1. Стафилококки. Морфологические, культуральные свойства. Факторы патогенности.
2. Экзотоксины стафилококков, разновидности, механизм действия.
3. Бактериологическая диагностика стафилококковых заболеваний.
4. Заболевания, вызываемые стафилококками.
5. Стрептококки, морфологические, тинкториальные, культуральные свойства. Классификация по отношению к эритроцитам.
6. Заболевания, вызываемые стрептококками. Роль стрептококков в развитии кариеса и других заболеваний полости рта.
7. Факторы патогенности стрептококков. Особенности патогенеза стрептококковых заболеваний.
8. Бактериологическая диагностика стрептококковых заболеваний.
9. Основные свойства энтерококков, роль в патологии человека.
10. Менингококки, основные свойства, вызываемые заболевания.
11. Гонококки, основные свойства, вызываемые заболевания.
12. Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции.
13. Микробиологическая диагностика гонококковой инфекции.
14. Микоплазмы, основные свойства, роль в патологии человека.
15. Коринебактерии дифтерии, основные свойства. Экзотоксин, действие на организм.
16. Патогенез и клинические проявления дифтерии.
17. Микробиологическая диагностика дифтерии.
18. Актиномицеты, основные свойства, значение в стоматологии.
19. Микобактерии, основные свойства, патогенные виды, классификации по скорости роста и фотоактивации пигментообразования.
20. Туберкулезная палочка, особенности химического состава, факторы патогенности.
21. Особенности патогенеза и иммунитета при туберкулезе.
22. Микробиологическая диагностика туберкулеза.
23. Возбудитель проказы, основные свойства. МБ диагностика проказы.
24. Облигатные (строгие) анаэробы, состав группы. Распространенность в полости рта.
25. Клостридии, основные свойства, вызываемые ими заболевания.
26. Методы культивирования строгих анаэробов.
27. Причины чувствительности строгих анаэробов к молекулярному кислороду воздуха.
28. Сальмонеллы, основные свойства, вызываемые заболевания.
29. Классификация пищевых отравлений.
30. Представители каких семейств бактерий вызывают пищевые токсикоинфекции?
31. Антигенная классификация сальмонелл Кауфмана-Уайта.
32. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых сальмонеллами.
33. Шигеллы, основные свойства, классификация.
34. Особенности патогенеза и клиники дизентерии.
35. Микробиологическая диагностика дизентерии.
36. Биологическое, санитарное и медицинское значение кишечной палочки.
37. Эшерихиозы, определение понятия, классификация по категориям.
38. ETEC, факторы патогенности, особенности патогенеза и клиники.
39. EIEC, факторы патогенности, особенности патогенеза и клиники.
40. EPEC, факторы патогенности, особенности патогенеза и клиники.
41. EHEC, факторы патогенности, особенности патогенеза и клиники.
42. Микробиологическая диагностика эшерихиозов.
43. Холерный вибрион, основные свойства.
44. Факторы патогенности холерного вибриона. Холероген, структура, механизм действия.
45. Антигенные свойства холерного вибриона, серовары.
46. Отличия холерного вибриона от холероподобных вибрионов.
47. Особенности 7-й пандемии холеры.
48. Микробиологическая диагностика холеры.
49. Принципы лечения острых диарейных заболеваний.
50. Возбудитель сифилиса, морфология, основные свойства.
51. Особенности иммунитета при сифилисе. Клинические проявления сифилиса в полости рта.
52. Методы микробиологической диагностики сифилиса.
53. ИППП, возбудители, особенности эпидемиологии и клиники.
54. Возбудители уреаплазмоза и урогенитального хламидиоза. Общая характеристика.
ЗАНЯТИЕ № 13
Дата________________
Тема: ПАРОДОНТОПАТОГЕННАЯ МИКРОФЛОРА. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫИЗУЧЕНИЯ МИКРОФЛОРЫПРИ БОЛЕЗНЯХ ПАРОДОНТА. ТАКТИКА АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ ТЕРАПИИ АНАЭРОБНОЙ ИНФЕКЦИИ ЧЕЛЮСТНО-ЛИЦЕВОЙ ОБЛАСТИ
План занятия
1. Разбор основных форм воспалительных заболеваний пародонта, их классификация.
2. Знакомство с особенностями взятия материала при заболеваниях пародонта.
3. Морфология пародонтопатогенных бактерий. Микроскопия препаратов-мазков из культур патогенных анаэробов.
