Микроскопическое исследование

Методы микробиологической диагностики

Цель микроскопического исследования — обнаружение в иссле­дуемом материале микроорганизмов. Обнаружение в приготовленном мазке микроорганизмов при некоторых бактериальных (гонорея, туберкулез, возвратный тиф, сифилис), грибковых инфекциях и протозойных (малярия, трихоманиоз, лямблиоз) инвазиях имеет опреде­ленное диагностическое значение.

Если при исследовании стерильных в норме жидкостей, при пер­вичной микроскопии выявляют микроорганизмы, это дает возмож­ность постановки предварительного диагноза, назначения и проведе­ния адекватной терапии.

В бактериологических лабораториях применяют не только обыч­ные методы оптической микроскопии в проходящем свете, но и специальные: в темном поле зрения, фазово-контрастной и люминес­центной микроскопии.

Иммерсионная микроскопия

Иммерсионная микроскопия предполагает использование иммер­сионного объектива с высокой разрешающей способностью (разреша­ющая способность - минимальное расстояние между двумя точками, при котором они еще видны раздельно). Фронтальную линзу объ­ектива погружают в иммерсионное масло, показатель преломления которого близок к показателю преломления стекла, что увеличивает разрешающую способность микроскопа. В этом случае лучи света, которые проходят через препарат, не меняют своего направления и не рассеиваются, а попадают в объектив, что позволяет рассмотреть объ­екты увеличенными в 1000 раз.

Темнопольная микроскопия

Микроскопию в темном поле зрения проводят с использованием специального приспособления - конденсора темного поля. При этом исследуемый препарат освещается сбоку косыми лучами, которые не попадают в объектив. В объектив попадают только отраженные от объекта лучи. При проведении темнопольной микроскопии приме­няют специальный конденсор - параболоид, в котором центральная часть линзы непрозрачная, а боковая поверхность конденсора зер­кальная; он задерживает центральные лучи и образует темное поле зрения. Отраженные лучи попадают на боковую поверхность конден­сора, отражаются от нее и концентрируются в фокусе. В связи с этим микроорганизмы видны ярко светящимися на черном фоне.

В практических лабораториях лечебно-профилактических учреж­дений темнопольную микроскопию используют для обнаружения в нативных препаратах возбудителей сифилиса, возвратного тифа, лептоспироза и для изучения подвижности бактерий.

Фазово-контрастная микроскопия

При проведении фазово-контрастной микроскопии пользуются специальным устройством, которое позволяет превратить изменение фазы лучей, проникающих через частицы неокрашенного препарата, в изменения амплитуды, которые можно воспринимать человеческим глазом.

Используемое для фазово-контрастной микроскопии приспосо­бление включает конденсор с набором кольцевых диафрагм, фазово-контрастных объективов и окуляров. При микроскопии свет, который проходит через участки препарата, проникает через фазовое кольцо и дает светлое изображение фона. А клетки микроорганизмов становят­ся темными на светлом фоне. Этот метод используют для обнаружения и характеристики подвижности холерного вибриона и лептоспир.

Люминесцентная микроскопия

Этот вид микроскопии основан на регистрации люминесцен­ции, т.е. способности некоторых веществ светиться под действием коротковолновых (например, ультрафиолетовых) лучей света. При люминесцентной микроскопии препараты окрашивают специальны­ми светящимися люминесцентными красителями-флюорохромами (акридиновый оранжевый, изоацетат флюоресцента). Этим мето­дом выявляют флюоресценцию анаэробных бактерий (Fusobacterium, Prevotella), что обусловлено присутствием флюорохромных веществ в их клетке. Флюорохромы, связавшись с белками, образуют стойкие комплексы, которые можно обнаружить в люминесцентном микро­скопе: они оранжево-красного или коричнево-красного цвета.

Электронная микроскопия

В микробиологии электронную микроскопию используют для изучения ультраструктуры бактерий, грибов, простейших, а также для изучения вирусов.

Виды электронной микроскопии

• Трансмиссивная - при которой изображение получают благодаря прохождению электронов через образец.

• Сканирующая (растровая) - при которой пучок электронов быстро сканирует поверхность объекта и вызывает излучение, которое формирует изображение на светящемся экране микро­скопа. Источником света является источник электронов, источ­ником электронов - электронная лампа. Электроны, проходящие через объект за счет его разной толщины и электронной плот­ности, отклоняются под разными углами и попадают в объек­тив, где формируется первое полезное увеличение объекта. Линза объектива дает промежуточное увеличение изображения. Проекционная линза позволяет увеличить изображение во много раз. Это увеличенное изображение попадает на флюоресцирую­щий экран, и его можно фотографировать.