Масса муки (m)……………………………………..г
Величина оптической плотности (D)
Содержание белка в навеске муки
(по калибровочной кривой)(n/1000)………………г
Массовая доля белка в муке (M1)………………….. %
Массовая доля белка в 100 г сухих веществ(М)..%
Заключение
Построение калибровочной кривой - для построения калибровочной кривой подбирают образцы муки с различной массовой долей белка в диапазоне, встречающемся в реальных условиях (от 8 до 20%). Интервал в содержании белка образцов должен находиться в пределах не более 1%. Количество образцов не должно быть менее 10. С увеличением их числа точность определений возрастает.
Затем приведенным выше методом Дженнингса определяют оптическую плотность белковых вытяжек всех образцов.
При построении кривой на оси абсцисс откладывают величины оптической плотности, а на оси ординат - содержание белка в навеске в мг.
Рис.1 Калибровочная кривая (биуретовый метод).
ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ ДОЛИ БЕЛКА
НЕФЕЛОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
Метод основан на измерении интенсивности светового потока, рассеянного твердыми или коллоидными частицами, находящимися в растворе во взвешенном состоянии. По интенсивности светорассеяния, определяемой нефелометром, судят о концентрации исследуемого вещества.
В настоящее время находят широкое использование фотоэлектрические нефелометры.
Растворы высокомолекулярных соединений, например растворы белков, способны при определенных условиях в присутствии некоторых химических реагентов опалесцировать. Одним из таких реагентов является сульфосалициловая кислота. Концентрация белка в этом случае может быть определена по интенсивности опалесценции.
Продукты гидролиза белка—пептоны, аминокислоты и другие азотсодержащие вещества — не опалесцируют.
Экспериментальной проверкой установлено, что нефелометрический метод с использованием сульфосалициловой кислоты отличается быстротой, высокой точностью, простотой и хорошей корреляцией с методом Кьельдаля.
ТЕХНИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ
Около 0,5 г исследуемой муки взвешивают с погрешностью ±0,001 и помещают в коническую колбу вместимостью 250—300 ом3, снабженную пробкой. В колбу добавляют из бюретки 50 см 0,05 н. раствора гидроксида натрия. Закрытую пробкой колбу встряхивают на механическом встряхивателе в течение 15 мин. Затем вытяжку центрифугируют 10 мин при частоте вращения 6000 мин-1. 5 см3 прозрачного центрифуга-та пипеткой переносят в мерную колбу на 50 см3 и содержимое колбы доводят до метки сульфосалициловой кислотой.
При нефелометрическом анализе получение правильных результатов в значительной мере зависит от методики получения суспензии, в частности от порядка смешивания растворов, скорости смешивания. Поэтому после добавления сульфосалициловой кислоты колбу быстро переворачивают 2—3 раза (не более), раствор наливают в кювету с толщиной слоя 5 мм и измеряют величину оптической плотности раствора при длине волны 550нм. Замеры следует производить сразу после добавления кислоты, так как частицы белка быстро агрегируют.
Массовую долю белка определяют по калибровочной кривой (рис.2). Построение ее ведут так же, как и при биуретовом методе.
Запись в лабораторном журнале аналогична записи, данной к биуретовому методу. По полученным данным делают заключение.
Рис. 2. Калибровочная кривая (нефелометрический метод).