Методические указания
1. Разбор основных форм воспалительных заболеваний парадонта, их классификация.
Сформулировать и записать определения основных форм воспалительных заболеваний пародонта
Гингивит _______________________________________________________
____________________________________________________________________
Пародонтит_____________________________________________________
____________________________________________________________________
Пародонтоз _____________________________________________________
____________________________________________________________________
Какие воспалительные заболевания пародонта не перечислены выше, назовите и дайте определение.
2. Знакомство с особенностями взятия материала
при заболеваниях пародонта
Особенности забора материала от больного заболеваниями пародонта связаны с тем, что большинство возбудителей является строгими анаэробами. Гнойный экссудат из закрытого очага (абсцесс) забирают шприцом, иглу которого после забора материала втыкают в резиновую пробку и как можно быстрее доставляют в лабораторию. Рекомендуется использовать специальные транспортные среды, ограничивающие размножение микробов и содержащие вещества, редуцирующие свободный кислород (тиогликолевая, среды Стюарта).
Забор десневой жидкости.
Из десневого желобка, патологического десневого кармана десневую жидкость можно брать маленькой стерильной кюретажной ложечкой, скейлером. Десневую жидкость можно собирать по принципу капиллярности стерильной микропипеткой, стерильными фильтровальными полосками, стерильными нитками.
Забор материала из десневого кармана для бактериоскопического
исследования.
В десневом кармане часть бактерий находится в фиксированном, состоянии на поверхности корня (зубная бляшка), а другие - в свободном состоянии в десневой жидкости. Поэтому забор материала можно проводить на целлулоидные узкие пластинки, которые осторожно вводят в карман и прижимают к поверхности корня со стороны десны. С внутренней стороны пластинки прилипают микробы с корневой части зуба, с наружной - свободно находящиеся в десневой жидкости микробы.
С удаленных зубов можно сделать соскобы или приготовить гистологические срезы.
Субгингивальную зубную бляшку из пародонтального кармана можно получить острым зондом, ортодонической заостренной проволокой. Перед посевом ее необходимо дезинтегрировать, т.к. точность определения количества и видов бактерий в бляшке зависит от тщательности дисперсии материала.
3. Проведите микроскопическое исследование соскоба со слизистой оболочки десны, полученного от больного с клиническим диагнозом: «катаральный гингивит» (окраска по Граму), зарисовать.
Для микроскопического исследования взятого материала используют темнопольную, иммерсионную и люминесцентную микроскопии.
Проведите микроскопическое исследование материала, полученного от больного с клиническим диагнозом: «катаральный гингивит». Полученные результаты зарисовать.
| Рис.1. Микропрепарат от больного катаральным гингивитом. Окраска по Граму. |
Гингивит характеризуется воспалением слизистой оболочки десны, обусловленным неблагоприятным воздействием как местных, так и общих факторов и протекает без нарушения целостности зубоэпителиального прикрепления, т.е. без образования зубодесневых карманов.
При развитии патологического процесса наблюдается превалирование грамотрицательных микроорганизмов (фузобактерии, бактероиды, кампилобактерии) над грамположительными (стрептококками).
Фузобактерии - веретенообразные тонкие палочки с заостренными концами. Размер 0,5-1x2-3 мкм. В мазках располагаются одиночно, реже образуют короткие цепочки из 2 или 3 клеток. Грамотрицательные.
Бактероиды - прямые или изогнутые палочки, размер 0,5-0,8x1-2 мкм. В мазках располагаются одиночно, парами или небольшими цепочками. Грамотрицательные.
Кампилобактерии - тонкие спиральные клетки диаметром 0,2-0,5 мкм и длиной 0,5-5,0 мкм. Могут иметь один или больше витков спирали и достигать длины 8 мкм. Характерна такжеS-образная форма и форма типа крыльев чайки, возникающие при соединении двух клеток в короткую цепочку. Грамотрицательные.
Стрептококки – сферические клетки размером 0,5-2,0 мкм. В мазках распологаются парами или цепочками. Грамположительные.
Контрольные вопросы
1. Какие воспалительные заболевания пародонта Вам известны?
2. Каковы этиологические факторы и патогенез различных форм гингивитов, пародонтитов, пародонтозов?
3. Методы микробиологического исследования в стоматологической практике.
4. Каковы возможные источники и пути передачи инфекции?
