Лабораторная работа «Обездвиживание лягушки и приготовление нервно-мышечного препарата»
Чтобы провести на лягушке острый опыт, ее необходимо, прежде всего, обездвижить. Это достигается при помощи наркотических веществ или разрушением центральной нервной системы (ЦНС).
1 способ. Лягушку берут за спинку большим и указательным пальцами правой руки. Заворачивают ее в бинт, оставляя лишь открытой голову. При этом передние лапки нужно плотно прибинтовать к туловищу, а задние спеленать в вытянутом состоянии. Вводят лягушке в рот браншу ножниц и отсекают верхнюю челюсть с черепной коробкой (разрез должен пройти позади глаз). В открытый спинномозговой канал вводят зонд и разрушают мозг. Этот способ прост в исполнении, но весьма травматичен, т.к. вызывает значительную кровопотерю.
2 способ. Описанный ниже способ предпочтительнее тем, что вызывает небольшую кровопотерю, но он требует более сложных манипуляций экспериментатора.
 |
Рис. 1. Обездвиживание лягушки путем разрушения центральной нервной системы
Лягушку берут в левую руку и указательным пальцем нагибают ей голову, как указано на рисунке 1. Концом зонда проводят по средней линии головы сверху вниз. Пройдя по затылочной кости, зонд соскальзывает в ямку. В этом месте под кожей расположена атланто-окципитальная мембрана. Зонд устанавливают перпендикулярно поверхности тела лягушки. Прокалывают кожу и мембрану. Прокол должен быть неглубоким – 2-3 мм и, как правило, сопровождается щелчком. Затем, поверну зонд острием кверху, вводят его через затылочное отверстие в полость черепа и вращательными движениями разрушают головной мозг. После этого вводят зонд в спинномозговой канал и разрушают спинной мозг. Индикатором разрушения спинного мозга является резкое кратковременное повышение тонуса мышц разгибателей нижних конечностей.
Приготовление нервно-мышечного препарата.
Классический нервно-мышечный препарат – икроножная мышца лягушки и седалищный нерв, который ее иннервирует, часто используют для изучения физиологических свойств мышц и нервов. Такой препарат можно приготовить из задних лапок лягушки.
Обездвижив лягушку, одним из способов, описанных в работе «Обездвиживание лягушки», ножницами перерезают туловище примерно посередине позвоночника и отделяют верхнюю половину тела (А). Разрез должен пройти на расстоянии около 1-1.5 см выше копчиковой кости так, чтобы в сочленении с тазовыми костями осталось не менее двух позвонков. Удаляют остатки внутренностей при помощи пинцета и ножниц. Захватив одной рукой через салфетку или с помощью пинцета остаток позвоночника, а другой – край кожи со спины, быстрым движением снимают кожу с обеих лапок (Б) – получают препарат двух задних лапок лягушки (В). После этого следует вымыть руки, смыть слизь с препаровальной дощечки и инструментов (выделения кожи лягушки обладают токсичным для нерва действием).
Далее готовят препарат одной лапки. Для этого, держа препарат так, чтобы лапки висели вниз под прямым углом к позвоночнику, ножницами осторожно вырезают уростиль, который при таком положении выдается кверху (Г). Затем, стараясь не задеть нервных стволиков крестцового сплетения, выполняют разрез по средней линии (Д) с тем, чтобы отделить лапки друг от друга (Е).
Для препаровки икроножной мышцы, под ахиллово сухожилие подводят браншу ножниц, отделяют сухожилие по всей длине и подрезают ниже сесамовидной косточки. Захватив сухожилие пинцетом, оттягивают мышцу в сторону, разрывая фасции, связывающие ее с другими тканями.
Чтобы отпрепарировать нерв, бедро располагают задней поверхностью кверху. Двумя стеклянными крючками разводят мышцы и препарируют лежащий в глубине седалищный нерв по всей его длине. Приподняв нерв, подрезают ножницами его боковые веточки (Ж). Нерв должен быть отпрепарирован от коленного сустава до позвоночника. На конце нерва рекомендуется сохранять небольшой участок позвоночника – за него удобно брать пинцетом, помещая нерв на электроды (З). Кроме того, отсечение позвоночника наносит дополнительную травму.
Перерезают берцовую кость ниже коленного сустава (И) и бедренную кость выше него (К). Получают нервно-мышечный препарат икроножной мышцы и седалищного нерва (Л). До начала работы его помещают в ванночку с раствором Рингера.
Оформление работы. Укажите названия элементов нервно-мышечного препарата, обозначенные на рисунке цифрами.
 |
1. _____________________________________________________
2. _____________________________________________________
3. _____________________________________________________
4. _____________________________________________________
5. _____________________________________________________