Лабораторная работа. Диагностика. Профилактика и меры борьбы с болезнью Марека
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
Направление подготовки (специальность)
36.05.01 Ветеринария
для студентов факультета биотехнологий и ветеринарной медицины
УФА 2018
УДК 619: 616.9 ББК 48 Э 71
Рассмотрена и одобрена на заседании методической комиссии факультета биотехнологии и ветеринарной медицины от 29 марта 2018 г. (протокол № 9)
Составители:
профессор кафедры инфекционных
болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы,
д-р. ветеринар. наук А.И. Иванов
Рецензент:
зав. кафедры морфологии,
патологии, фармации и незаразных болезней,
д-р. ветеринар. наук, профессор Е.Н. Сковородин
Ответственный за выпуск:
зав. кафедрой инфекционных
болезней, зоогигиены и ветсанэкспертизы
др. биол. наук, профессор А.В. Андреева
г. Уфа, БГАУ, кафедра инфекционных болезней,
зоогигиены и ветсанэкспертизы
Диагностика. Профилактика и меры борьбы с болезнью Марека
Цель работы
Изучить методы диагностики болезни Марека и систему профилактических и оздоровительных мероприятий.
Материалы и оборудование
Биопрепараты, ветеринарное законодательство, таблицы, плакаты, наставления, инструкции.
Задание
1) Разработать схему дифференциальной диагностики.
2) Изучить инструкцию о мероприятиях по борьбе с болезнью Марека.
3) Составить комплексный план оздоровления хозяйства от болезни Марека.
ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ
Болезнь Марека (лат. - Morbus Marek; англ. - Mareks Disease; нейро-лимфатоз птиц, паралич птиц, инфекционный нейролимфатоз птиц, энзоотический нейроэнцефаломиелит птиц, БМ) - высококонтагиозная болезнь кур и индеек, проявляющаяся в двух формах: невропатической с поражением периферической и центральной нервной системы (классическая форма); иридоциклитом (изменение цвета радужной оболочки глаза), а также формированием неопластических опухолей во внутренних органах (острая форма).
Заболевание встречается во всех странах, в том числе и в России. Несмотря на 100%-ную вакцинацию птицы, в птицеводческих хозяйствах отмечаются вспышки болезни. В птицеводческих хозяйствах России болезнь Марека занимает одно из первых мест среди инфекционных заболеваний. Возбудитель относится к семейству Herpesviridae, роду Herpesvirus группы В. Вирус болезни Марека может быть клеточно-связанным и свободным от клеток. Вирусные частицы обнаруживают в ядрах клеток. Антигенная структура вируса сложная. В его основе выделено шесть антигенов, из которых А, В и С считаются наиболее важными. Антиген А содержится как в
надосадочной жидкости инфицированной культуры клеток, так и в экстракте зараженных клеток. Антигены В и С связаны с зараженными клетками и обнаруживаются только в экстракте инфицированных клеток. Антиген В является общим для вируса болезни Марека и вируса герпеса индеек, в то время как антигены этих вирусов родственны, но не идентичны. Антигены А и В представляют собой гликопротеиды. По современной классификации группу вируса болезни Марека подразделяют на три серотипа. К серотипу 1 относят все патогенные вирусы, способные вызывать у цыплят опухолевые поражения. Штаммы серотипа 2 не вызывают опухолевых изменений у цыплят, так как, вероятно, они природно ослаблены. Их используют для приготовления вакцин. Серотип 3 представлен вирусом герпеса индеек.
В пере больной птицы и в пыли, взятой из птичника, неблагополучного по заболеванию, вирус остается жизнеспособным при 37 °С в течение 190 дней, при комантной температуре и температуре бытового холодильника — 316 дней. В пыли, хранившейся при температуре от —12 до 37 °С, вирус сохраняет активность до 459 дней, в перьевых фолликулах — до 445 дней. При воздействии 3%-ного раствора гидроксида натрия, креолина, лизола, 1%-ного
раствора формальдегида, осветленной хлорной извести, содержащей 3 % активного хлора, и других дезинфицирующих средств вирус инактивируется за 20 мин.
ДИАГНОСТИКА
Диагноз ставят на основании анализа эпизоотологической обстановки, клинических признаков, данных патологоанатомического вскрытия, обнаружения гистологических изменений, а также исследований по выявлению специфических антигенов и антител в патматериале от больной птицы.
