ЗАНЯТИЕ 1.3.5
СИСТЕМА АНТИГЕН-АНТИТЕЛО В ДИАГНОСТИКЕ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ (ПРОДОЛЖЕНИЕ)
Цель: изучить механизмы взаимодействия АГ-АТ, принципы и методы постановки РСК, РИФ, ИФА.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:
- РСК. Механизм, компоненты, применение.
- РИФ. Механизм, компоненты, применение.
- ИФА, иммуноблоттинг. Механизм, компоненты, применение.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:
· интерпретировать результаты серологических исследований.
СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ВЛАДЕТЬ:
методами постановки и оценки результатов серологических реакций
Работа № 1. Реакция связывания комплемента (РСК)
Цель: разобрать механизм, освоить различные методы постановки РСК в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций.
Самостоятельная работа. Учесть результат РСК, поставленной с целью идентификации возбудителя.
Направление:
Ингредиенты:
I. Опытная система:
1)
2)
3)
4)
Через 30 минут:
I.I Индикаторная система:
1)
2)
Механизм:
Постановка:
Ингредиенты | Опыт | КАТ | КАГ | КС | Индикаторная система - ГС |
АГ | |||||
АТ | |||||
С | |||||
Физ. раствор | |||||
ЭР (АГ) | |||||
ГС (АТ) |
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Самостоятельная работа. Оценить результат РСК, с целью выявления комплементсвязывающих АТ в парных сыворотках больного.
|
Направление:
Ингредиенты:
I. Опытная система:
1)
2)
3)
4)
Через 30 минут:
II. Индикаторная система:
1)
2)
Механизм (см. схему выше):
Постановка:
I неделя
II неделя
1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 КС КД КГС
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Работа № 2. Реакция иммунной флюоресценции (РИФ)
Цель: разобрать механизм, освоить различные методы постановки РИФ в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций.
Самостоятельная работа. Прямой метод постановки РИФ. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
Механизм:
Постановка:
Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Самостоятельная работа. Непрямой метод постановки РИФ. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
4)
Механизм:
Постановка:
Результат:_______________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
|
Работа № 3. Иммуноферментный анализ (ИФА)
Цель: разобрать механизм, освоить различные методы постановки ИФА в зависимости от цели исследования, интерпретировать результаты реакций.
Самостоятельная работа. Прямой метод постановки ИФА. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
4)
5)
Механизм:
Постановка:
«О» «КН» «КП»
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Самостоятельная работа. Непрямой метод постановки ИФА. Разобрать реакцию в соответствии с предложенной схемой.
Направление:
Ингредиенты:
1)
2)
3)
4)
5)
Механизм:
Постановка:
I неделя
II неделя
1/14 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 «КН» «КП»
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Вывод:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Подпись преподавателя ________________________________________________________
Самостоятельная работа во внеурочное время:
Решить задачи:
I. В клинику поступил пациент с предполагаемым диагнозом «Хроническая гонорея». Для подтверждения диагноза проведено серологическое исследование путем постановки РСК. Титр первой недели 1/128, второй – 1/128. Изучите механизм РСК, запишите ингредиенты. Сделайте вывод о предполагаемом диагнозе.
|
Ингредиенты для постановки РСК:
1.___________________________________________________________________________
2.___________________________________________________________________________
3.___________________________________________________________________________
4.___________________________________________________________________________
5.___________________________________________________________________________
6.___________________________________________________________________________
Результатом первой фазы РСК является_____________________________________________________________________
Результатом второй фазы РСК является_____________________________________________________________________
Феномен реакции _____________________________________________________________
Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
II. У пациента с подозрением на сибирскую язву взято на исследование отделяемое карбункула. Проведена прямая РИФ. При люминесцентной микроскопии наблюдается свечение. Изучите механизм прРИФ, запишите ингредиенты. Сделайте вывод о предполагаемом диагнозе.
Ингредиенты для постановки прямой РИФ:
1.___________________________________________________________________________
2.___________________________________________________________________________
3.___________________________________________________________________________
Иммунные сыворотки в РИФ обрабатываются______________________________________________________________
Феномен реакции_____________________________________________________________
Вывод_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
III. В анонимный кабинет обратился гражданин Я. С просьбой проверить его на инфицирование ВИЧ. Проведено серологическое исследование с применением ИФА. Обнаружены антигены вируса gp 120 и gp41.. Изучите механизм ИФА, запишите ингредиенты. Сделайте вывод о предполагаемом диагнозе.
Иммуноферментный анализ основан на:
______________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ингредиенты для постановки ИФА:
1.___________________________________________________________________________
2.___________________________________________________________________________
3.___________________________________________________________________________
4.___________________________________________________________________________
Феномен реакции_____________________________________________________________
Вывод:_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Подпись преподавателя ________________________________________________________
Теоретическая справка
Реакции иммунного лизиса
Антитела могут вызывать лизис, т.е. растворение клеток, только при участии комплемента (С). Следовательно, все реакции с участием С называются реакциями иммунного лизиса. К ним относят: РСК, р. гемолиза, р. бактериолиза.
Для реакции необходимы:
1. Антиген - микробы, эритроциты и другие клетки.
2. Антитела (лизины) - иммунная сыворотка, реже сыворотка больного. Бактериологическая сыворотка содержит антитела, лизирующие бактерии, гемолитическая - гемолизины, способствующие лизису эритроцитов, лизис спирохет вызывают спирохетолизины, клеток - цитолизины и т. д. Титр гемолитической сыворотки - ее наибольшее разведение, при котором происходит полный гемолиз 3% взвеси эритроцитов барана в присутствии комплемента 1:10.
3. Комплемент - неспецифический белок, содержащийся в сыворотке
человека и теплокровных животных. Больше всего комплемента в сыворотке морских свинок.
Эту сыворотку (смесь от нескольких животных) обычно используют в качестве комплемента. Свежий (нативный) комплемент нестоек и легко разрушается при нагревании, встряхивании, хранении, поэтому пользоваться им можно не позже 1-2-го дня после получения. Консервированный комплемент (на 10 мл сыворотки 0,2 г борной кислоты и 0,3 г сульфата натрия) сохраняется при 4°С до 2 недель. Чаще применяют сухой комплемент. Перед употреблением его растворяют изотоническим раствором хлорида натрия до первоначального объема, указанного на этикетке.
4. Изотонический раствор хлорида натрия.
К работе № 1