5. Какие основные представители резидентной микрофлоры при отсутствии патологии тканей пародонта Вам извествны?
6. Назовите особенности состава микрофлоры при гингивите.
7. Кто входит в состав микрофлоры при пародонтите?
8. Пародонтопатогенные микробы (Porphyromonas gingivalis, Prevotella melaninogenica). Доказательства их участия в патогенезе заболевания.
9. Каковы механизмы и условия возникновения заболеваний пародонта?
10. Как осуществляют взятие материала из десневого желобка и пародонтальных карманов?
11. Какие методы изучения количественного и качественного состава микрофлоры десневого желобка и пародонтальных карманов Вам известны?
12. Какие заболевания относятся к пародонтопатиям?
13. Опишите микробные факторы, влияющие на возникновение заболеваний пародонта.
14. Охарактеризуйте иммунопатологические механизмы в развитии заболеваний пародонта.
15. Какие методы и материал используются для исследования микрофлоры при заболеваниях пародонта?
ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 13
МИКРОФЛОРА ПАРАДОНТА ПРИ ОТСУТСТВИИ ПАТОЛОГИЙ
Ткани здорового пародонта связаны с довольно ограниченной флорой, расположенной под десной на поверхности зуба. Микробы пародонта составляют слой толщиной от 1 до 20 клеток. Исследование в области десневого желобка выявило довольно тонкий слой (около 60 нм.), состоящий на 3/4 из грамположительных кокков. Вместе с палочками они составляют 90 % популяции. Спирохеты встречаются редко - около 1,8 %. Соотношение подвижных форм к неподвижным составляет в здоровых тканях – 1/49.
В десневом желобке бляшка состоит в основном из грамположительных факультативных анаэробных кокков (стрептококки, в меньших количествах - стафилококки, пептострептококки) и палочек (актиномицеты: A. israelii, A. naeslundii, A. viscosus, A. odontolyticus, а также пропионибактерии).
ПАРАДОНТОПАТОГЕННЫЕ МИКРОБЫ
В патогенезе воспалительных заболеваний пародонта имеется взаимодействие двух патогенетических механизмов: воздействие анаэробной микрофлоры и иммунологической реактивности организма человека.
Согласно рекомендациям ВОЗ 1994-1995 гг., среди резидентной микрофлоры полости рта с анаэробным типом дыхания следует выделять т.н. пародонтопатогенные виды, которые отличаются от других высокими адгезивными, инвазивными и токсическими свойствами по отношению к тканям пародонта. К ним относятся:
1. Грамнегативные анаэробные бактерии группы бактероидов (Porphyromonas gingivalis, Prevotella melaninogenica, Tannerella forsythensis (ранее Bacteroides forsythus)), в меньшей степени - спирохеты и фузобактерии.
2. Грампозитивные анаэробные бактерии группы актиномицетов, в меньшей степени - пептострептококки.
Доказано, что развитие пародонтита наиболее часто ассоциируется с увеличением количества и персистенцией в тканях пародонта следующих видов бактерий: Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythensis (ранее Bacteroides forsythus), Aggregatibacter (ранее Actinobacillus) actinomycetemcomitans. Это пародонтопатогенные виды 1-го порядка. Они обладают высокой степенью адгезии к эпитериальным клеткам и коагрегации с грамположительными бактериями. Prevotella intermedia, Treponema denticola, Actinomyces israelii, Peptococcus niger, Peptostreptococcus micros и др. относятся к пародонтопатогенным видам 2-го порядка и оказывают действие при значительном увеличении числа микроорганизмов.
Эксперименты на различных животных, в том числе на гнотобионтах, показали, что бактероиды полости рта (Porphyromonas gingivalis, Prevotella melaninogenica и др.) являются необходимым фактором для начала воспалительного процесса. Грамотрицательные бактерии, выделенные из пародонтального кармана, вызывали у животных резорбцию альвеолярной кости, тогда как грамположительные бактерии вызывали лишь образование большого количества зубного налёта и незначительную резорбцию кости.
Пародонтопатогенные микроорганизмы обладают широким спектром факторов патогенности, что позволяет им индуцировать длительный воспалительный процесс. К ним относят:
· Факторы адгезии - способность прилипать в большом количестве к эпителиальным клеткам, гидроксиапатиту и к грамположительным бактериям. Их адгезивные свойства ингибируются в присутствии слюны и сыворотки крови. Однако способность к коагрегации с грамположительными бактериями при этом не ингибируется.