Эпизоотологические данные. В естественных условиях к болезни Марека наиболее чувствительны куры. Могут заражаться индейки, фазаны, лебеди, щеглы, горлицы, которые служат резервуаром вируса и принимают участие в распространении болезни. Установлено носительство возбудителя среди ворон, скворцов, ласточек. Болезнь Марека относится к числу высококонтагиозных инфекций, но протяженность и степень развития патологического процесса зависят от возраста, пола, генетической предрасположенности, принадлежности птицы к определенным линиям и семействам, состояния пассивного иммунитета, вирулентности штамма, дозы вируса и способа заражения. Наиболее чувствительны к естественному заражению цыплята в возрасте 1...14 сут. Поголовное инфицирование у них может наступить к 8-не-дельному возрасту. Возрастную устойчивость птицы связывают со способностью формирования гуморального иммунитета. Наиболее отчетливо болезнь проявляется у кур в возрасте 60... 120 дней. В вакцинированных стадах клинические проявления болезни могут быть иными, и так называемые поствакцинальные вспышки отмечают у кур в возрасте 5...6 мес и старше. Это, очевидно, обусловлено снижением поствакцинального иммунитета и широким носительством. Источником возбудителя инфекции служат больная птица и вирусоносители в течение 16...24 мес после переболевания, но, возможно, и пожизненно. Вирус в основном передается с частичками пыли, в которой взвешены эпителиальные клетки перьевых фолликулов, содержащие вирус. Возбудитель может передаваться также с продуктами убоя больных птиц. Важное значение в распространении вируса имеют яйца, поверхность которых контаминирована. Болезнь Марека может возникать в любое время года и нередко протекает совместно с другими инфекционными и инвазионными болезнями: аденовирусной инфекцией, микоплазмозом, эшерихиозом, стафилокок-козом, аспергиллезом, кокцидиозом. При остром течении существует тенденция к проявлению болезни в виде эпизоотии. Быстрому распространению и росту заболеваемости цыплят способствуют такие факторы, как значительная концентрация птицы и содержание на одной производственной территории разновозрастного поголовья. При отсутствии эффективных мер борьбы БМ приобретает стационарный характер, вызывая высокую заболеваемость (до 25 %), смертность (до 23 %) и летальность (до 94 %) птицы. Смертность бывает выше среди птиц, содержащихся в клетках.
Течение и клиническое проявление. Болезнь Марека поражает цыплят в возрасте от 6 нед, но чаще от 12 до 24 нед. Инкубационный период длится от 13 до 150 дней и даже более. Чем выше генетический потенциал породы и моложе птица, тем большая предрасположенность у нее к вирусу и короче инкубационный период. Смертность колеблется от единичных случаев до 70...80 %. БМ протекает в классической и острой формах. Первая характеризуется поражением нервов и развитием параличей, вторая -образованием множественных лимфоидных опухолей в висцеральных органах. При классической форме поражается небольшой процент стада (до 10 %), а при острой - 20...30 %. Различают также три клинические формы болезни: 1) невральную с поражением периферической нервной системы; 2) окулярную, протекающую с изменением цвета радужной оболочки и просвета зрачка; 3) висцеральную, характеризующуюся образованием опухолей в паренхиматозных органах.
Классическая форма протекает подостро и хронически. Инкубационный период болезни длится от 2...3 до бмес. Болезнь характеризуется поражением периферической и центральной нервной системы, практически может поражаться любой нерв, поэтому и симптомы могут быть разнообразными: хромота, парезы, атаксия, параличи одной или двух конечностей, крыльев, шеи и хвоста. При быстром беге куры высоко поднимают ноги, у некоторых отмечается скованная походка. Постепенно с развитием болезни усиливается хромота. Парезы могут быть спастическими или вялыми. При спастическом парезе пальцы пораженной конечности загнуты внутрь. Передвигаясь, птица опирается на скрученные пальцы или на голеностопные суставы. При двустороннем параличе в тяжелых случаях течения болезни цыплята принимают позу пингвина, ложатся на грудь или принимают боковое положение, вытягивая одну ногу вперед, а другую отводя назад или в сторону.
Больная птица погибает в 3...5-месячном возрасте от истощения, отход птицы в
неблагополучном стаде колеблется от единичных случаев до 25...30 % к числу вскрытых трупов и чаще составляет 2...5 % общего числа птицы в стаде. Иногда у отдельных особей регистрируют проходящие параличи, оканчивающиеся выздоровлением, но в возрасте 5... 16 мес у них могут отмечаться иридоциклиты. Поражение глаз проявляется изменением радужной оболочки и формы зрачка. Вокруг зрачка появляются беловато-серые пятна или концентрические участки разной формы и величины, которые сливаются между собой и распространяются по всей радужной оболочке, в результате чего возникает сероглазие. Зрачок деформируется: он становится звездчатым, многоугольным, грушевидным или ще-левидным, постепенно уменьшается до размеров макового зерна, а нередко и полностью зарастает. В результате этого наблюдается полная или частичная слепота. Смертность при поражении глаз наблюдается редко, при присоединении нервных явлений она составляет 2...5 %. Острая форма болезни Марека характеризуется коротким инкубационным периодом - от нескольких недель до 2...3 мес. Клинические признаки при этой форме болезни часто неспецифические: угнетение, анемия, иногда затрудненное дыхание и кашель, расстройство пищеварения, истощение, отказ от корма, дегидратация и др. Появление их вызвано образованием во внутренних органах опухолей, приводящих к общему нарушению состояния организма птицы. При некоторых вспышках преобладают поражения кожи.
