Методы микробиологической диагностики
Цель микроскопического исследования — обнаружение в исследуемом материале микроорганизмов. Обнаружение в приготовленном мазке микроорганизмов при некоторых бактериальных (гонорея, туберкулез, возвратный тиф, сифилис), грибковых инфекциях и протозойных (малярия, трихоманиоз, лямблиоз) инвазиях имеет определенное диагностическое значение.
Если при исследовании стерильных в норме жидкостей, при первичной микроскопии выявляют микроорганизмы, это дает возможность постановки предварительного диагноза, назначения и проведения адекватной терапии.
В бактериологических лабораториях применяют не только обычные методы оптической микроскопии в проходящем свете, но и специальные: в темном поле зрения, фазово-контрастной и люминесцентной микроскопии.
Иммерсионная микроскопия
Иммерсионная микроскопия предполагает использование иммерсионного объектива с высокой разрешающей способностью (разрешающая способность - минимальное расстояние между двумя точками, при котором они еще видны раздельно). Фронтальную линзу объектива погружают в иммерсионное масло, показатель преломления которого близок к показателю преломления стекла, что увеличивает разрешающую способность микроскопа. В этом случае лучи света, которые проходят через препарат, не меняют своего направления и не рассеиваются, а попадают в объектив, что позволяет рассмотреть объекты увеличенными в 1000 раз.
Темнопольная микроскопия
Микроскопию в темном поле зрения проводят с использованием специального приспособления - конденсора темного поля. При этом исследуемый препарат освещается сбоку косыми лучами, которые не попадают в объектив. В объектив попадают только отраженные от объекта лучи. При проведении темнопольной микроскопии применяют специальный конденсор - параболоид, в котором центральная часть линзы непрозрачная, а боковая поверхность конденсора зеркальная; он задерживает центральные лучи и образует темное поле зрения. Отраженные лучи попадают на боковую поверхность конденсора, отражаются от нее и концентрируются в фокусе. В связи с этим микроорганизмы видны ярко светящимися на черном фоне.
В практических лабораториях лечебно-профилактических учреждений темнопольную микроскопию используют для обнаружения в нативных препаратах возбудителей сифилиса, возвратного тифа, лептоспироза и для изучения подвижности бактерий.
Фазово-контрастная микроскопия
При проведении фазово-контрастной микроскопии пользуются специальным устройством, которое позволяет превратить изменение фазы лучей, проникающих через частицы неокрашенного препарата, в изменения амплитуды, которые можно воспринимать человеческим глазом.
Используемое для фазово-контрастной микроскопии приспособление включает конденсор с набором кольцевых диафрагм, фазово-контрастных объективов и окуляров. При микроскопии свет, который проходит через участки препарата, проникает через фазовое кольцо и дает светлое изображение фона. А клетки микроорганизмов становятся темными на светлом фоне. Этот метод используют для обнаружения и характеристики подвижности холерного вибриона и лептоспир.
Люминесцентная микроскопия
Этот вид микроскопии основан на регистрации люминесценции, т.е. способности некоторых веществ светиться под действием коротковолновых (например, ультрафиолетовых) лучей света. При люминесцентной микроскопии препараты окрашивают специальными светящимися люминесцентными красителями-флюорохромами (акридиновый оранжевый, изоацетат флюоресцента). Этим методом выявляют флюоресценцию анаэробных бактерий (Fusobacterium, Prevotella), что обусловлено присутствием флюорохромных веществ в их клетке. Флюорохромы, связавшись с белками, образуют стойкие комплексы, которые можно обнаружить в люминесцентном микроскопе: они оранжево-красного или коричнево-красного цвета.
Электронная микроскопия
В микробиологии электронную микроскопию используют для изучения ультраструктуры бактерий, грибов, простейших, а также для изучения вирусов.
Виды электронной микроскопии
• Трансмиссивная - при которой изображение получают благодаря прохождению электронов через образец.
• Сканирующая (растровая) - при которой пучок электронов быстро сканирует поверхность объекта и вызывает излучение, которое формирует изображение на светящемся экране микроскопа. Источником света является источник электронов, источником электронов - электронная лампа. Электроны, проходящие через объект за счет его разной толщины и электронной плотности, отклоняются под разными углами и попадают в объектив, где формируется первое полезное увеличение объекта. Линза объектива дает промежуточное увеличение изображения. Проекционная линза позволяет увеличить изображение во много раз. Это увеличенное изображение попадает на флюоресцирующий экран, и его можно фотографировать.