Учёт результатов реакции связывания комплемента

Тема практического занятия№7

«Постановка серологических реакций и учет результатов»

Цель: уточнить и закрепить понятия неспецифической и специфической

защиты организма от чужеродных тел и веществ;

закрепить знания о механизме возникновения антител и увидеть

практическое взаимодействие антител с антигеном.

Задачи: знать:

- факторы неспецифической защиты организма,

- факторы специфической защиты организма

- антигены, их свойства и виды,

- антитела, виды иммуноглобулинов.

- виды иммунологических реакций;

уметь:

- провести реакцию агглютинации на стекле;

- провести реакцию преципитации в пробирке;

- прочитать результаты реакций и проанализировать их.

Вопросы для обсуждения:

1. Понятие «иммунология», краткая история развития иммунологии;

2. Неспецифические факторы иммунитета;

3. Ретикуло-эндотелиальная система и виды фагоцитов;

4. Механизм фагоцитоза. Его регуляция. Что усиливает и ослабляет фагоцитоз?

5. Гуморальные факторы неспецифического иммунитета;

6. Понятие «специфический иммунитет». Чем обусловлен специфический

иммунитет?

7. Виды и формы специфического иммунитета;

8. Антигены – какова их химическая структура и способы введения в организм;

9. Свойства антигенов. От чего зависит антигенность;

10. Антигены микробных клеток;

11. Антигены животных микроорганизмов;

12. Антитела. Виды антител (антибактериальные, антитоксические,

антивирусные, противогрибковые, аутантитела, антиклеточные,

естественные);

13. Виды антибактериальных антител, их взаимодействие с антигенами

(агглютинины, преципитины, лизины, опсонины, бактерицидные);

14. Химическая природа антител. Виды иммуноглобулинов и их значение.

15. Взаимодействие между антигеном и антителом; использование

серологических реакций.

16.Виды серологических реакций, применение иммунных реакций в медицине:

a) реакция агглютинации;

б) реакция преципитации;

в) реакция нейтрализации;

г) реакция лизиса;

д) реакция связывания компонента.

Самостоятельная работа

1) Постановка реакции агглютинации на стекле и анализ результата;

2) Постановка реакции преципитации в пробирке и анализ результата;

3.Постановка реакции связывания комплемента и анализ результата.

Задание №1№ 1

Методика постановки реакции агглютинации на стекле (алгоритм):

-На предметное стекло нанесите три капли физ.раствора пипеткой №1;

-Пипеткой №2 в первую и вторую каплю добавьте каплю иммунной

сыворотки

-Во вторую и третью каплю стерильной петлѐй возле зажжѐнной

спиртовки добавьте по капле культуры бактерий, перемешивая капли. 

-Остаток микроорганизмов сожгите над спиртовкой;

-Определите результат реакции, отметьте ее положительный или

отрицательный результат. О чем свидетельствует:

а) положительный результат____________________________________________________________________________________________________________________________

в)отрицательный результат____________________________________________________________________________________________________________________________

Сделайте вывод и зарисуйте результат реакции.

Схема расположения капель на стекле:

Условные обозначения:

Ф- физраствор;

С – иммунная сыворотка;

К – культура микроорганизмов.

Выполнение работы.

…………………………………………………………………………………………

………………………………………………………………………………………

Задание №2.

Алгоритм развернутой реакции агглютинации (в пробирках- на примере реакции Хеддельсона)

1.Разлить в пробирки по…………………изотонического раствора………………

2.Долить в первую пробирку……………… сыворотки, разведенной…………….

3.Перенести ……………… из первой пробирки во вторую, из второй в третью пробирку и так далее (от ……….. до………. и более)

4.Внести в каждую пробирку………….. капли двухмиллиардной взвеси бактерий.

5.Контрольные пробирки -………………………….и исследуемая сыворотка без него.

6.Пробирки энергично встряхнуть и поместить в термостат на…………..при температуре…………………

Предварительный учет результатов

1.Положительная реакция -……………………. в контрольных пробирках и наличие ……………………… в двух-трех и более пробирках.

Окончательный учет результатов:

Результаты учитывают через……………………, выдерживая штатив с пробирками при……………..температуре. Интенсивность реакции выражается плюсами:

«………………….»- сыворотка прозрачная, с хлопьевидным осадком склеившихся бактерий на дне пробирки;

«………………..», «………………», «…………..» - уменьшение бактериального осадка с убывающим просветлением сыворотки.

Задание №3.

Методика постановки реакции преципитации (алгоритм).

1.Смыв кровяного пятна используйте в качестве антигена и осторожно наслаивайте его пастеровской пипеткой на преципитирующую сыворотку.

2.Для контроля смыв кровяного пятна наслаивайте на нормальную сыворотку и физиологический раствор.

3.Реакция считается положительной, если на границе двух жидкостей

образуется мутное кольцо преципитирующего белка.

4.Опишите результаты реакции. Проанализируйте их и сделайте вывод.

5.Зарисуйте реакцию кольцепреципинации.

Выполнение работы:

…………………………………………………………………………………………

Задание № 4

Инструктаж: выбрать и вписать необходимые компоненты для этапов реакции связывания комплемента (РСК).

1 этапреакции связывания комплемента

Инструктаж: дополнить

Поставить пробирки в термостат(t=) на ……………………..

2 этапреакции связывания комплемента

Поставить пробирки в термостат(t=) на……………...

Затем провести учет результатов

Учёт результатов реакции связывания комплемента

«++++»………………………………реакция с полной задержкой гемолиза, жидкость в пробирке…………………….., все эритроциты……………………;

«+++», «++»………………, отличается……………….окраски жидкости вследствие…………………….и……………………количества………………. в осадке;

«+»…………………….реакция, жидкость интенсивно окрашена, на дне пробирки незначительное количество эритроцитов;

«-» наблюдается полный ………………, жидкость в пробирке имеет интенсивно - ………………..окраску («……………….. кровь»)

Оценка_____________________Преподаватель_______________________

Дата________________

Учёт результатов реакции связывания комплемента

Поиск по сайту