Патологоанатомические признаки. При классической форме на вскрытии обнаруживают диффузное или очаговое утолщение поясничного и плечевого нервных сплетений и стволов нервов. В половых железах, легких, сердце, почках иногда выявляются опухолевидные разрастания. При болезни Марека сохраняется способность дифференциации у клеток лимфоидного роста, что является ее принципиальным отличительным признаком от лимфоидного лейкоза. Отмечается инфильтрация нервных сплетений и стволов, а также пораженных органов лимфоидными клетками разной зрелости, псевдоэозинофилами, плазматическими клетками и гистиоцитами. При хроническом течении классической формы болезни отмечают атрофические изменения мускулатуры пораженных конечностей, миокарда; катаральное воспаление желудочно-кишечного тракта. Наиболее характерный признак при этом течении —поражение глаз. Нормальная радужная оболочка у цыплят серо-голубая, а к 4 мес она приобретает оранжевую окраску. При болезни Марека радужка становится серой с участками желто-коричневого, иногда зеленого цвета. Часто обнаруживают сращение радужной оболочки с хрусталиком или роговицей. Форма зрачка при этом изменена. Закономерно наблюдается отек зрительного нерва. На вскрытии трупов птицы, павшей при острой форме болезни, обнаруживают опухоли в половых железах, легких, почках, сердце, печени, железистом желудке, селезенке; реже поражаются брыжейка, поджелудочная железа, кишечник, скелетная мускулатура, кожа, фабрициева сумка. Поражение нервов визуально выявляется крайне редко. Гистологически опухолевидные разрастания представлены полиморфными клетками — лимфоидными, плазматическими и гистиоцитами. Преобладают мелкие лимфоидные клетки с компактным ядром и узкой полоской.
Для установления окончательного диагноза в лабораторию посылают 5... 10 клинически больных цыплят, у которых берут кровь, а при вскрытии — патологический материал: кусочки пораженных органов, нервов, кожи. Кроме того, у каждой птицы с наружной поверхности бедра выщипывают по 10... 15 перьев с наличием производящей ткани (эпителия перьевых фолликулов) внутри очина вирусологические исследования включают:
а) биопробу на цыплятах. Заражают суточных цыплят, свободных от антител, подкожно или внутримышечно суспензией патматериала, содержащего вирус. Результаты оценивают на 3-й неделе по наличию вирусоспецифического антигена в коже;
б) биопробу на куриных эмбрионах. В первом варианте заражают 11 — 12-дневные эмбрионы на хорион-аллантоисную оболочку. При наличии вируса развиваются пустулы и очаги пролиферации. При втором варианте заражают 4-дневных эмбрионов в желточный мешок. Через 12—14 дней на хорион-аллантоисной оболочке появляются пустулы. Проба на эмбрионах чувствительна при отсутствии трансовариальных иммунтел;
в) пробу в культуре клеток — почки куриных эмбрионов или фибробласты утиных или куриных эмбрионов. Вирус приводит к характерному ЦПД;
г) метод флюоресцирующих антител (МФА) для экспресс-диагностики, позволяющий обнаружить возбудителя в первичном патологоанатомическом материале.
Из серологических методов используют РДП — для выявления в перьевых фолликулах специфического антигена — преципитиногена типа А. Для ретроспективной диагностики следует применять гомологический антиген. РНГА используют для обнаружения специфических антител, наивысший титр которых 1:128 — 1:1024 достигал к 10—13-й неделе.
Дифференциальный диагноз. Исключают лейкоз, гиповитаминозы В и Е, вирусный энцефаломиелит.