· Факторы инвазии – продукция гистолитических ферментов: гиалуронидаза, ДНК-аза, РНК-аза, коллагеназа, протеаза.
· Токсические факторы – грамотрицательные бактерии содержат эндотоксин, вырабатывают цитотоксические субстанции, включающие жирные кислоты, индол, амины, аммиак и др. Все эти вещества в той или иной степени оказывают разрушающее действие на ткани пародонта. Бактероиды выделяют летучие серные соединения, которые увеличивают проницаемость слизистой полости рта. Кроме того, благодаря содержанию специфических липополисахаридов, грамотрицательные микробы могут явиться причиной иммунопатологических механизмов, которые приводят к деструкции костной ткани. Такими свойствами in vitro обладают некоторые виды бактероидов, фузобактерии и др., что было установлено с помощью реакций бласттрансформации лимфоцитов.
· Протективные свойства, т.е. способность противодействовать защитным силам макроорганизма. Это свойство обеспечивается полисахаридной капсулой грамотрицательных микробов, ферментами, способными расщеплять иммуноглобулины и фракции комплемента.
Многие виды бактероидов способны продуцировать ферменты, инактивирующие антибиотики, что затрудняет лечение.
МИКРОФЛОРА ПРИ ГИНГИВИТЕ
Общее число микробов при гингивите в 10-20 раз больше, чем в здоровом пародонте. Ещё до появления клинических симптомов микроскопия позволяет выявить изменения состава микрофлоры: увеличение грамотрицательной флоры и смена кокковой флоры палочковидными формами. В этом смысле доклиническую фазу воспалительных заболеваний пародонта можно рассматривать как своеобразный дисбактериоз, к которому ведут неправильный образ жизни, обменные нарушения в тканях пародонта, эндокринные дисфункции.
При длительном гингивите поддесневая флора характеризуется увеличением количества грамотрицательных палочек: фузобактерии, бактероиды и др. составляют около 45% всей культивируемой флоры. Грамположительные факультативно-анаэробные палочки, в основном, Actinomyces naeslundii, A. viscosus, A. israelii обнаруживаются с частотой около 25%. В небольших количествах выделяются пропионибактерии и эубактерии. В 27% случаев обнаруживаются грамположительные факультативно-анаэробные стрептококки.
МИКРОФЛОРА ПРИ ПАРОДОНТИТЕ
К развитию пародонтита приводит сбой в функционировании защитных механизмов организма и изменения в составе и количестве микрофлоры пародонтального кармана.
При пародонтите выявляется значительный сдвиг в сторону палочковидных форм и спирохет, количество которых возрастает до 40%. Соотношение подвижных форм к неподвижным увеличивается до 1:1 (в норме 1:49). К цементу прикреплены, в основном, грамположительные микробы, грамотрицательные – присутствуют в неплотных слоях поддесневой бляшки, которая распространяется до верхушечной части кармана.
При пародонтите преобладают грамотрицательные анаэробные палочки (Porphyromonas gingivalis, Prevotella melaninogenica, Fusobacterium nucleatum и др). Однако у некоторых больных наблюдается превалирование актиномицетов.
МЕХАНИЗМ И УСЛОВИЯ ВОЗНИКНОВЕНИЯ ЗАБОЛЕВАНИЙ
ПАРАДОНТА
В патогенезе болезней пародонта существенная роль принадлежит микробным факторам и иммунопатологическим механизмам – иммунокомплексному и клеточному.
Для развития заболеваний пародонта должны сочетаться следующие условия:
1. Присутствие пародонтопатогенных видов бактерий в количестве достаточном для того, чтобы начался патологический процесс.
2. Условия обитания в нише должны способствовать росту и размножению бактерий (достаточное количество питательных веществ, ростовых факторов, низкий ОВП).
3. В тканях пародонта должны отсутствовать микробы-антагонисты пародонтопатогенных бактерий.
4. Микроб должен пространственно локализоваться так, чтобы он или продукты его жизнедеятельности могли действовать на клетки-мишени.
5. Организм человека должен быть чувствительным к микробам или продуктам их жизнедеятельности.
6. Развитие иммунопатологических реакций. При исследовании содержимого десневого кармана у больных пародонтитом определяются иммуноглобулины классов A,G,M, фракции комплемента С3, С5, лейкоциты. Ткани десны обильно инфильтрированы плазматическими клетками, лимфоцитами, макрофагами (моноцитами). Всё это позволяет считать, что многие реакции антиген-антитело, проявления клеточного иммунитета происходят именно здесь, в тканях пародонта и альвеолярной кости.
