Изучение нативного препарата проводится с ориентировочной целью. При микроскопии нативного препарата можно приблизительно оценить количество сперматозоидов и их функциональную активность, а также можно обнаружить наличие элементов воспаления (лейкоцитов, слизи, эпителия) и флору.
Приготовление и микроскопия нативного препарата эякулята осуществляется аналогично приготовлению и микроскопии препарата секрета предстательной железы.
III. Подсчет количества сперматозоидов в эякуляте.
Подсчет количества сперматозоидов в эякуляте проводится с использованием камеры Горяева. Перед заполнением камеры эякулят разводят 1% раствором метиленового синего не для окрашивания биоматериала, а для обездвиживания сперматозоидов. К 0,4 мл красителя прибавляют 0,02 мл эякулята, перемешивают содержимое пробирки, в которой осуществлялось разведение и заполняют камеру Горяева. Сперматозоиды подсчитывают в 5-ти средних квадратах, разделенных на 16 малых и расположенных по диагонали сетки камеры Горяева. Сперматозоид считают относящимся к данному квадрату в том случае, если его головка лежит в пределах квадрата, при этом хвост может находится за пределами квадрата. Полученный при подсчете в камере Горяева результат умножают на 109.
В норме количество сперматозоидов в эякуляте составляет 60 - 150х109/л. Уменьшение количества сперматозоидов в эякуляте называется олигоспермия. Различают три степени олигоспермии.
При олигоспермии I степени количество сперматозоидов в эякуляте меньше 60х109/л, но не менее 30х109/л, при олигоспермии II ст. - меньше 30х109/л, но не менее 10х109/л, при олигоспермии III ст. - меньше 10x109/л. Отсутствие сперматозоидов в эякуляте называется аспермия.
Олигоспермия и аспермия могут быть обусловлены врожденными аномалиями строения полового аппарата, гормональными нарушениями (гипофизарная или тестикулярная недостаточность), а так же воспалительными заболеваниями половых органов.
IV. Подсчет активно-подвижных, слабо-подвижных и неподвижных сперматозоидов.
Для подсчета неподвижных и слабо-подвижных сперматозоидов готовят разведение эякулята с изотоническим раствором хлорида натрия. В пробирку вносят 0,4 мл изотонического раствора хлорида натрия и прибавляют 0,02 мл эякулята, перемешивают содержимое пробирки и заполняют камеру Горяева.
Микроскопируют при увеличении х8, с закрытой диафрагмой. В 5-ти средних квадратах, разграфленных на 16 малых и расположенных по диагонали сетки камеры, подсчитывают, отдельно, неподвижные и слабо-подвижные сперматозоиды. Слабо-подвижными считаются сперматозоиды, совершающие маятникообразные движения - только головкой или только хвостиком.
Для подсчета общего числа сперматозоидов готовят разведение эякулята с 1% раствором метиленового синего и подсчитывают сперматозоиды как было описано в предыдущей методике.
Расчет количества активно-подвижных сперматозоидов делают по формуле:
X = А - (В + С), где
• X - количество активно-подвижных сперматозоидов;
• А - общее количество сперматозоидов в 5-ти квадратах сетки камеры Горяева;
• В - количество неподвижных сперматозоидов;
• С - количество слабо- подвижных сперматозоидов.
После этого рассчитывают процентное содержание каждого вида сперматозоидов в эякуляте, принимая за 100% общее количество сперматозоидов.
В норме активно-подвижные сперматозоиды составляют 70 % и более,
слабоподвижные - 10-20 %,
неподвижные - не более 10 %.
Уменьшение количества активно-подвижных сперматозоидов в эякуляте называется астенозооспермия или астеноспермия. Такой симптом может наблюдаться при частичной обструкции семявыносящих протоков, а так же при тестостероновой недостаточности и при хронических орхитах или (и) эпидидимитах.
V. Подсчет количества живых и мертвых сперматозоидов.
Для подсчета количества живых и мертвых сперматозоидов проводят их прижизненную окраску, смесью равных объемов 5% раствора эозина и 10% раствора нигрозина. На предметное стекло помещают одну каплю разжиженного эякулята и одну каплю краски, капли перемешивают и делают мазок с помощью шлифованного стекла. Мазок высушивают на воздухе и микроскопируют при увеличении х90. Сперматозоиды, бывшие до окрашивания живыми, остаются бесцветными, а мертвые сперматозоиды окрашиваются в желтый цвет.
В норме живых сперматозоидов в эякуляте должно быть 80-95%.
Уменьшение количества живых сперматозоидов за счет увеличения количества мертвых называется некроспермия.