей, обычно в возрасте между 12 и 18 мес [5, 6]. В результате вакцинации на 75% уменьшилось число госпитализаций, связанных с ветряной оспой. Однако главным непредвиденным результатом было растущее число вспышек ветряной оспы среди иммунизированных детей. В качестве возбудителя в случаях ветрянки у привитых людей был идентифицирован вакцинный штамм Ока [7].
Несмотря на широкое использование вакцины, мало известно об изменчивости, патогенности и геномной вариации вакцинных штаммов [5]. На данный момент времени отсутствуют данные о том, насколько современные вакцинные препараты отклоняются от первоначального варианта и какова степень их сходства с диким типом вируса.
Цель работы. Идентификация точечных нуклеотидных замен в последовательностях различных открытых рамок считывания вакцинных препаратов трех фирм производителей: Varivax (Merck, USA), Biken Vaccine (Biken, Япония) и Varilrix (GlaxoSmithKline, Великобритания).
Материалы и методы. Основным материалом для исследования послужили несколько серий вакцинных препаратов, предоставленных различными фирмами-производителями. Из них 20 серий вакцины Varivax (Merck, США), 6 серий вакцины Biken Vaccine (Biken, Япония) и 1 серия Varilrix (GlaxoSmithKline, Великобритания), а также родительский штамм (р-Ока).
ДНК из VZV-вакцин и р-Ока вируса была изолирована при помощи MagNA Pure LC Instrument (Roche Applied Science, USA).
Для ПЦР-амплификации и сиквенсного анализа были использованы праймеры, разработан-
ные с учетом нуклеотидной последовательности следующих регионов генома: ORF 6, ORF 9А, ORF 10, ORF 21, ORF 39, ORF 50, ORF 51, ORF 52, ORF 54, ORF 59, ORF 64, два региона в ORF 31, три региона в ORF 55.
Для выявления наличия точечных мутаций в исследуемых открытых рамках считывания ДНК была подвергнута воздействию SURVEYOR Nuclease.
Результаты и обсуждение. Для изучения однородности последовательностей в-Ока штаммов VZV и р-Ока была использована геномная ДНК, выделенная из вакцин указанных фирм-производителей и штамма дикого типа. Наличие гетерогенности в исследуемых рамках считывания было показано при использовании SURVEYOR Nuclease. Позиции точечных нуклеотидных замен в вакцинных вариантах VZV были оценены после сиквенирования участков генома вируса ветряной оспы специфичными праймерами. Сиквенс 16 регионов в родительском штамме был сравнен с последовательностями вакцинных препаратов: в-Ока-GSK, в-Ока-Biken и GlaxoSmithKline-Ока. Точечные мутации были идентифицированы в каждой из шестнадцати исследуемых рамок считывания ORF 6, ORF 9A, ORF 10, ORF 21, ORF 39, ORF 50, ORF 51, ORF 52, ORF 54, ORF 59, ORF 64, причем две замены попадали в ORF 31, три замены — в ORF 55.
Заключение. Результаты сиквенирования для вакцинных штаммов в-Ока фирм Biken, GlaxoSmithKline и Merck выявили, что все изученные вакцинные препараты различаются по количеству точечных нуклеотидных замен в исследуемых открытых рамках считывания и отклоняются от исходного вакцинного штамма. Отдельные нуклеотидные замены присутствуют во всех шестнадцати открытых рамках считывания ДНК VZV исследуемых вакцинных препаратов.
Возможно, именно эти отклонения от исходного вакцинного препарата способствуют увеличению патогенности вакцины против ветряной оспы и, как следствие, развитию осложнений после вакцинации. Кроме того, мог появиться VZV-штамм с высокой патогенностью.
ЛИТЕРАТУРА
1. Weller Т.Н. Varicella and herpes zoster: changing concepts of the natural history, control and importance of a not-sobenign virus. N Engl J Med 1983; 309: 1362-1368.
2. Weller Т.Н. Varicella: historical perspective and clinical overview. J Infect Dis 1996; 174: S306-S309.
3. Gomi Y, Imagawa T., Takahashi M., Yamanishi К. Oka varicella vaccine is distinguishable from its parental virus in DNA sequence of open reading frame 62 and its transactivation activity. J Med Virol 2000; 61: 497-503.
4. Gomi Y., Sunamachi H., Mori Y. et al Comparison of the complete DNA sequences of the Oka Varicella vaccine and its parental virus. J Virology 2002; 76: 11447-11459.
5. Ampofo K., Salman L., LaRussa P., Steinberg S., Annunziato P., Gershon A. Persistence of immunity to live attenuated varicella vaccine in healthy adults. Clin Infect Dis 2002; 34: 774-779.
6. White C.J. Varicella-zoster virus vaccine. Clin Infect Dis 1997; 24: 753-763.
7. Galea S., Sweet A., Gershon A., LaRussa P., Steinberg S., Music S., Sharrar R. Abstr. fifth annual conference on vaccine research, Baltimore; 2002; P. 33.
Опубликовано: «Нижегородский медицинский журнал», 2006-№8- С.186-188