Иммунопатогенез пародонтопатий можно разделить на две фазы: обратимую и необратимую.
Обратимая фаза связана с нормальным иммунным ответом защитного характера со стороны местных тканей. Её механизм обуславливается усиленным размножением грамотрицательных бактерий в десневых карманах и зубных бляшках. Микробные ферменты разрыхляют непроницаемый для бактерий барьер – краевой эпителий десны и создают условия для трансфузии эндотоксинов в соединительную ткань. Микробные антигены, продукты распада клеток и обменные продукты зубной бляшки провоцируют усиленную миграцию сегментоядерных лейкоцитов и макрофагов в краевой эпителий. По мере накопления специфических антител (IgM, IgG) они образуют иммунные комплексы с персистирующими антигенами микробной природы, что должно способствовать очищению от них слизистой оболочки рта. Захват и деградацию иммунных комплексов и продуктов их распада осуществляют мигрирующие в очаг воспаления фагоциты, активированные лимфокинами.
Обратимая фаза клинически проявляется признаками местного воспаления - гингивита. Своевременное лечение прекращает массивное поступление антигенов и останавливает или ликвидирует воспаление десны. Однако если массивное поступление микробных антигенов не прекращается, мобилизованные защитные механизмы могут привести к деструкции тканей. Это происходит в связи с освобождением фагоцитирующими клетками лизосомальных ферментов, среди которых наиболее активны протеиназы: коллагеназа и эластаза. Они способны расщеплять денатурированный коллаген пародонтальной соединительной и костной тканей. При этом эпителий набухает, теряет прочную связь с твёрдыми тканями зуба. В результате образуется патологический десневой карман, который служит входными воротами для вторичной гнойной инфекции. В этом случае гингивит переходит в пародонтит.
Необратимая, иммунопатологическая, фаза, прежде всего, связана с сенсибилизацией Т-лимфоцитов аутоантигенами, образующимися при деструкции пародонта. Важную роль играют при этом микробные эндотоксины, которые усиливают сенсибилизацию лимфоцитов, а также могут вызывать поликлональную активацию В-лимфоцитов. Таким образом, формируются механизмы аутоагрессии, приводящие к прогрессирующему, рецидивирующему, необратимому течению пародонтита с атрофией остеоцитов и альвеолярных отростков челюсти.
Понимание этиологии и патогенеза пародонтита необходимо не только для установления роли микробов в этом процессе, но также и для выяснения условий, способствующих росту бляшки, определению роли местных и системных факторов, которые могут влиять на резистентность или чувствительность тканей пародонта к бактериям, продуктам их жизнедеятельности и значению индивидуальных особенностей организма хозяина в функционировании деструктивных и защитных механизмов.
МЕТОДЫИЗУЧЕНИЯ МИКРОФЛОРЫПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ
ПАРОДОНТА
При диагностике заболеваний пародонта используют бактериоскопический и бактериологический методы. В настоящее время активно разрабатывается молекулярно-биологический метод (ПЦР). Существующие диагностические наборы позволяют определить 5 основных пародонтопатогенных видов микроорганизмов.
Материалом для исследования может служить десневая жидкость, субгингивальная зубная бляшка.
ЗАНЯТИЕ № 14
Дата________________
Тема: ИЗУЧЕНИЕ МИКРОФЛОРЫГНОЙНОГО ОТДЕЛЯЕМОГО ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЧЕЛЮСТНО-ЛИЦЕВОЙ ОБЛАСТИ. ТЕХНИКА АНАЭРОБНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ БАКТЕРИЙ С КОЛИЧЕСТВЕННЫМ УЧЕТОМ. СПОСОБЫИДЕНТИФИКАЦИИ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ АНАЭРОБОВ К АНТИБИОТИКАМ
План занятия
1. Разбор основных форм воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области.
2. Микроскопическое исследование экссудата, полученного от больного с клиническим диагнозом: «остеомиелит нижней челюсти».
3. Знакомство с бактериологический метод исследования гнойного отделяемого при воспалительных заболеваниях челюстно-лицевой области. Определение чувствительности анаэробов к антибиотикам.
Методические указания
1. Разбор основных форм воспалительных заболеваний челюстно-лицевой области.