Иммунитет, специфическая профилактика. Процесс развития инфекции и уровень противоопухолевой защиты зависят от устойчивости Т-клеток. Выявлена также защитная роль естественных киллеров и макрофагов. Кроме того, в формировании иммунитета принимают участие интерферон и антитела, хотя наличие последних не препятствует вирусемии и проявлению клинических признаков. В настоящее время рекомендуются вакцинация против БМ в суточном возрасте и ревакцинация в возрасте между 14-м и 21-м днем. Принимаемый на выращивание молодняк вакцинируют против болезни Марека в суточном возрасте, однократно, непосредственно в инкубатории. Привитую птицу содержат изолированно от птиц других возрастных групп. Иммунитет у привитых цыплят вырабатывается на 21...28-й день. Вакцинацию птицы проводят одной из перечисленных ниже вакцин: 1) жидкой культуральной вирус-вакциной из штамма ФС-126 вируса герпеса индеек; 2) сухой культуральной вирус-вакциной из штамма ФС-126 вируса герпеса индеек; 3) жидкой культуральной бивалентной вирус-вакциной против болезни Марека из апатогенного
штамма ВНИВИП вируса болезни Марека и авирулентного штамма ФС-126 вируса герпеса индеек; 4) сухой вирус-вакциной из штамма ВНИИЗЖ для вакцинации бройлеров;
5) жидкой культуральной вирус-вакциной из штамма 3004 (серотип 1) для вакцинации по альтернативной схеме.
Кроме вакцин отечественного производства широко используются зарубежные «TAD Марек», «Керамвак» и др.
МЕРЫПРОФИЛАКТИКИ И БОРЬБЫ
При подозрении на болезнь Марека ветеринарный врач принимает меры к уточнению диагноза. С этой целью направляет на исследование в ветеринарную лабораторию свежие трупы или больных птиц (5 - 10 голов).
При установлении диагноза на болезнь Марека в птицехозяйстве вводят ограничения, по условиям которого проводят комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий по ликвидации болезни с учетом характера течения заболевания.
При эпизоотической вспышке болезни Марека (массовая заболеваемость птиц и тенденция к распространению):
а) запрещают реализацию инкубационных яиц и живой птицы;
б) прекращают инкубацию и прием на выращивание молодняка птицы;
в) всю птицу неблагополучных птичников, цехов, ферм убивают на птицебойне хозяйства или на предприятиях мясоперерабатывающей промышленности;
г) проводят тщательную очистку и дезинфекцию инкубатория, птичников, подсобных помещений, оборудования, инвентаря, прилегающей территории.
Прием цыплят на выращивание допускается через месяц после завершения санации хозяйства.
Принимаемый на выращивание молодняк вакцинируют против болезни Марека в суточном возрасте (в соответствии с действующим наставлением по применению вакцины).
Ограничения с хозяйства снимают при отсутствии заболевания болезнью Марека птицемолодняка, выращенного в этом хозяйстве до 6-месячного возраста.
При установлении единичных случаев болезни Марека и отсутствии тенденции ее к распространению в хозяйстве проводят систематическую выбраковку и убой всей больной и подозреваемой в заболевании птицы, осуществляют комплекс общесанитарных и ветеринарных мер по ликвидации и предупреждению распространения заболевания.
Если заболевание не проявляет тенденций к широкому распространению, из таких хозяйств разрешают реализацию инкубационных яиц после их дезинфекции парами формальдегида, а также реализацию суточного молодняка, вакцинированного против болезни Марека, в хозяйства с аналогичной эпизоотической ситуацией по болезни Марека.
Ограничения с хозяйства снимают при отсутствии заболевания птицы болезнью Марека.
В неблагополучных хозяйствах текущую и заключительную дезинфекцию птичников, инкубатория, оборудования, инвентаря, производственной территории, средств транспорта и других объектов проводят, как и при оспе птиц, в соответствии с действующей инструкцией по проведению ветеринарной дезинфекции, дезинвазии, дезинсекции и дератизации.
Помет и подстилку подвергают биотермическому обезвреживанию.
Яйца, полученные от кур неблагополучных хозяйств, дезинфицируют парами формальдегида в порядке, установленном действующими правилами, по следующей схеме:
а) инкубационные яйца: четыре раза - первый раз не позднее 1 1/3 часов после снесения, второй - перед закладкой в инкубаторы, третий - после 6 часов прогрева в инкубаторах и четвертый раз - в выводных шкафах, сразу после переноса яиц;
б) пищевые яйца - один раз перед отправкой в торговую сеть.
При убое птиц из птичников, неблагополучных по болезни Марека, проводят полное потрошение тушек, все внутренние органы утилизируют, а тушки выпускают в сеть общественного питания или используют для изготовления вареных колбас или консервов. При наличии опухолей в коже или мышцах тушки направляют на техническую утилизацию.
Пух, перо, полученные при убое больной или подозрительной по заболеванию птицы, дезинфицируют.
ВОПРОСЫДЛЯ САМОКОНТРОЛЯ
1. Назовите источник и факторы передачи возбудителя инфекции.
2. Перечислите основные эпизоотологические данные болезни.
3. Почему необходимо вакцинировать цыплят в суточном возрасте?
4. В чем заключается дифференциальная диагностика болезни Марека от лейкоза?
5. Охарактеризуйте основные мероприятия по ликвидации болезни: схему оздоровительных мероприятий, выбор вакцин, условия ограничений