Алгоритм БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛА

Методические рекомендации к практическому занятию №12

По теме: «Семейство кишечных бактерий (эшерихии, сальмонеллы)».

План занятия

1.Закрепить знания по изучению морфологии, биологии и резистентности эшерихий, сальмонелл, методов лабораторной диагностики и профилактики заболеваний, вызываемых ими.

2. Изучить правила взятия, направления, регистрации и доставки материала в бактериологическую лабораторию при кишечных инфекциях.

3. Овладеть методикой и техникой проведения первого этапа микробиологического исследования испражнений с целью выделения энтеробактерий.

4. Изучить средства специфической профилактики и терапии заболеваний, вызванных эшерихиями, сальмонеллами.

Самостоятельная работа

Задание 1

Изучите морфологические и тинкториальные свойства эшерихий, сальмонелл путем микроскопии готовых препаратов и по таблице, зарисуйте, подпишите.

 

1. 2.

1.

2.

Задание 2

Изучите правила забора кала и направления его на бактериологическое исследование (работают в перчатках).

Показания:

o острые кишечные инфекции (или подозрение);

o у детей до 2-х лет при поступлении в стационар;

o у контактных с больными кишечными инфекциями;

o бактерионосительство.

Методика:

· стеклографом на пробирке поставить номер, соответствующий номеру в направлении;

· извлекают из пробирки стерильный тампон, смачивают тампон (30% глицерина + 70% ИХН) избыток его отмачивают о стенку пробирку.

· вращательными движениями вводят в прямую кишку тампон обследуемому, который лежит на левом боку с приведенными к животу ногами на кушетке;

· извлекают тампон, помещают в сухую стерильную пробирку, не касаясь ее краев;

· до отправления ее в лабораторию пробирки помещают на два часа в холодильник.

Кроме того испражнения собирают сразу после дефекации из судна, горшка, специального лотка или с помощью стеклянной палочки, проволочной петли, деревянного шпателя. При наличии в испражнениях патологических примесей (слизь, кровь, гной) их следует включить в отбираемую пробу. Испражнения, не помещенные в консервант, суспензируют в стерильном ИХН в соотношении 1:5 или 1:10 и засевают не позднее 2-х часов после взятия. Материал помещают в консервант сохраняют до начала исследования при температуре 4-6⁰С в холодильнике.

Задание 3

1. Изучите правила направления, приема и регистрации материала, поступающего для исследования в бак. лабораторию (см. Приложение №2).

2. Изучите правила взятия и доставки материала при кишечных инфекциях (см. Приложение №1).

Задание 4

Проведите первый этап бактериологического исследования нативного материала (испражнений) с целью выделения энтеробактерий.

Методика:

· каплю посевного материала с помощью бактериологической петли (стеклянной палочки, трубочки, пипетки) наносят на поверхность одной из пластинчатых сред в чашке Петри, отступая 1,5- 2 см от края чашки;

· Посев производят шпателем, втирая материал по всей поверхности питательной среды по общепринятой методике;

· Внимание! При исследовании испражнений материал от одного обследуемого засевают на чашки Петри со следующими средами.

С целью выделения эшерихий (37⁰С, 18-20 часов).

- Эндо;

- Левина.

С целью выделения шигелл (37⁰С, 18-20 часов).

- Плоскирева с антибиотиками;

- Плоскирева без антибиотиков.

С целью выделения сальмонелл (37⁰С, 18-20 часов).

- ВСА;

- СПА.

· Одну петлю исследуемого материала засевают в пробирку с селенитовым бульоном (среда накопления для шигелл и сальмонелл 37⁰С, не более 18часов.

Задание 5

Заполните таблицу, указав средства специфической профилактики и терапии эшерихиозов, брюшного тифа, паратифов А иВ.

 

Заболевания	Средства специфической профилактики	Средства специфической терапии
Эшерихиозы
Сальмонеллезы брюшного тифа, паратифов А иВ.

 

Алгоритм БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛА

ПРИ ВЫДЕЛЕНИИ ЭПЭ

I этап

1. Из материала делают мазок, окрашивают по Граму, микроскопируют и дают предварительный ответ.
2. Материал от одного обследуемого засевают на 6 чашек Петри со средами: Эндо и Левина - для выделения ЭПЭ; Плоскирёва с антибиотиком и Плоскирёва без антибиотика - для выделения шигелл; ВСА - для выделения сальмонелл; СПА - для выделения иерсиний. Все посевы инкубируют при 37°С в течение 24 час, кроме чашки с ВСА, которую инкубируют в течение 48 час.
3. Материал засевают в селенитовый бульон и инкубируют при 37°С 14-16 час.
4. С материалом проводят фагодиагностику (с чумным, брюшнотифозным, сальмонеллёзным, поливалентным шигеллёзным бактериофагами), т.е. ускоренный метод идентификации, позволяющий дать предварительный ответ, но не исключающий проведение бактериологического исследования.

II этап

1. На чашке Петри со средой Эндо (Левина) отбирают 10 изолированных типичных в отношении ЭПЭ колоний.
2. 1/3 каждой колонии проверяют на принадлежность к E. coli. с помощью РА на стекле с поливалентной эшерихиозной ОКА-сывороткой.
3. Вторую треть той же колонии пересевают на одну из сред первичной идентификации:Клиглера или Ресселя или Олькеницкого с целью определения родовой принадлежности культуры и инкубируют при 37°С 24 час.
4. Оставшуюся (третью) часть этой же колонии пересевают на скошенный СПА с целью выделения и накопления чистой культуры и её серологической идентификации и инкубируют при 37°C 24 часа.

III этап

1. Проводят первичную идентификацию культуры (определяют её родовую принадлежность) по характеру роста на среде Клиглера (Ресселя, Олькеницкого)
2. Делают посев чистой культуры на среды Гисса и СПБ с двумя индикаторными бумажками (на индол и сероводород) и инкубируют при 37°С 24 час.
3. Посев на среду Симмонса и инкубируют при 37°С 24 час.
4. Посев в столбик полужидкого агара и инкубируют при 37°С 24 час.
5. Проба на оксидазу.

РS. Первые 5 тестов относятся к тестам минимального дифференциального ряда энтеробактерий.

1. Ставят РА на стекле с поливалентными эшерихиозными ОКА, ОКВ, ОКС, ОКЛ, СКЕ сыворотками (подтверждают принадлежность к роду и определяют количество сывороток для определения серовара ЭПЭ).
2. Ставят РА на стекле с живой культурой и ОК-иммуноглобулинами для определения К-антигена и РА на стекле с гретой культурой (при 100° 30 мин на водяной бане) и групповыми и факторными О - сыворотками для определения О - антигена ЭПЭ.
3. Если нет ОК - иммуноглобулинов и групповых и факторных 0-сывороток, можно определить серовар ЭПЭ путем постановки развернутой РА с живой и гретой культурами (при 100°С в течение I часа) и групповыми ОК - сыворотками.
4. Проба на чувствительность выделенного штамма к антибиотикам и инкубируют при 37°С 24 час.

У этап

1. Учет результатов всех тестов.
2. У подвижных штаммов дополнительно определяют Н-антиген в РА на стекле с эшерихиозными Н-сыворотками.
3. Выписывают ответ (заключение):

"Выделены Е. coli. 020:К 84, чувствительные к левомицетину и канамицину, промежуточные к тетрациклину, устойчивые к пенициллину и ампициллину".