Дать определение:
Пульпит ____________________________________________________________
____________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
Периодонтит __________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
Флегмона _____________________________________________________________
______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
Остеомиелит ___________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
Абсцесс _______________________________________________________________
_______________________________________________________________________
_______________________________________________________________________
Периостит _____________________________________________________________
_______________________________________________________________________
______________________________________________________________-_________
2. Микроскопическое исследование экссудата, полученного от больного с клиническим диагнозом: «остеомиелит нижней челюсти».
Провести микроскопическое исследование экссудата, полученного от больного с клиническим диагнозом: «остеомиелит нижней челюсти» (окраска по Граму). Полученные результаты занесите в протокол и сделайте вывод.
Таблица 1. Морфология и тинкториальные свойства микроорганизмов в микропрепарате полученного от больного с «остеомиелитом нижней челюсти»
| № | Морфология | Отношение к окраске по Граму |
Вывод:_________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
3. Знакомство с бактериологический метод исследования гнойного отделяемого при воспалительных заболеваниях челюстно-лицевой области.
Основная роль в развитии воспалительных заболеваний полости рта и челюстно-лицевой области принадлежит неспорообразующей анаэробной и микроаэрофильной резидентной микрофлоре полости рта. Поэтому при бактериологической диагностике проводят поэтапное исследование патологического материала в аэробных и анаэробных условиях, с обязательным определением концентрации микроорганизмов в исследуемом материале. Для создания анаэробных условий используют различные методы (см. занятие № 5, Часть I).
Материалом для бактериологического исследования служат кусочки пораженных тканей и отделяемое, полученные из глубины раны, пунктаты из ограниченных очагов воспаления (абсцессов, флегмон). При взятии материала необходимо исключить их контаминацию посторонней микрофлорой. Взятый исследуемый материал должен быть защищен от токсического действия молекулярного кислорода, поэтому при их доставке в лабораторию необходимо соблюдать следующие: 1) при большом количестве гнойного отделяемого (5-7 мл) его транспортируют в стерильной пробирке закрытой резиновой пробкой или непосредственно в шприце; 2) при небольшом количестве исследуемого материала его забирают с помощью шприца или стерильного ватного тампона и немедленно помещают в транспортную питательную среду. Можно также использовать для доставки материала в лабораторию флаконы или пробирки, заполненные инертным газом или бескислородной газовой смесью.
Концентрацию микроорганизмов в исследуемом материале проводят определяя КОЕ (число выросших колоний на единицу количества исследуемого материала). Для определения КОЕ можно использовать два метода:
1. Метод разведения материала в жидкой питательной среде. Исследуемый материал разводят в 10, 100, 1000 и т.д. раз, а затем делают посевы на отдельные чашки.
2. Метод посева по Гольду. После предварительного перемешивания исследуемого материала в транспортной среде, производят посев в первый сектор чашки Петри и тщательно растирают петлей. Затем петлю прожигают и из первого сектора производят три штриха во второй сектор, далее также в третий и четвертый.
Эмпирически установлено, что в каждом последующем секторе концентрация микробов уменьшается на два порядка. Например, при получении 13 колоний во втором секторе концентрация жизнеспособных бактерий в исследуемом объеме материала составит 13×104КОЕ.
Дальнейшее бактериологическое исследование проводят по общепринятой методике (см. занятие № 1 Часть I).
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам см Часть I, занятие 4.
1. Метод посева по Гольду. После предварительного перемешивания исследуемого материала в транспортной среде, производят посев в первый сектор чашки Петри и тщательно растирают петлей. Затем петлю прожигают и из первого сектора производят три штриха во второй сектор, далее также в третий и четвертый.
Эмпирически установлено, что в каждом последующем секторе концентрация микробов уменьшается на два порядка. Например, при получении 13 колоний во втором секторе концентрация жизнеспособных бактерий в исследуемом объеме материала составит 13×104КОЕ.
Провести подсчет выросших изолированных колоний на чашке Петри с 5 % кровяным сердечно-мозговым агаром в последнем секторе, определить общее количество жизнеспособных бактерий в 1 мл материала (КОЕ/мл, колониеобразующие единицы), пользуясь формулой:
N = n x 10K, N – общее число бактерий;
n – число колоний в последнем секторе;
k – показатель степени 2,4,6 соответственно для секторов 1,2 или 3.
Количественное число 105 КОЕ/мл для экссудата из «закрытого» воспалительного очага и 106 – 107для слизистой полости рта.
Вывод: ______________________________________________________________
____________________________________________________________________
Контрольные вопросы
1. Какие гнойно-воспалительные заболевания челюстно-лицевой области Вам известны?
2. Что такое одонтогенное воспаление?
3. Каковы этиологические факторы и патогенез различных форм одонтогенного воспаления?
4. Методы микробиологического исследования гнойного отделяемого при воспалительных заболеваниях челюстно-лицевой области?
5. Микроорганизмы какого типа дыхания преобладают при одонтогенном воспалении? Какие проблемы диагностики это создает?
6. Какие основные представители резидентной микрофлоры при одонтогенной инфекции Вам извествны?
7. Назовите особенности состава микрофлоры при остиомиелите.
8. Кто входит в состав микрофлоры при пульпите, абсцессах, флегмонах?
9. Какие методы изучения количественного и качественного состава возбудителей остеомиелита?
10. Какие методы и материал используются для исследования возбудителей при остиомиелите?
11. Как создать анаэробные условия?
ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 14
ОСНОВНЫЕ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ПАТОЛОГИИ ЧЕЛЮСТНО-ЛИЦЕВОЙ ОБЛАСТИ
Таблица 2. Основные одонтогенные патологии
| Характер процесса | Клинические проявления | Группы бактерий, участвующих в процессе |
| Острые одонтогенные воспалительные заболевания | Абсцесс, флегмона, остеомиелит, лимфааденит | Бактероиды, фузобактерии, пептострептококки, пептококки, реже актиномицеты, стафилококки |
| Хронические одонтогенные воспалительные заболевания | Хронический периодонтит, остеомиелит, актиномикоз | Ассоциации облигатных анаэробных бактерий с факультативными анаэробами (стафилококки, бациллы, стрептококки), аэробные и анаэробные актиномицеты (ротии, нокардии и стрептомицеты) |
| Неодонтогенные воспалительные заболевания | Фурункул, негноившаяся атерома, инфицированные травмы челюстно-лицевой области | Преобладание стафилококков, стрептококков, реже бацилл и облигатных анаэробов, часто выделются монокультуры |
ОСОБЕННОСТИ ПРИ БАКТЕРИОСКОПИЧЕСКОМ ИССЛЕДОВАНИИ ОДОНТОГЕННОЙ МИКРОФЛОРЫ
Гнойное воспаление в области периодонта, нагноение кисты челюсти под воздействием различных факторов проникает под надкостницу или в толщу кости челюсти, что приводит к развитию остеомиелита.
В экссудате от больного при микроскопическом исследовании обнаруживают одновременно ассоциации 3-5 и более видов грамотрицательных, облигатно-анаэробных бактерий (порфиромонады, превотеллы) или их сочетание с грамположительными, факультативными анаэробами (чаще – стафилококками или стрептококками) и грамотрицательными аэробами (синегнойной палочкой).
Порфиромонады и превотеллы - короткие палочки, коккобактерии, в мазках располагаются хаотично. Грамотрицательные.
Стафилококки – кокки, размером 0,5-1,5 мкм. В мазках располагаются одиночно, парами или гроздьями. Грамположительные.
Стрептококки – кокки, размером 0,5-2,0 мкм. В мазках располагаются парами или цепочками. Грамположительные.
Псевдомонады – небольшие палочки, размер 0,5-1x1-3 мкм. В мазках располагаются одиночно, парами, либо короткими цепочками. Грамотрицательные.
Для микроскопического исследования взятого материала используют темнопольную, иммерсионную и люминесцентную микроскопии.
Особенности диагностики анаэробных инфекций челюстно-лицевой области
Исследуемый материал
Лабораторная диагностика анаэробной инфекции является достаточно трудной задачей. Время исследования с момента доставки патологического материала из клиники в микробиологическую лабораторию и до получения полного развернутого ответа составляет от 7 до 10 суток, что не может удовлетворять клиницистов. Успешное начало исследований в клинической микробиологии анаэробной инфекции зависит от правильного сбора соответствующего клинического материала.
В обычной лабораторной практике наиболее часто используются следующие материалы: 1) локальный материал при стоматологических заболеваниях; 2) содержимое поверхностных абсцессов: 3) содержимое поверхностных ран; 4) материал инфицированных ран (хирургических и травматических); 12) биоптаты